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基于氟化聚乙烯亚胺构建高效递送载体实现Cdh 23全长质粒在HEI-OC1细胞中的转染
1
作者
李冰倩
李木兰
+3 位作者
夏淼
刘真
王兰
马朋
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第9期1349-1359,共11页
CDH 23基因是Usher综合征中USH1D亚型的致病突变基因,本研究构建2种不同启动子的野生型Cdh 23全长质粒(~16 kb),利用氟化聚乙烯亚胺(fluorinated-polyethyleneimine,FPEI)作为递送载体对小鼠听觉细胞系(house ear institute-organ of co...
CDH 23基因是Usher综合征中USH1D亚型的致病突变基因,本研究构建2种不同启动子的野生型Cdh 23全长质粒(~16 kb),利用氟化聚乙烯亚胺(fluorinated-polyethyleneimine,FPEI)作为递送载体对小鼠听觉细胞系(house ear institute-organ of corti 1,HEI-OC1)进行转染,通过评价体外转染效果,获得最佳表达质粒。首先,利用傅里叶变换红外吸收光谱对FPEI的合成结果进行分析,证明FPEI的成功合成。之后,通过琼脂糖凝胶阻滞实验、Zeta电位实验、动态光散射实验分别对FPEI的质粒包裹能力、形成复合物的表面电位和水合直径进行表征,证明FPEI具有良好的质粒包裹能力,在高质量比时FPEI质粒复合物均带正电,粒径分布在100~300 nm之间。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)和流式细胞术验证了FPEI在HEI-OC1细胞中的低细胞毒性和高转染效率。同时将FPEI与Lipofectamine 3000及不同质量的PEI(25K、40K)转染试剂进行比较,发现FPEI的转染效率显著优于上述试剂。实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)及Western印迹结果表明,CAG启动子效果优于CMV启动子,可作为最佳表达质粒进行后续体内研究。此外,细胞免疫荧光染色证实过表达的CDH23主要分布于细胞质中。以上结果证明,FPEI可作为以Cdh 23为代表的大基因体外过表达的高效递送载体,这为后续USH1D综合征体内基因治疗提供了重要的实验依据。
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关键词
氟化聚乙烯亚胺
Cdh
23
基因
大基因过表达
HEI-OC1细胞
USH1D综合征
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职称材料
题名
基于氟化聚乙烯亚胺构建高效递送载体实现Cdh 23全长质粒在HEI-OC1细胞中的转染
1
作者
李冰倩
李木兰
夏淼
刘真
王兰
马朋
机构
滨州医学院特殊教育与康复学院听觉言语康复科学研究院
滨州医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科
滨州医学院医学基础医学院遗传学与细胞生物学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025年第9期1349-1359,共11页
基金
山东省自然科学基金重点项目(No.ZR2020KH025)
山东省自然科学基金青年项目(No.ZR2023QH402)资助。
文摘
CDH 23基因是Usher综合征中USH1D亚型的致病突变基因,本研究构建2种不同启动子的野生型Cdh 23全长质粒(~16 kb),利用氟化聚乙烯亚胺(fluorinated-polyethyleneimine,FPEI)作为递送载体对小鼠听觉细胞系(house ear institute-organ of corti 1,HEI-OC1)进行转染,通过评价体外转染效果,获得最佳表达质粒。首先,利用傅里叶变换红外吸收光谱对FPEI的合成结果进行分析,证明FPEI的成功合成。之后,通过琼脂糖凝胶阻滞实验、Zeta电位实验、动态光散射实验分别对FPEI的质粒包裹能力、形成复合物的表面电位和水合直径进行表征,证明FPEI具有良好的质粒包裹能力,在高质量比时FPEI质粒复合物均带正电,粒径分布在100~300 nm之间。通过Cell Counting Kit-8(CCK-8)和流式细胞术验证了FPEI在HEI-OC1细胞中的低细胞毒性和高转染效率。同时将FPEI与Lipofectamine 3000及不同质量的PEI(25K、40K)转染试剂进行比较,发现FPEI的转染效率显著优于上述试剂。实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)及Western印迹结果表明,CAG启动子效果优于CMV启动子,可作为最佳表达质粒进行后续体内研究。此外,细胞免疫荧光染色证实过表达的CDH23主要分布于细胞质中。以上结果证明,FPEI可作为以Cdh 23为代表的大基因体外过表达的高效递送载体,这为后续USH1D综合征体内基因治疗提供了重要的实验依据。
关键词
氟化聚乙烯亚胺
Cdh
23
基因
大基因过表达
HEI-OC1细胞
USH1D综合征
Keywords
fluorinated-polyethyleneimine
cadherin 23 gene
large gene overexpression
HEI-OC1 cell
Usher syndrome type 1D
分类号
Q5 [生物学—生物化学]
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题名
作者
出处
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1
基于氟化聚乙烯亚胺构建高效递送载体实现Cdh 23全长质粒在HEI-OC1细胞中的转染
李冰倩
李木兰
夏淼
刘真
王兰
马朋
《中国生物化学与分子生物学报》
北大核心
2025
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