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大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
1
作者
张秋爽
马宝福
+6 位作者
郑果
林强
梁红茹
牛银杰
罗霞
李宁求
付小哲
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025年第7期18-25,共8页
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重...
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。
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关键词
大口
黑鲈
大口黑鲈双rna病毒
VP2蛋白
多克隆抗体
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职称材料
题名
大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
1
作者
张秋爽
马宝福
郑果
林强
梁红茹
牛银杰
罗霞
李宁求
付小哲
机构
中国水产科学研究院珠江水产研究所
出处
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025年第7期18-25,共8页
基金
广州市重点研发计划项目(2024B03J1263)
中国水产科学研究院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(2024XT0502)。
文摘
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。
关键词
大口
黑鲈
大口黑鲈双rna病毒
VP2蛋白
多克隆抗体
Keywords
largemouth bass
largemouth bass bi
rna
virus(LBBV)
VP2 protein
polyclonal antibody
分类号
S941.41 [农业科学—水产养殖]
S965.211 [农业科学—水产养殖]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
张秋爽
马宝福
郑果
林强
梁红茹
牛银杰
罗霞
李宁求
付小哲
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》
北大核心
2025
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