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大剂量辐射诱导IEC-6细胞差异表达基因消减cDNA文库的构建 被引量：1
1
作者 王锋超 高京生 +9 位作者 粟永萍 徐辉 王军平 艾国平 苑晓燕 楼淑芬 刘晓宏 章波 黄跃生 蒋建新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期10-14,共5页
目的　克隆和鉴定大剂量辐射前后大鼠空肠上皮细胞IEC 6差异表达基因 ,为探索肠上皮细胞辐射损伤修复的分子机制提供线索。方法　IEC 6细胞经 3 5Gyγ射线照射后由抑制性消减杂交 (SSH)方法和T/A克隆技术进行差异表达基因消减cDNA文库... 目的　克隆和鉴定大剂量辐射前后大鼠空肠上皮细胞IEC 6差异表达基因 ,为探索肠上皮细胞辐射损伤修复的分子机制提供线索。方法　IEC 6细胞经 3 5Gyγ射线照射后由抑制性消减杂交 (SSH)方法和T/A克隆技术进行差异表达基因消减cDNA文库的构建 ,用反向Northern杂交法对库中的EST序列进行筛选 ,挑取阳性克隆测序 ,和GenBank比对后挑选有限克隆进行正向Northern杂交进行验证。结果　扩增消减杂交cDNA文库得到约 2 0 0 0个克隆 ,随机选取 96个白色克隆进行PCR扩增 ,用反向Northern杂交法对库中的EST片段进行筛选得到 15个阳性克隆 ,代表 12个基因的转录产物 ,部分基因功能已经明确 ,涉及细胞骨架、细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面 ,另外还获得一新的cDNA序列。结论　SSH法建立了IEC 6细胞差异表达基因消减cDNA文库 ,一次获得多条差异显示EST片段 ,基因种类涉及细胞骨架 ,细胞应激、细胞周期、信号转导等多方面 。 展开更多
关键词 IEC-6 大剂量辐射 抑制性消减杂交 基因文库
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