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洋葱Ms位点多重PCR标记的开发与优化
1
作者
王振宝
霍雨猛
+7 位作者
刘冰江
缪军
杨妍妍
高莉敏
孔素萍
程斐
陈宁
吴雄
《山东农业科学》
2014年第9期7-11,共5页
以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6...
以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6μL、DNA模板1μL(约50 ng)、10μmol/L引物各1μL、5 U/μL rTaq聚合酶0.6μL、用灭菌双蒸水补齐至25μL;反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,65.4℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。优化后的体系和程序可以检测到清晰的目的条带,通过一次PCR反应即可鉴定Ms位点的3种基因型(MsMs、Msms、msms),操作简单,稳定性好。
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关键词
洋葱
雄性不育
Ms位点
多重pcr标记
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职称材料
题名
洋葱Ms位点多重PCR标记的开发与优化
1
作者
王振宝
霍雨猛
刘冰江
缪军
杨妍妍
高莉敏
孔素萍
程斐
陈宁
吴雄
机构
山东省农业科学院蔬菜花卉研究所/山东省设施蔬菜生物学重点实验室/国家蔬菜改良中心山东分中心
青岛农业大学园艺学院
出处
《山东农业科学》
2014年第9期7-11,共5页
基金
国家自然科学基金项目(31201635
31301786)
"十二五"国家科技支撑计划项目(2012BAD02B04)资助
文摘
以本课题组已获得的洋葱Ms位点侧翼序列为基础,设计、筛选引物获得了一个兼容的多重PCR分子标记,并对其反应体系和反应程序进行了优化。优化后的扩增体系:10×PCR buffer(Mg2+free)2.5μL、25 mmol/L MgCl24μL、2.5 mmol/L dNTP 6μL、DNA模板1μL(约50 ng)、10μmol/L引物各1μL、5 U/μL rTaq聚合酶0.6μL、用灭菌双蒸水补齐至25μL;反应程序:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,65.4℃退火45 s,72℃延伸1 min,35个循环;最后72℃延伸10 min。优化后的体系和程序可以检测到清晰的目的条带,通过一次PCR反应即可鉴定Ms位点的3种基因型(MsMs、Msms、msms),操作简单,稳定性好。
关键词
洋葱
雄性不育
Ms位点
多重pcr标记
Keywords
Onion
Male sterility
Ms locus
Multiplex
pcr
- based marker
分类号
S633.203.6 [农业科学—蔬菜学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
洋葱Ms位点多重PCR标记的开发与优化
王振宝
霍雨猛
刘冰江
缪军
杨妍妍
高莉敏
孔素萍
程斐
陈宁
吴雄
《山东农业科学》
2014
0
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