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多重半巢式聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA多聚酶基因
1
作者 周琳 钱景 Harder TC 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2001年第6期272-275,共4页
目的 :探讨多重半巢式聚合酶链反应 ( msn PCR)在研究巨细胞病毒 ( CMV) DNA多聚酶基因 ( UL -54)中的应用价值。方法 :从 8例心肺移植患者血标本中提取 DNA,以 CMV-UL 54为模板 ,自行设计 6条特异性引物 ,建立 msn PCR扩增系统。扩增... 目的 :探讨多重半巢式聚合酶链反应 ( msn PCR)在研究巨细胞病毒 ( CMV) DNA多聚酶基因 ( UL -54)中的应用价值。方法 :从 8例心肺移植患者血标本中提取 DNA,以 CMV-UL 54为模板 ,自行设计 6条特异性引物 ,建立 msn PCR扩增系统。扩增产物在 DNA测序仪上自动测序。结果 :msn PCR能扩增出 42 7bp和 1 0 52 bp两条目的片段 ,扩增产物测序表明存在导致氨基酸改变的碱基有义突变。结论 :msn PCR扩增结合测序 ,可检测 CMV-UL 54的 7个功能区目片段中的碱基突变 ,msn PCR比普通 PCR更加省时和经济。 展开更多
关键词 巨细胞病毒属 器官移植 多重半巢式聚合酶链反应 多聚酶基因 DNA CMV
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快速检测细菌并革兰分型的半巢式聚合酶链反应及其初步应用 被引量：4
2
作者 汤伟 汪晓莺 +1 位作者 马国光 褚少鹏 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第2期164-168,共5页
目的以半巢式聚合酶链反应(PCR)检测细菌及作革兰阴、阳性分型,并与细菌培养法比较。方法以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物(pm1,pm3)和一条革兰阴性型特异性引物(pm2),以半巢式PCR方法扩增实验室保留菌株的DNA并作出革兰染... 目的以半巢式聚合酶链反应(PCR)检测细菌及作革兰阴、阳性分型,并与细菌培养法比较。方法以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物(pm1,pm3)和一条革兰阴性型特异性引物(pm2),以半巢式PCR方法扩增实验室保留菌株的DNA并作出革兰染色分型;以人类外周血白细胞基因组DNA、HBVDNA阳性血清以及白假丝酵母菌为对照,检测此方法的特异性;采用倍比稀释菌液作敏感性实验;与细菌培养法比较,验证此方法检测临床标本的敏感性。结果对17个实验室保留菌株进行检测,以通用引物对作第1次PCR均得到371bp长度的DNA片段;再以革兰阴性菌特异引物对(pm2,pm3)作第2次PCR,9种阴性菌均得到353bp的DNA片段,而8种阳性菌未被扩增。特异性实验表明,此通用引物与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应。敏感性实验表明,采用半巢式PCR可检测出3个CFU的细菌。对120份临床标本检测,半巢式PCR检测阳性率(29.2%)显著高于细菌培养法检测阳性率(17.5%)。结论此半巢式PCR检测细菌方法,具有特异、敏感、快速的特点,并能对细菌进行革兰阴性、阳性分型,可用于临床感染性疾病的初步诊断。 展开更多
关键词 半巢式聚合酶链反应 16SRRNA基因 细菌培养
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逆转录-多重巢式聚合酶链反应技术在骨髓增殖性疾病PDGFRB基因重排检测中的应用 被引量：1
3
作者 周敏航 姜孟孟 +6 位作者 高丽 徐媛媛 丁一 王莉莉 靖彧 王全顺 于力 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期1443-1446,共4页
本研究旨在探讨逆转录-多重巢式PCR技术在骨髓增殖性疾病(MPD)PDGFRB基因重排检测中的应用价值。利用逆转录-多重巢式PCR技术对146例MPD患者骨髓或外周血标本进行与PDGFRB基因重排相关的融合基因定性检测。结果显示,146例MPD患者骨髓或... 本研究旨在探讨逆转录-多重巢式PCR技术在骨髓增殖性疾病(MPD)PDGFRB基因重排检测中的应用价值。利用逆转录-多重巢式PCR技术对146例MPD患者骨髓或外周血标本进行与PDGFRB基因重排相关的融合基因定性检测。结果显示,146例MPD患者骨髓或外周血标本中有8例出现PDGFRB基因重排,阳性率为5.5%。其中3例为TEL-PDGFRB融合基因,2例为HIP1-PDGFRB融合基因,1例为GIT2-PDGFRB融合基因,1例为TP53BP1-PDGFRB融合基因,1例为WDR48-PDGFRB融合基因。结论:运用逆转录-多重巢式PCR方法进行MPD患者PDGFRB基因重排检测,对于疾病诊断有一定指导意义,且可以为药物靶向治疗提供理论依据。 展开更多
关键词 逆转录-多重巢式聚合酶链反应 骨髓增殖性疾病 PDGFRB基因重排
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应用巢式逆转录聚合酶链反应检测鱼类病毒性出血性败血症病毒(VHSV) 被引量：10
4
作者 倪穗 余晓巍 +3 位作者 王建平 雷爱莹 曾地刚 吴雄飞 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期489-493,共5页
参照鱼类病毒性出血性败血症病毒序列,根据PCR引物设计的原则,设计巢式PCR引物,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对如何快速检测鱼类病毒性出血性败血症病的方法进行了较为系统的研究,并对RT-PCR的反应条件进行了优化。结果表明... 参照鱼类病毒性出血性败血症病毒序列,根据PCR引物设计的原则,设计巢式PCR引物,采用巢式逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,对如何快速检测鱼类病毒性出血性败血症病的方法进行了较为系统的研究,并对RT-PCR的反应条件进行了优化。结果表明,巢式RT-PCR扩增获得279bp的特异性片断,阴性对照无扩增条带。巢式RT-PCR扩增出的特异性片段经测序分析,结果证实与报道的序列完全一致。该方法最低可检测出0.1pg的鱼类病毒性出血性败血症病毒RNA。初步建立了VHSV的巢式RT-PCR检测方法,该方法灵敏、特异,可为VHSV的检测提供一个快速、有效的手段。 展开更多
关键词 病毒性出血性败血症病毒 巢式逆转录聚合酶链反应 检测
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实时定量聚合酶链反应与巢式聚合酶链反应在289例白血病融合基因检测中的比较 被引量：2
5
作者 王玥 李艳 +2 位作者 金晶纯 王亚柱 魏鑫 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期738-741,共4页
目的比较实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)与巢式聚合酶链反应(nPCR)在白血病融合基因BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO检测中的结果。方法分别应用RT-PCR与nPCR对289例急慢性白血病初诊和完全缓解的患者BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO融合基因... 目的比较实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)与巢式聚合酶链反应(nPCR)在白血病融合基因BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO检测中的结果。方法分别应用RT-PCR与nPCR对289例急慢性白血病初诊和完全缓解的患者BCR/ABL、PML/RARa及AML1/ETO融合基因进行检测,结合患者骨髓细胞形态学及临床转归予以分析。结果 46例初诊慢性粒细胞白血病(CML)患者中,RT-PCR与nPCR检测BCR/ABL融合基因阳性率分别为95.7%和93.5%(P=0.997);69例完全缓解CML患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为78.4%和58.1%(P<0.05)。32例初诊急性早幼粒细胞白血病(APL)患者中,RT-PCR与nPCR检测PML/RARa融合基因阳性率分别为93.8%和90.6%(P=0.996);114例完全缓解APL患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为12.3%和7.0%(P<0.05)。12例初诊急性粒细胞白血病M2(ANLL-M2)患者中,RT-PCR与nPCR检测AML1/ETO融合基因阳性率分别为50.0%和50.0%(P=1.0);16例完全缓解ANLL-M2患者中,RT-PCR与nPCR检测阳性率分别为50.0%和12.5%(P<0.05)。结论 RT-PCR较nPCR更为敏感而准确,应用RT-PCR可以提高微小残留病的检出率,为临床诊断和治疗提供更为有效的分子生物学依据。 展开更多
关键词 白血病 融合基因 实时定量聚合酶链反应 巢式聚合酶链反应
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巢式聚合酶链反应技术在流感嗜血杆菌b型检测中的应用 被引量：3
6
作者 姜敏 胡翼云 +4 位作者 高薇 袁林 沈叙庄 俞桑洁 杨永弘 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2006年第1期18-21,共4页
目的评价巢式聚合酶链反应(nested-PCR)技术在b型流感嗜血杆菌(Hib)检测中的应用价值,估计氨苄西林耐药Hi中b型的比率。方法对2000—2003年北京、上海、广州细菌监测项目中,呼吸道感染儿童鼻咽部分离培养的899株Hi,用E试验法检测氨苄西... 目的评价巢式聚合酶链反应(nested-PCR)技术在b型流感嗜血杆菌(Hib)检测中的应用价值,估计氨苄西林耐药Hi中b型的比率。方法对2000—2003年北京、上海、广州细菌监测项目中,呼吸道感染儿童鼻咽部分离培养的899株Hi,用E试验法检测氨苄西林耐药情况后,用nested-PCR与玻片凝集法对氨苄西林耐药菌株进行b型检测。结果检出74株氨苄西林耐药Hi。nested-PCR与玻片凝集法检测Hib的结果一致,74株氨苄西林耐药Hi中有2株为Hib,约占2.7%。结论nested-PCR b型荚膜检测方法可作为玻片凝集法的一个重要补充。3地4年内呼吸道感染的儿童鼻咽部携带的氨苄西林耐药Hi中,Hib的比率处于相对较低的水平。 展开更多
关键词 B型流感嗜血杆菌 巢式聚合酶链反应 玻片凝集法
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桉树焦枯病菌巢式聚合酶链反应快速检测方法的建立与应用 被引量：1
7
作者 谯天敏 张静 +2 位作者 麻文建 朱天辉 郑磊 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期497-504,共8页
桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(... 桉树焦枯病是威胁桉树生长的首要病害,建立准确、有效的桉树焦枯病巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测技术是桉树焦枯病前期诊断的必要手段。本研究针对柱枝双孢霉(Cylindrocladium scoparium)菌株的β-微管蛋白(beta-tubulin)基因上保守序列极强的靶基因区域序列进行特异性引物BT-S-1/BTA-1的设计和通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A的合成,分别利用常规PCR和巢式PCR技术对引物特异性和灵敏度进行检测和比较,同时本研究也对所建立的巢式PCR用于桉树焦枯病原菌快速检测的田间时效性进行验证。试验结果表明:利用beta-tubulin基因序列通用引物BT-T1-S/BT-CYLTUBIR-A对全部供试菌株进行扩增,所有参试菌株均可扩增出1条约500bp的条带;而单独使用特异性引物BT-S-1/BT-A-1进行常规PCR扩增时仅病原菌能够扩增出1条148bp的明亮条带;当利用通用引物作为第1轮引物,以稀释10倍后的第1轮PCR产物作为第2轮PCR模板,利用特异性引物进行巢式PCR扩增时,也可扩增出上述148bp大小的明亮条带,且巢式PCR的扩增效果较常规PCR具有明显的视觉优越性;灵敏度检测试验表明,巢式PCR的灵敏度可检测到5fg/μL,较常规PCR可以扩增出的极限(DNA质量浓度为5pg/μL)至少提高了103倍;田间时效检测试验也说明巢式PCR较常规PCR具有更高的准确度和灵敏性,可达到田间检测的要求。本研究建立的巢式PCR检测技术可有效应用于桉树焦枯病的早期诊断。 展开更多
关键词 巢式聚合酶链反应 桉树焦枯病 快速检测 丽赤壳属 柱枝双孢霉
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用聚合酶链反应制备抗端粒酶蛋白重链和轻链可变区基因
8
作者 张徽 张波 +1 位作者 韩继生 侯琳 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2001年第2期132-134,138,共4页
目的：为了制备抗端粒酶蛋白hTERT可变区基因。方法：采用Ni-NTA树脂层析法从PBKTRT转染的 E.coli JM109阳性菌中分离纯化端粒酶蛋白hTERT，并免疫小鼠。从免疫的小鼠脾脏中提取淋巴细胞中总RNA，逆转录成cDNA，以逆转录合成的cDNA第一... 目的：为了制备抗端粒酶蛋白hTERT可变区基因。方法：采用Ni-NTA树脂层析法从PBKTRT转染的 E.coli JM109阳性菌中分离纯化端粒酶蛋白hTERT，并免疫小鼠。从免疫的小鼠脾脏中提取淋巴细胞中总RNA，逆转录成cDNA，以逆转录合成的cDNA第一条链为模板，分别用VH和VL引物，通过PCR进行扩增。结果：PCR扩增反应产生350bp大小的抗hTERT重链和轻链可变区基因。VH和VL基因片段的获得为进一步制备抗hTERT单功能区抗体（dABs）和单链抗体ScFv奠定了实验基础。结论：提示该方法具有稳定性好，易于重复，扩增后VH和VL量较高的优点。 展开更多
关键词 端粒酶 重链可变区 轻链可变区 聚合酶链反应
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巢式多聚酶链反应在诊断乙型重型肝炎中的意义
9
作者 卢桥生 骆抗先 章廉 《临床肝胆病杂志》 CAS 1996年第2期80-81,共2页
重型乙型病毒性肝炎的病例,血清病毒水平极低,以至于在部分病例即使以极灵敏的聚合酶链反应也难以检测出来。巢式多聚酶链反应可检测出低至1—10个模板DNA的水平,我们应用此方法检测了12例重症肝炎病人血清乙肝病毒DNA。结果:以C_1、C_... 重型乙型病毒性肝炎的病例,血清病毒水平极低,以至于在部分病例即使以极灵敏的聚合酶链反应也难以检测出来。巢式多聚酶链反应可检测出低至1—10个模板DNA的水平,我们应用此方法检测了12例重症肝炎病人血清乙肝病毒DNA。结果:以C_1、C_3引物一次能检出HBVDNA者4例,其中有3例HBeAg阳性者全部被检出;经C_(12)、C_(16)内引物巢式扩增后,12份标本中全部检出HBVDNA。说明巢式多聚酶链反应在乙型重症肝炎的病原诊断中,具有重要意义。 展开更多
关键词 乙型肝炎 诊断 聚合酶链反应 巢式
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用种特异性聚合酶链反应检测普氏立克次体的研究 被引量：1
10
作者 崔红 宫占威 +2 位作者 张雪颖 陈梅玲 陈香蕊 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第3期77-79,共3页
目的　建立特异敏感的快速检验普氏立克次体PCR检测方法 ,并能与莫氏立克次体相区分。方法　采用种特异性巢式PCR方法 ,进行实验室模拟检测。结果　以普氏立克次体的rpa14 /16基因为靶标设计了两对引物 ;该引物特异性实验表明仅普氏立... 目的　建立特异敏感的快速检验普氏立克次体PCR检测方法 ,并能与莫氏立克次体相区分。方法　采用种特异性巢式PCR方法 ,进行实验室模拟检测。结果　以普氏立克次体的rpa14 /16基因为靶标设计了两对引物 ;该引物特异性实验表明仅普氏立克次体特异性片段可以扩增出来 ,其余相关立克次体均扩增不出 ,尤其可鉴别其同群的莫氏立克次体 ;敏感性测试结果可检测出 6 3fg的普氏立克次体DNA ,可检测出 0 0 5个鸡胚半数感染量 (CEID5 0 )的立克次体 ;对人工模拟的小鼠脏器研磨液、血液标本检测发现该法在血液标本中的检测敏感性下降 3～ 4个滴度。结论　我们建立的巢式PCR可快速检验普氏立克次体 。 展开更多
关键词 普氏立克次体 莫氏立克次体 巢式聚合酶链反应 斑疹伤寒 动物实验
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巢式多聚酶链反应快速检测胎儿性别
11
作者 柳青 陈宏础 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 1999年第1期41-42,共2页
为建立一种非侵入性的对Ｘ性连锁遗传性疾病胎儿的早期产前性别鉴定方法，我们采用了巢式ＰＣＲ方法来扩增孕妇外周血中男性胎儿的Ｙ染色体特异序列，并与新生儿出生性别相对照。４４例孕妇中２２例分娩男性婴儿．其中１９例扩增出Ｙ特... 为建立一种非侵入性的对Ｘ性连锁遗传性疾病胎儿的早期产前性别鉴定方法，我们采用了巢式ＰＣＲ方法来扩增孕妇外周血中男性胎儿的Ｙ染色体特异序列，并与新生儿出生性别相对照。４４例孕妇中２２例分娩男性婴儿．其中１９例扩增出Ｙ特异片段，阳性检出率为８６．４％（１９／２２）．其余２２例分娩女性婴儿，其中无一例出现Ｙ特异扩增带，结果提示用巢式ＰＣＲ方法可快速判断胎儿性别，使临床上无伤性产前检查Ｘ性连锁遗传性疾病的胎儿性别成为可能。 展开更多
关键词 巢式 胎儿 性别鉴定 聚合酶链反应
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猪附红细胞体半巢式PCR诊断方法的建立 被引量：4
12
作者 李慧平 冯会权 +5 位作者 巴彩凤 尤立娜 王凯 廉长红 林小丰 石蕾 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期322-326,共5页
目的为能够更加准确、敏感的检测出猪附红细胞体(Mycoplasma suis,M.suis),本试验建立一种新的诊断方法—半巢式聚合酶链反应(hemi-nested Polymerase Chain Reaction,hemi-nested PCR)。方法利用Oligo 6.0和Primer 5.0软件设计筛选出... 目的为能够更加准确、敏感的检测出猪附红细胞体(Mycoplasma suis,M.suis),本试验建立一种新的诊断方法—半巢式聚合酶链反应(hemi-nested Polymerase Chain Reaction,hemi-nested PCR)。方法利用Oligo 6.0和Primer 5.0软件设计筛选出合适的PCR引物,经酶切分析和半巢式PCR进一步鉴定后进行序列测定。同时与普通PCR诊断方法进行比较。结果测得的猪附红细胞体基因序列与GenBank中发表的猪附红细胞体基因序列(AJ504999)同源性为100%。特异性试验结果表明本实验设计的PCR引物不能从弓形虫、链球菌、大肠杆菌、猪肺炎支原体和猪伪狂犬病病毒的基因组DNA中扩增出条带。通过敏感性试验,半巢式PCR诊断方法最低能够检测出0.12fg的标准模板DNA。通过与普通PCR比较,证明本试验建立的半巢式PCR更具敏感性和实用性。结论本试验建立的半巢式PCR诊断方法具有特异、敏感、实用等特点,为猪附红细胞体的检测提供了一种可靠的诊断方法。 展开更多
关键词 猪附红细胞体 半巢式聚合酶链反应 克隆 序列分析
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用半巢式PCR检测无创性标本诊断卡氏肺孢子虫肺炎的实验研究 被引量：7
13
作者 郭增柱 张怿 +1 位作者 姜洪杰 安亦军 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1999年第3期64-66,共3页
目的无创性诊断卡氏肺施子虫肺炎。方法采用一对半引物进行半巢式DHFR－PCR检测实验大鼠无创性标本——支气管液、血清及活检标本——肺及肝脏组织中的卡氏肺孢子虫DNA。结果从59只经病理学检查证实的卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中采集到的上... 目的无创性诊断卡氏肺施子虫肺炎。方法采用一对半引物进行半巢式DHFR－PCR检测实验大鼠无创性标本——支气管液、血清及活检标本——肺及肝脏组织中的卡氏肺孢子虫DNA。结果从59只经病理学检查证实的卡氏肺孢子虫肺炎大鼠中采集到的上述4种标本，卡氏肺孢子虫DNA的半巢式DHFR－PCR检出率分别为72.7％（32／44），37.3％（22／59），94．9％（56／59）和36．4％（8／22），而DHFR－PCR的检出率则仅为25％，13．6％，71．2％和9．1％。12只轻度感染的PCP大鼠的无创性标本中卡氏肺孢子虫DNA的检出率由刚提高至41．7％。正常鼠标本及各种病原体对照的半巢式DHFR－PCR均为阴性。结论用半巢式DHFR－PCR无创性地诊断大鼠卡氏肺孢子虫肺炎具有敏感、特异、省时、省力等优点；本文在血和肝中检出卡氏肺孢子虫DNA，提示在卡氏肺孢子虫肺炎大鼠模型中存在虫血症和肺外卡氏肺孢子虫感染。 展开更多
关键词 卡氏肺孢子虫 聚合酶链反应 半巢式 肺炎
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应用单管巢式多重PCR技术检测登革病毒及分型 被引量：4
14
作者 李淑华 方美玉 +3 位作者 刘世建 常文军 王珊珊 曹广文 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期152-156,共5页
目的建立一种单管巢式多重RT-PCR方法,以用于临床对于不同型别登革病毒混合感染的检测并分型。方法将1-4型登革病毒RNA混合,首先用1-4型病毒通用外引物进行一步法RT-PCR,然后以混合病毒RT-PCR产物为模板,在同一反应管内同时加入4对（5... 目的建立一种单管巢式多重RT-PCR方法,以用于临床对于不同型别登革病毒混合感染的检测并分型。方法将1-4型登革病毒RNA混合,首先用1-4型病毒通用外引物进行一步法RT-PCR,然后以混合病毒RT-PCR产物为模板,在同一反应管内同时加入4对（5条）型特异性引物进行巢式多重PCR,结果用EB染色的3%琼脂糖凝胶电泳观察;并将其检测敏感性和特异性与该方法的单一病毒模板RNA扩增进行比较。结果经反应条件的优化,混合病毒模板单管巢式多重PCR可以在同一反应管内同时扩增出4条病毒特异性目的条带,分别为482、119、290、389 bp。其敏感性和特异性与单一病毒RNA的扩增相当,对模板RNA检测的敏感性可以达到66.068 copies/μl。结论该方法简便、快速、敏感、特异,可以根据扩增目的片段的大小进行诊断和分型,对于临床登革病毒混合感染病例的诊断和快速分型有应用价值。 展开更多
关键词 登革病毒 混合感染 单管巢式多重聚合酶链反应
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猪圆环病毒3型半巢式PCR方法的建立和应用 被引量：8
15
作者 张志 郝占武 +3 位作者 杨旭兵 张美晶 吴发兴 李晓成 《中国动物检疫》 CAS 2018年第1期81-84,共4页
为建立快速检测猪圆环病毒3型(PCV-3)的方法,以Gen Bank上登陆的我国PCV-3全基因组为参考毒株,设计3条引物,建立了PCV-3半巢式PCR诊断方法。本方法可以扩增出大小为249 bp的特异性条带,与预期大小一致,而猪圆环病毒1型和2型、猪伪狂犬... 为建立快速检测猪圆环病毒3型(PCV-3)的方法,以Gen Bank上登陆的我国PCV-3全基因组为参考毒株,设计3条引物,建立了PCV-3半巢式PCR诊断方法。本方法可以扩增出大小为249 bp的特异性条带,与预期大小一致,而猪圆环病毒1型和2型、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒等对照样品均未扩增出特异性条带。将PCV-3的阳性DNA稀释后作为模板,发现半巢式PCR的检测极限可以达到5×10^(-3)μg/m L。对临床80份样品进行检测,发现半巢式PCR的阳性检出率可以达到27.5%(22/80),而常规PCR的检出率仅为6.25%(5/80)。检测结果表明,本文建立的半巢式PCR方法较为准确、特异和敏感,适用于PCV-3的快速检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪圆环病毒3型 半巢式-聚合酶链式反应 快速检测 流行病学调查
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大鼠脊髓横断早期比目鱼肌重量与肌球蛋白重链亚型mRNA表达的变化 被引量：4
16
作者 范晓华 纪树荣 周红俊 《中国康复理论与实践》 CSCD 2006年第4期298-300,共3页
目的观察大鼠脊髓横断后早期比目鱼肌重量及肌球蛋白重链（MHC）各亚型mRNA表达的变化规律.方法 40只雌性Wistar大鼠随机分为对照组（10只）与脊髓横断7 d组（ST7）、15 d组（ST15）、30 d组（ST30）,各10只,脊髓横断水平T8～T10.分别... 目的观察大鼠脊髓横断后早期比目鱼肌重量及肌球蛋白重链（MHC）各亚型mRNA表达的变化规律.方法 40只雌性Wistar大鼠随机分为对照组（10只）与脊髓横断7 d组（ST7）、15 d组（ST15）、30 d组（ST30）,各10只,脊髓横断水平T8～T10.分别于横断后7、15、30 d取后肢比目鱼肌称重,采用半定量RT-PCR方法观察MHC各亚型mRNA表达的变化.结果脊髓横断各组比目鱼肌重量均较对照组下降（P＜0.05）.ST15、ST30组比目鱼肌绝对与相对重量均较ST7组下降（P＜0.05）.对照组比目鱼肌只表达MHC-Ⅰ与MHC-Ⅱa,脊髓横断各组在横断7 d后出现MHC-Ⅱx与MHC-Ⅱb的表达,横断后各时间点MHC-ⅠmRNA的表达持续下调;MHC-Ⅱa与MHC-Ⅱx mRNA的表达持续上调;MHC-Ⅱb mRNA的表达维持在低水平.结论脊髓横断主要在早期影响肌肉的重量;脊髓横断后MHC的表达发生由慢型向快型的转化,MHC随神经肌肉活动的减少表现出可塑性. 展开更多
关键词 脊髓横断 比目鱼肌 肌肉重量 肌球蛋白重链 逆转录聚合酶链式反应
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抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因的体外扩增、克隆和序列分析 被引量：2
17
作者 刘健 吴文书 +4 位作者 王斌 潘志美 田培坤 黄震宇 洪锦心 《生物化学杂志》 CSCD 1993年第1期70-75,共6页
本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分... 本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 重链变区 嵌合抗体
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造血细胞磷酸酶与半胱氨酸蛋白酶基因在急性白血病患者中表达水平的研究 被引量：1
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作者 韩颖 化罗明 +3 位作者 范丽霞 季静 张征 郭明 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第10期1734-1736,共3页
目的:探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因和天冬酰氨特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(caspase-1、3)基因表达与急性白血病(acute leukemia,AL)患者的化疗效果的关系。方法:用RT-PCR方法检测急性白血病患者骨髓单个核细胞中SHP-1和caspase-1、3的m... 目的:探讨造血细胞磷酸酶(SHP-1)基因和天冬酰氨特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(caspase-1、3)基因表达与急性白血病(acute leukemia,AL)患者的化疗效果的关系。方法:用RT-PCR方法检测急性白血病患者骨髓单个核细胞中SHP-1和caspase-1、3的mRNA表达。结果:AL患者SHP-1和caspase-1、3表达率分别为33.3%、80.0%、100.0%;SHP-1和caspase-1、3基因阳性患者的首次完全缓解(CR)率分别为85.0%、64.3%和55.8%,明显高于阴性患者(分别为15.6%、20.0%),差异均有统计学意义(P<0.05);caspase-1、3与SHP-1表达呈正相关。结论:SHP-1可能是一个潜在的抑癌基因,它可能是通过激活下游的凋亡基因caspase-1、3发挥作用;caspase-1、3与SHP-1基因表达呈正相关且与患者的CR率有关,表明它们均参与了急性白血病的转归,可同时作为判断急性白血病患者的疗效和预后指标。 展开更多
关键词 白血病 半胱氨酸内肽酶类 聚合酶链反应
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优化单管巢式PCR反应条件在临床结核菌检测中的必要性 被引量：1
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作者 邢青 丁北川 《中国防痨杂志》 CAS 1999年第2期94-96,共3页
目的为进一步了解反应条件对ＰＣＲ结果的影响。方法通过调整单管巢式ＰＣＲ反应的模板量、外引物浓度和外循环数，并随机选取临床细菌学检测确定的菌阳及菌阴患者的标本进行ＰＣＲ扩增检测。结果１．单管巢式ＰＣＲ反应条件中的模板量... 目的为进一步了解反应条件对ＰＣＲ结果的影响。方法通过调整单管巢式ＰＣＲ反应的模板量、外引物浓度和外循环数，并随机选取临床细菌学检测确定的菌阳及菌阴患者的标本进行ＰＣＲ扩增检测。结果１．单管巢式ＰＣＲ反应条件中的模板量及外引物循环数对检测结果的影响较大。提示在各个实验室进行ＰＣＲ反应临床标本检测时，优化反应条件的重要性。２．经优化的反应条件检测临床痰标本，ＰＣＲ结果与临床细菌学阳性结果的符合性较高（大于９０％），对细菌学阴性患者的标本的阳性检出率为５３％，并具有很高的重复性。结论证明了优化ＰＣＲ反应条件的必要性。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 结核分枝杆菌 巢式 PCR
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用逆转录巢式PCR法检测重组逆转录病毒滴度
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作者 高军 曹广文 +3 位作者 龙建秋 吴晓兰 崔龙 戚中田 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期124-125,共2页
在以逆转录病毒为载体的基因治疗研究中，重组逆转录病毒的滴度测定是必要步骤。一般常用的载体都含有来自细菌的新霉素抗性基因（ＮｅｏＲ）并作为选择基因，常规的滴度测定方法是质粒性重组载体经理化方法转入一种病毒包装细胞中，第... 在以逆转录病毒为载体的基因治疗研究中，重组逆转录病毒的滴度测定是必要步骤。一般常用的载体都含有来自细菌的新霉素抗性基因（ＮｅｏＲ）并作为选择基因，常规的滴度测定方法是质粒性重组载体经理化方法转入一种病毒包装细胞中，第３天收获的病毒再感染另一种病毒包装... 展开更多
关键词 逆转录病毒 滴度 聚合酶链反应 巢式 重组
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