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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析
1
作者
倪君丽
刘欣超
+7 位作者
孙栋
方肆云
王定爱
申翰钦
严专强
戚南山
孙铭飞
顾有方
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期5159-5172,共14页
为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其...
为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。
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关键词
柔嫩艾美耳球虫
多表位重组质粒
真核
表
达
DNA疫苗
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题名
鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析
1
作者
倪君丽
刘欣超
孙栋
方肆云
王定爱
申翰钦
严专强
戚南山
孙铭飞
顾有方
机构
安徽科技学院动物科技学院
广东省农业科学院动物卫生研究所
温氏食品集团股份有限公司
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第11期5159-5172,共14页
基金
“十四五”广东省农业科技创新十大主攻方向“揭榜挂帅”项目(2023SDZG02)
广东省基础与应用基础研究基金项目(2021B1515120006)
+6 种基金
广东省科技计划项目(2021B1212050021,2023B1212060040)
猪禽种业全国重点实验室开放课题(2023QZ-NK05,2022GZ07)
广州市科技计划项目(2023B04J0137,2023A04J0789)
云浮市科技计划项目(2022020202)
科技创新战略专项资金(高水平农科院建设)(202110TD,202122TD,R2020PY-JC001,R2019YJ-YB3010,R2020PY-JG013,R2020QD-048,R2021PY-QY007,R2023PY-JG018)
广东省现代农业产业技术体系创新团队建设专项(2022KJ119)
广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202202)。
文摘
为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。
关键词
柔嫩艾美耳球虫
多表位重组质粒
真核
表
达
DNA疫苗
Keywords
Eimeria tenella
multi-epitope recombinant plasmids
eukaryotic expression
DNA vaccine
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
S852.723 [农业科学—基础兽医学]
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作者
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1
鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析
倪君丽
刘欣超
孙栋
方肆云
王定爱
申翰钦
严专强
戚南山
孙铭飞
顾有方
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
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