猪瘟病毒E2蛋白抗原单表位基因的融合表达及其免疫活性的研究 被引量：5

1

作者 刘思国 涂长春 +3 位作者 余兴龙 张茂林 刘伯华 吴健敏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期530-535,共6页

利用基因搭桥技术,在KlenowDNA聚合酶作用下,分别合成猪瘟病毒E2蛋白的3个抗原表位基因,并与原核表达载体pGEX-3X进行连接、转化和筛选鉴定,构建了3个重组质粒pGEX-C、pGEX-D和pGEX-E。在IPTG的诱导下,实现了可溶性蛋白的融合表达(GST-C... 利用基因搭桥技术,在KlenowDNA聚合酶作用下,分别合成猪瘟病毒E2蛋白的3个抗原表位基因,并与原核表达载体pGEX-3X进行连接、转化和筛选鉴定,构建了3个重组质粒pGEX-C、pGEX-D和pGEX-E。在IPTG的诱导下,实现了可溶性蛋白的融合表达(GST-C、GST-D、GST-E),以GST亲和层析柱对融合蛋白进行纯化。应用ELISA和Western-blot检测证实:E抗原表位基因表达的融合蛋白GST-E具有免疫学活性,而C和D的抗原表位基因虽然都表达了融合蛋白GST-C和GST-D,但未检测到免疫学活性。免疫攻毒保护试验表明:融合蛋白GST-E具有一定的免疫保护功能,为多表位疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2蛋白 抗原表位 基因表达 融合表达 免疫学活性

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恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因的构建及其高效表达 被引量：1

2

作者 张青锋 潘卫庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-24,共3页

目的 :构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因 (Pf CP- TCL) ,并在毕氏酵母中进行高效分泌表达。 方法 :选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原 CSP、TRAP和 L SA- 1中的一些重要 T、B细胞表位 ,按一定的次序加以串联连接 ,并全合成该... 目的 :构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因 (Pf CP- TCL) ,并在毕氏酵母中进行高效分泌表达。 方法 :选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原 CSP、TRAP和 L SA- 1中的一些重要 T、B细胞表位 ,按一定的次序加以串联连接 ,并全合成该融合基因。在毕氏酵母中进行分泌表达 ,并纯化表达产物。结果 :合成的基因在毕氏酵母中高水平分泌表达 ,产量达 1 g/L 以上。经离子交换和凝胶过滤 2步纯化过程 ,获得纯度在 95 %以上的重组蛋白。 结论 :全合成的多表位融合抗原基因能在毕氏酵母中高水平分泌表达 ,并产生一种工艺简易的纯化方法。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 红前期 多表位融合抗原 基因表达

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GST与戊型肝炎病毒ORF2编码蛋白融合表达形成的新抗原表位的鉴定

3

作者 梁久红 梁立敏 +3 位作者 董敏 韩振格 董晨 孟继鸿 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期321-323,327,共4页

目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中... 目的:以戊型肝炎病毒(HEV)ORF2编码的重组蛋白p166为例,研究蛋白标签GST对融合表达的重组蛋白抗原结构的影响。方法:以HEV中国株重组蛋白p166Chn-GST为免疫原,制备单克隆抗体(mAb),与代表HEV4个基因型的摩洛哥株、墨西哥株、美国株和中国株p166的GST或His融合蛋白、中国株非融合重组蛋白p179Chn以及GST融合的HEV无关蛋白进行ELISA检测,鉴定mAb所识别的抗原表位。结果:获得3株稳定分泌抗p166Chn-GST的杂交瘤细胞株,分泌的mAb1A8、9B4和8H10与p166Chn-GST反应,与GST不反应。其中1A8和9B4可与带GST标签的4种p166-GST蛋白以及N和C端截短的p146Chn-GST、p137Chn-GST反应,而不与4种p166-His蛋白反应,也不与p179Chn反应,与HEV病毒颗粒竞争试验阴性,与GST融合的HEV无关蛋白无交叉反应性,表明1A8和9B4识别的抗原表位不是HEV病毒颗粒表面天然存在的抗原表位,而是GST与HEV ORF2编码蛋白的465-601aa区段序列共同形成的新的抗原表位。结论:GST能够赋予基因工程重组蛋白以新的抗原特性,它与融合表达的重组蛋白可以共同形成新的抗原表位。 展开更多

关键词 GST融合表达 戊型肝炎病毒 单克隆抗体 抗原表位

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辅助性T细胞表位HBV表面抗原融合基因真核表达质粒的构建

4

作者 唐彤宇 朴云峰 +1 位作者 王峰 牛俊奇 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2003年第5期288-289,共2页

为提高HBVDNA疫苗的免疫效率,将一个通用型辅助性T细胞表位基因引入HBV表面抗原基因的5’末端,构建成真核表达质粒。PCR方法合成PADRE-HBsAg目的基因,产物与pMD18T载体连接,经HindⅢ,EcoRI双酶切,再克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。酶... 为提高HBVDNA疫苗的免疫效率,将一个通用型辅助性T细胞表位基因引入HBV表面抗原基因的5’末端,构建成真核表达质粒。PCR方法合成PADRE-HBsAg目的基因,产物与pMD18T载体连接,经HindⅢ,EcoRI双酶切,再克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)。酶切及测序鉴定,该真核表达载体构建成功,为进一步观察其特异性细胞和体液免疫反应奠定了基础。 展开更多

关键词 辅助性T细胞表位 HBV 表面抗原 融合基因 真核表达质粒 乙型肝炎病毒

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犬埃立克体多表位融合抗原蛋白的免疫学特性研究

5

作者 李重阳 孟庆玲 +5 位作者 乔军 伍晔晖 王立霞 郭晶 马帅 才学鹏 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第12期11-19,共9页

【目的】构建和制备具有较强抗原性的犬埃立克体(Ehrlichia canis)重组蛋白并研究其免疫学特性。【方法】利用ABCpred等在线软件预测分析犬埃立克体gp19、gp140和gp200等蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合抗原基因E.canis-megp19及... 【目的】构建和制备具有较强抗原性的犬埃立克体(Ehrlichia canis)重组蛋白并研究其免疫学特性。【方法】利用ABCpred等在线软件预测分析犬埃立克体gp19、gp140和gp200等蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合抗原基因E.canis-megp19及E.canis-megp-1,经PCR扩增后将其克隆至表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-E.canis-megp19和pET-32a(+)-E.canis-megp-1,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定正确后转化至感受态细胞大肠杆菌BL21 (DE3)中,优化表达条件(IPTG诱导浓度、温度及时间),表达重组蛋白后检测其免疫原性。【结果】成功构建并合成了多表位融合抗原基因E.canis-megp19和E.canis-megp-1,其PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶电泳后分别出现大小为414和429bp的片段;重组载体pET-32a(+)-E.canis-megp19和pET-32a(+)-E.canis-megp-1双酶切后得到了预期长度的目标片段;SDS-PAGE结果显示,当加入1.0mmol/L IPTG、37℃诱导8h后,E.canis-megp19及E.canis-megp-1重组蛋白均可大量表达,其分子质量分别为38和39ku;Western blot分析显示,该重组蛋白可被犬埃立克体阳性血清特异性识别,证实其具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明,该重组蛋白可诱导机体产生特异性抗体。【结论】制备的多表位融合重组蛋白能够高效地在大肠杆菌中表达且能够诱导机体产生特异性抗体。 展开更多

关键词 犬埃立克体 gp19 gp140 gp200 多表位融合抗原基因

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A/O型FMDV多抗原表位融合基因植物表达载体构建及转化柱花草的研究

6

作者 肖旭倩 胡正龙 +3 位作者 沈文涛 言普 王冬梅 周鹏 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期1565-1570,共6页

【目的】获得含有A/O型FMDV多抗原表位融合基因4种不同组合的转基因柱花草植株。【方法】用限制性内切酶Xba I和Sac I双酶切4个中间载体和质粒pBI121,回收连接后获得4个重组植物表达载体(pBI-xsB/xs T/xsBT/xsBTT)及相应农杆菌工程菌株... 【目的】获得含有A/O型FMDV多抗原表位融合基因4种不同组合的转基因柱花草植株。【方法】用限制性内切酶Xba I和Sac I双酶切4个中间载体和质粒pBI121,回收连接后获得4个重组植物表达载体(pBI-xsB/xs T/xsBT/xsBTT)及相应农杆菌工程菌株,利用农杆菌介导法转化热研2号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.ReyanⅡ)子叶叶盘。采用卡那霉素筛选,特异引物和转基因检测引物进行PCR及RT-PCR检测不同组合多抗原表位融合基因的转录情况。【结果】获得36株抗性转化株,经PCR检测有16株为阳性,RT-PCR检测后有11株为阳性,表明4种组合多抗原表位融合基因在转基因植株中获得转录。【结论】此研究为进一步揭示同型与异型FMDV之间多抗原表位基因不同融合方式的免疫原性和免疫效果奠定了研究基础。 展开更多

关键词 蹄疫病毒 多抗原表位融合基因 农杆菌介导法 柱花草 遗传转化

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高效原核融合表达载体(pBVIL1)的构建及在HCV抗原表达中的应用 被引量：34

7

作者 宋晓国 凌世淦 +3 位作者 张贺秋 陈坤 孙柯儿 朱翠侠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期231-233,共3页

关键词 表达载体 抗原表位 HCV抗原 高效原核融合

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干燥综合征特异性α-胞衬蛋白的抗原表位筛选及鉴定 被引量：5

8

作者 陈巧林 朴海燕 +2 位作者 何菁 李晶 栗占国 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期864-867,872,共5页

目的:筛选和鉴定干燥综合征特异性α-胞衬蛋白(α-Fodrin)的抗原表位.方法:采用蛋白质计算机分析软件预测α-胞衬蛋白的抗原决定簇,设计8条重叠蛋白片段序列,应用GST融合表达系统原核表达该系列融合蛋白.通过Western blot实验检测融合... 目的:筛选和鉴定干燥综合征特异性α-胞衬蛋白(α-Fodrin)的抗原表位.方法:采用蛋白质计算机分析软件预测α-胞衬蛋白的抗原决定簇,设计8条重叠蛋白片段序列,应用GST融合表达系统原核表达该系列融合蛋白.通过Western blot实验检测融合蛋白片段的抗原性,并对抗原性片段以外的序列片段进行融合表达和检测,最终确定抗体所识别的部位.结果:8条重叠融合蛋白片段均有抗原性,最小片段以外序列的表达片段检测不具有抗原性.结论:α-胞衬蛋白的第1～59位氨基酸是其抗原表位区域,为进一步研究α-胞衬蛋白在干燥综合征中的作用机制和应用奠定了基础. 展开更多

关键词 Α-胞衬蛋白 抗原表位 融合表达 WESTERN BLOT

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新城疫病毒F蛋白结构域基因原核表达与抗原表位分析 被引量：5

9

作者 张桂芝 陈亚波 +2 位作者 徐程 张朝政 方维焕 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期82-87,共6页

以含新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因的重组质粒为模板,设计特异引物进行重叠-延伸PCR扩增获得F基因的抗原结构域基因片段Fa、Fb和Fa-l-Fb,经SalⅠ和NotⅠ酶切后,定向插入原核表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-Fa、pGEX-Fb和pGEX-Fa-... 以含新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因的重组质粒为模板,设计特异引物进行重叠-延伸PCR扩增获得F基因的抗原结构域基因片段Fa、Fb和Fa-l-Fb,经SalⅠ和NotⅠ酶切后,定向插入原核表达载体pGEX-6P-1,获得重组质粒pGEX-Fa、pGEX-Fb和pGEX-Fa-l-Fb;用定点突变方法获得重组质粒pGEX-Fa-mut.将重组质粒转化大肠杆菌BL21,转化菌经IPTG诱导、提取表达产物进行蛋白电泳和免疫印迹分析.结果表明:Fa-mut、Fb和Fa-l-Fb结构域基因均获得了融合表达,表达产物与NDV阳性血清具有免疫反应性;与pGEX-Fa-mut不同,pGEX-Fa重组质粒在大肠杆菌中未能表达,且转化菌在IPTG诱导过程中未见生长,提示未经突变的Fa片段可能为毒性蛋白.三维结构预测结果显示,目的蛋白片段中均保留F蛋白中原有相应的抗原表位. 展开更多

关键词 新城疫病毒 融合蛋白 结构域 抗原表位 原核表达

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绵羊肺炎支原体多表位融合基因MO-meAg1的构建、表达及重组蛋白免疫原性分析 被引量：5

10

作者 田路路 孟庆玲 +7 位作者 乔军 陈诚 刘田莉 卢海亭 张星星 贡莎莎 才学鹏 陈创夫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期678-684,共7页

为获得具有良好免疫原性的绵羊肺炎支原体(MO)重组蛋白,利用ABCpred等软件预测分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合基因MO-meAg1,合成后将其亚克隆至表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-3... 为获得具有良好免疫原性的绵羊肺炎支原体(MO)重组蛋白,利用ABCpred等软件预测分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合基因MO-meAg1,合成后将其亚克隆至表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-32a(+)-MO-meAg1。将pET-32a(+)-MOmeAg1转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后检测重组蛋白反应原性和免疫原性。SDSPAGE结果显示,MO-meAg1重组蛋白分子质量约34.5ku;Western blot分析结果显示,该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。小鼠免疫试验结果表明,重组蛋白MO-meAg1具有较强的免疫原性,诱导机体产生的抗血清其间接血凝效价可达1∶128以上。获得的多表位融合蛋白MO-meAg1为绵羊支原体肺炎的免疫学诊断及新型疫苗研究奠定基础。 展开更多

关键词 绵羊肺炎支原体 抗原表位 多表位融合基因 表达

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口蹄疫病毒VP1-3免疫表位基因与猪γ-干扰素基因的融合表达 被引量：4

11

作者 姚清侠 钱平 +5 位作者 曹毅 郭东春 徐卓菲 何雁南 司有辉 陈焕春 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期346-349,358,共5页

将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,... 将人工合成的口蹄疫病毒VP1-3上的抗原表位基因和猪γ-干扰素基因串联入原核表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定及测序表明重组载体中二者以接头融合的形式构建成重组表达质粒。将该质粒转化BL21后经IPTG诱导,实现了重组融合蛋白的高效表达,表达产物经SDS-PAGE和Western blot分析,重组蛋白分子量约为66 Ku,与预期大小相符。薄层扫描分析显示表达的重组蛋白占菌体总蛋白的37.4%,且主要以包涵体的形式存在。包涵体以SKL变性后,经PEG4000、氧化型谷胱苷肽和还原型谷胱苷肽复性。粗提产物以CPE_(50)测得重组蛋白在MDBK细胞上的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)的活性达到1600 U/mL,说明表达产物具有干扰素的生物学活性,为下一步基因工程疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 抗原表位 猪Γ-干扰素 融合表达

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HPV16E7E6抗原表位嵌合体DNA抗肿瘤疫苗的研究 被引量：3

12

作者 李轶杰 陈开旭 +2 位作者 庄淑珍 马正海 张富春 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期606-609,616,共5页

目的:探讨HPV16 E7、E6抗原表位与HSP70 N端重组DNA疫苗抗肿瘤活性。方法:以重叠PCR将HPV16 E7基因N端60个氨基酸的编码序列与E6基因的10个(48～57)氨基酸的编码序列及HSP70 N端序列进行融合。以pcDNA3.0为载体,构建真核表达载体pcD-E76... 目的:探讨HPV16 E7、E6抗原表位与HSP70 N端重组DNA疫苗抗肿瘤活性。方法:以重叠PCR将HPV16 E7基因N端60个氨基酸的编码序列与E6基因的10个(48～57)氨基酸的编码序列及HSP70 N端序列进行融合。以pcDNA3.0为载体,构建真核表达载体pcD-E76HSP。重组质粒免疫C57BL/6小鼠后,通过淋巴细胞增殖实验和细胞毒性杀伤实验研究该疫苗激发的细胞免疫反应及反应强度;观察该疫苗对C57BL/6小鼠TC-1肿瘤细胞移植瘤的治疗效果。结果:重组DNA疫苗免疫C57BL/6小鼠后,小鼠脾淋巴细胞体外增殖明显,并可诱导产生针对TC-1肿瘤细胞的特异性CTL反应;体内抑瘤试验显示该疫苗对HPV16病毒转化的TC-1细胞小鼠移植瘤的生长有抑制作用。结论:该疫苗能激发特异性细胞免疫反应,显著抑制HPV16转化的TC-1肿瘤细胞生长。 展开更多

关键词 人乳头状瘤病毒16型 抗原表位 热休克蛋白70 融合基因 DNA疫苗

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基于抗原表位烟草环斑病毒单克隆抗体的制备 被引量：1

13

作者 秦绍钊 何月秋 +3 位作者 李旻 雷屈文 王光勇 丁元明 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期598-603,共6页

基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV... 基于多种生物信息学软件综合预测烟草环斑病毒(TRSV)外壳蛋白抗原表位所在的结构域,明确了该外壳蛋白抗原表位可能位于C端319～328、384～388、420～430、480～487、495～511位氨基酸残基附近。通过RT-PCR扩增出了目的片段,构建了TRSV外壳蛋白原核表达载体,表达的TRSV外壳蛋白外源融合蛋白具免疫活性。采用杂交瘤细胞技术,利用外源融合蛋白制备了单克隆抗体,制备的抗血清可与TRSV外壳蛋白基因原核表达产物发生免疫反应。检验结果表明,制备的抗血清具较好的特异性,可应用于TRSV的检疫检验。 展开更多

关键词 烟草环斑病毒 抗原表位 原核表达 融合蛋白 单克隆抗体

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含多抗原表位的嵌合SARS-CoV基因疫苗的构建和免疫原性研究 被引量：1

14

作者 汪晓华 童德妍 +1 位作者 徐焕宾 熊思东 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期130-133,共4页

目的　研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法　通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子... 目的　研制基于表位的SARS- CoV基因疫苗 ,为传统灭活或减毒疫苗提供有益的配伍选择。方法　通过网络数据库结合生物软件分析的方法 ,确定可能在SARS- CoV感染过程中起重要作用并具较好抗原性参数的结构区域作为候选抗原表位 ,以密码子优化的方法提高表位串联蛋白的真核表达效率 ,构建了含多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗。结果　多表位串联基因接入真核表达载体后 ,可在真核细胞内高效表达。多表位嵌合SARS -CoV基因疫苗免疫小鼠后 ,可诱导融合蛋白特异的体液免疫反应。结论　该基于多抗原表位的嵌合SARS- CoV基因疫苗可以诱导抗体应答 ,为该疫苗的深入研究奠定了基础。 展开更多

关键词 SARS-COV 多抗原表位 基因疫苗 免疫原性研究 嵌合 真核表达载体 体液免疫反应 网络数据库 配伍选择 减毒疫苗 软件分析 感染过程 表达效率 高效表达 免疫小鼠 融合蛋白 抗体应答 结构区 抗原性 密码子 细胞内 串联

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非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究 被引量：5

15

作者 郭晶 李重阳 +5 位作者 孟庆玲 乔军 伍晔晖 王立霞 马帅 才学鹏 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第6期60-65,共6页

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表... 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72 (MeP72)。再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5 000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功。转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21 (DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性。研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 MeP72 多表位融合抗原基因 原核表达

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基于奶牛乳腺炎无乳链球菌rSip-PGK-FbsA融合蛋白的间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

16

作者 吴金花 布日额 +10 位作者 王金良 陈金龙 锡林高娃 孙立杰 王华 王学理 刘燕 杜长智 朝洛蒙 于辰龙 白文丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期230-234,共5页

为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间... 为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间接ELISA方法。该方法与化脓性链球菌阳性血清、大肠杆菌阳性血清、金黄色葡萄球菌阳性血清、表皮葡萄球菌阳性血清均无交叉反应,特异性良好;阳性血清稀释至1颐12 800仍检测为阳性,具有较高的敏感性;批内和批间试验变异系数均小于10%,重复性好。利用该方法与以SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法对160份已知样品进行检测,结果显示,该方法的阳性符合率达到98.6%,高于SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法的阳性符合率。对389份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,其阳性检出率为46.53%。本研究建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种更加准确、可靠的血清学方法。 展开更多

关键词 无乳链球菌 多表位融合抗原rsip-pgk-fbsa 纯化 ELISA检测

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猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析

17

作者 田宏 侯相民 +3 位作者 吴锦艳 陈妍 尚佑军 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期270-274,共5页

体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗... 体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 复合多表位抗原基因 融合表达 活性分析

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生长抑素和耐热木聚糖酶的融合表达及性质研究 被引量：1

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作者 黄坤龙 苏小运 姚斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期235-243,共9页

旨在获得具有抗原性和免疫原性的融合蛋白CbXyn10C-SS,并对其进行高效表达和酶学性质分析。生长抑素(Somatostatin,SS)从多途径阻碍饲料转化效率和动物生长,使用SS免疫动物可避免其抑制作用。然而SS免疫的研究多以DNA疫苗为载体,少见重... 旨在获得具有抗原性和免疫原性的融合蛋白CbXyn10C-SS,并对其进行高效表达和酶学性质分析。生长抑素(Somatostatin,SS)从多途径阻碍饲料转化效率和动物生长,使用SS免疫动物可避免其抑制作用。然而SS免疫的研究多以DNA疫苗为载体,少见重组功能性SS蛋白的高效制备方法。木聚糖酶提高饲料转化率并在饲料中广泛应用,且微生物法发酵制备重组木聚糖酶技术已经非常成熟。将SS基因连接在细菌Caldicellulosiruptor bescii来源的耐热木聚糖酶基因CbXyn10C的3'端进行融合表达。融合蛋白CbXyn10C-SS具有抗原性和免疫原性,且该蛋白的理化性质和催化常数与CbXyn10C非常相似,具高度的热稳定性和较强的催化性能,适合饲料制粒。成功高效表达了能同时作为饲用木聚糖酶和生长抑素抗原的融合蛋白CbXyn10C-SS。 展开更多

关键词 生长抑素 木聚糖酶 融合表达 抗原表位

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重组人TALL-1基因全长及其胞外区片段的克隆和表达

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作者 王蒙 杨媛 +5 位作者 杨峥嵘 刘晓宏 李广阔 艾国平 粟永萍 程天民 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2231-2234,共4页

目的　获得人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建重组表达载体并对其诱导表达。方法　利用RT PCR技术从人外周血单个核细胞中扩增出TALL 1全长及其胞外区基因编码区序列 ,克隆于载体pGEX 4T 1中 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL2 1,... 目的　获得人TALL 1基因全长及其胞外区片段 ,构建重组表达载体并对其诱导表达。方法　利用RT PCR技术从人外周血单个核细胞中扩增出TALL 1全长及其胞外区基因编码区序列 ,克隆于载体pGEX 4T 1中 ,测序证实序列正确后转化大肠杆菌BL2 1,以IPTG诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot分析表达产物。结果　①从人外周血单个核细胞中扩增出编码TALL 1基因全长及其胞外区片段cDNA序列 ,序列测定证实与文献报道的序列一致 ;②成功构建了GST融合表达载体pGEX 4T 1 hTALL 1和pGEX 4T 1 sTALL 1;③表达了hTALL 1 GST和sTALL 1 GST融合蛋白。结论　人TALL 1基因全长及其胞外区片段的克隆成功及融合蛋白的表达 ,为进一步探索TALL 1抗原表位打下了基础。 展开更多

关键词 人TALL-1 克隆 融合表达 抗原表位

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单克隆抗体在动物病毒性传染病研究中的应用 被引量：2

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作者 刘建文 涂长春 《畜牧兽医科技信息》 2003年第5期11-13,共3页

单克隆抗体是由预定免疫小鼠的脾细胞与能在体外无限生长的骨髓瘤细胞融合形成的具有双亲特征的杂交瘤细胞产生的只针对一种抗原决定簇的单一抗体.

关键词 单克隆抗体 杂交瘤细胞 细胞融合 杂种细胞 单抗治疗 抗原表位 动物 病毒性

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