基于生物信息学诺如病毒多表位抗原的构建及鉴定

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作者 杜雪 赵印震 +4 位作者 张怡青 王晓军 王旭东 郭兰英 王云龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2391-2398,共8页

目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初... 目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初步应用。结果:设计的多表位抗原二级结构中无规卷曲占比较大,理论分子质量及等电点(PI)为13.1 ku、7.16,性质稳定,亲水性较好。免疫评估显示具有良好的免疫原性,可激活体液免疫应答和细胞免疫应答。抗原序列连接pET-28a(+)、pET-32a载体后制备的蛋白分别以包涵体蛋白、可溶性蛋白的形式表达。经动物免疫、杂交瘤技术获得一对配对抗体,应用于胶体金试纸条灵敏度达0.5 ng/ml,试纸条可特异性结合两种基因型NoV重组衣壳蛋白。结论:成功制备诺如病毒多表位抗原并鉴定,为后续NoV通用型检测靶点探究及诊断原材料开发提供参考。 展开更多

关键词 诺如病毒 生物信息学分析 多表位抗原

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乙型肝炎病毒多表位抗原DNA疫苗的免疫原性 被引量：5

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作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 陈百虹 王萍 郝文波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期517-521,共5页

目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测... 目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验 ,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平 ,并观察其对免疫小鼠的毒副作用。结果 :用重组质粒pcDNA3.1/BPT免疫BALB/c小鼠后 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,可诱导显著地特异性CTL应答 (P <0 .0 5 )。ELISA检测免疫小鼠血清特异性IgG的水平明显升高 (P <0 .0 5 )。在BPT基因原核表达蛋白的刺激下 ,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖显著 (P <0 .0 5 )。RT PCR分析表明 ,IL 12mRNA的水平亦明显升高。结论 :HBV多表位基因疫苗可诱发特异性免疫应答 ,为预防。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 多表位抗原 基因免疫 免疫应答

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布氏杆菌表面特异性多表位抗原的串联表达与免疫磁珠的初步建立(英文) 被引量：2

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作者 唐泰山 赵林立 +5 位作者 廉慧峰 张常印 陈国强 姜焱 祝长青 王凯民 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期965-971,共7页

目的为获得布氏杆菌表面多表位抗原的特异性抗体,用于布氏杆菌免疫磁珠的构建。方法从布氏杆菌3个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段并插入原核表达载体,转化至E.coli BL21(DE3),获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,I... 目的为获得布氏杆菌表面多表位抗原的特异性抗体,用于布氏杆菌免疫磁珠的构建。方法从布氏杆菌3个表面蛋白中分析到特异性抗原表位,人工合成其串联基因片段并插入原核表达载体,转化至E.coli BL21(DE3),获得重组质粒pET-32a(+)-CJMEA-A,IPTG诱导后表达出30kDa的重组蛋白,亲和层析纯化后将其进行Western blot分析、间接ELISA鉴定和兔免疫试验,制备的抗血清经亲和层析纯化后,包被成免疫磁珠并用于布氏杆菌富集。结果表达的重组蛋白能与牛抗布氏杆菌血清反应,其抗血清与布氏杆菌发生良好反应,纯化抗体包被的免疫磁珠能特异性吸附布氏杆菌。结论获得的布氏杆菌特异性抗体和免疫磁珠具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 布氏杆菌 多表位抗原 串联表达 免疫磁珠

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丙型肝炎病毒多表位抗原的原核表达及免疫原性分析 被引量：2

4

作者 孙文佳 赵红玲 +4 位作者 刘龙丁 董承红 纳锐雄 赵树栋 李琦涵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期839-841,共3页

目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)十表位抗原HCVe在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。方法:在大肠杆菌DH5α中表达非融合蛋白HCVe,纯化该蛋白后利用Westerb blot分析其抗原反应性。免疫小鼠,检测其免疫特异性。结果:HCVe十表位抗原... 目的:研究丙型肝炎病毒(HCV)十表位抗原HCVe在大肠杆菌中的非融合表达及其免疫原性分析。方法:在大肠杆菌DH5α中表达非融合蛋白HCVe,纯化该蛋白后利用Westerb blot分析其抗原反应性。免疫小鼠,检测其免疫特异性。结果:HCVe十表位抗原能在原核表达系统中高效表达。Western blot和ELISA分析表明HCVe十表位抗原能与HCV病人阳性血清特异性结合,并可诱发小鼠产生特异性HCV抗体。结论:表达的HCVe十表位抗原具有特异的抗原反应性及免疫原性。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 多表位抗原 体液免疫

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鸡法氏囊病毒多表位抗原的表达及免疫特性分析 被引量：2

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作者 胡巍 于妮娜 +1 位作者 张海红 刘文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期165-169,共5页

为进行传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位抗原的原核表达和免疫特性分析,应用重叠延伸PCR技术扩增合成由病毒VP2和VP3蛋白多个表位序列构成的重组抗原基因,并将抗原基因与原核表达载体pBVIL1重组,表达多表位融合抗原,通过与标准抗血清反... 为进行传染性法氏囊病病毒(IBDV)多表位抗原的原核表达和免疫特性分析,应用重叠延伸PCR技术扩增合成由病毒VP2和VP3蛋白多个表位序列构成的重组抗原基因,并将抗原基因与原核表达载体pBVIL1重组,表达多表位融合抗原,通过与标准抗血清反应和动物免疫分别检测表达抗原的免疫反应性和免疫原性。结果显示,经42℃诱导后,含重组载体的大肠杆菌表达了31 kD的抗原蛋白,Western blot鉴定出现阳性条带,免疫小鼠后,抗血清的滴度为1∶6 400。说明原核表达载体构建成功,大量表达的多表位融合抗原具有IBDV抗原反应性。 展开更多

关键词 传染性法式囊病毒 多表位抗原 原核表达 免疫反应性 免疫原性

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丙型肝炎病毒与恶性疟原虫复合多表位抗原基因在小鼠及家兔中免疫应答的研究 被引量：2

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作者 黄建生 解咏梅 +5 位作者 张潜 沈先荣 钟雄林 张丽芸 郭明秋 任大明 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第10期533-534,538,共3页

目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)及恶性疟原虫 (Pf)复合DNA疫苗的可行性。方法 :把HCV复合多表位抗原基因PCX与Pf复合基因AB克隆到带CMV启动子的真核表达载体pcDNA3中 ,构建真核表达载体pcDNA3 CAB ,肌肉注射免疫小鼠及家兔 ,检测其诱发... 目的 :探讨丙型肝炎病毒 (HCV)及恶性疟原虫 (Pf)复合DNA疫苗的可行性。方法 :把HCV复合多表位抗原基因PCX与Pf复合基因AB克隆到带CMV启动子的真核表达载体pcDNA3中 ,构建真核表达载体pcDNA3 CAB ,肌肉注射免疫小鼠及家兔 ,检测其诱发特异性免疫应答水平及安全性。结果 :小鼠及家兔分别于免疫后第 6周及第 8周可检测到抗GZ PCX抗体 ,于第 10周达最高 ,滴度分别为 1:40 0及 1:3 2 0 0 ,但持续时间较短 ;免疫血清可识别Pf抗原 ;免疫动物还可产生针对GZ PCX融合蛋白的迟发性超敏反应 ;免疫后小鼠体重正常 ,肝脾脏未见明显肿大 ,具有良好的安全性。结论 :HCV Pf双价多表位DNA抗原基因在小鼠及家兔中可诱发特异性免疫应答 ,但抗体的持续时间较短。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 恶性疟原虫 多表位抗原 DNA疫苗

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肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的表达及鉴定 被引量：4

7

作者 刘宝山 赵芝娜 +1 位作者 赵雨杰 王桂珍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期588-591,共4页

目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的... 目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的多表位拼接CARDS蛋白使用6×His单克隆抗体和人阳性血清进行了免疫印迹的检测。结果 CARDS毒素蛋白的多表位拼接抗原表达载体构建成功,诱导后表达大小为30KDa的重组蛋白,Western blot测定其能与6×His单克隆抗体和人阳性血清发生反应。结论本研究选取的CARDS毒素蛋白抗原表位具有较强的免疫活性,可为Mp感染的诊断提供新的候选抗原。 展开更多

关键词 肺炎支原体 CARDS毒素蛋白 多表位拼接抗原 表达 鉴定

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恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因的构建及其高效表达 被引量：1

8

作者 张青锋 潘卫庆 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期22-24,共3页

目的 :构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因 (Pf CP- TCL) ,并在毕氏酵母中进行高效分泌表达。 方法 :选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原 CSP、TRAP和 L SA- 1中的一些重要 T、B细胞表位 ,按一定的次序加以串联连接 ,并全合成该... 目的 :构建一个恶性疟原虫红前期多表位融合抗原基因 (Pf CP- TCL) ,并在毕氏酵母中进行高效分泌表达。 方法 :选取了疟原虫红外期疫苗候选抗原 CSP、TRAP和 L SA- 1中的一些重要 T、B细胞表位 ,按一定的次序加以串联连接 ,并全合成该融合基因。在毕氏酵母中进行分泌表达 ,并纯化表达产物。结果 :合成的基因在毕氏酵母中高水平分泌表达 ,产量达 1 g/L 以上。经离子交换和凝胶过滤 2步纯化过程 ,获得纯度在 95 %以上的重组蛋白。 结论 :全合成的多表位融合抗原基因能在毕氏酵母中高水平分泌表达 ,并产生一种工艺简易的纯化方法。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 红前期 多表位融合抗原 基因表达

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犬埃立克体多表位融合抗原蛋白的免疫学特性研究

9

作者 李重阳 孟庆玲 +5 位作者 乔军 伍晔晖 王立霞 郭晶 马帅 才学鹏 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2018年第12期11-19,共9页

【目的】构建和制备具有较强抗原性的犬埃立克体(Ehrlichia canis)重组蛋白并研究其免疫学特性。【方法】利用ABCpred等在线软件预测分析犬埃立克体gp19、gp140和gp200等蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合抗原基因E.canis-megp19及... 【目的】构建和制备具有较强抗原性的犬埃立克体(Ehrlichia canis)重组蛋白并研究其免疫学特性。【方法】利用ABCpred等在线软件预测分析犬埃立克体gp19、gp140和gp200等蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合抗原基因E.canis-megp19及E.canis-megp-1,经PCR扩增后将其克隆至表达载体pET-32a(+)中,构建原核表达载体pET-32a(+)-E.canis-megp19和pET-32a(+)-E.canis-megp-1,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定正确后转化至感受态细胞大肠杆菌BL21 (DE3)中,优化表达条件(IPTG诱导浓度、温度及时间),表达重组蛋白后检测其免疫原性。【结果】成功构建并合成了多表位融合抗原基因E.canis-megp19和E.canis-megp-1,其PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶电泳后分别出现大小为414和429bp的片段;重组载体pET-32a(+)-E.canis-megp19和pET-32a(+)-E.canis-megp-1双酶切后得到了预期长度的目标片段;SDS-PAGE结果显示,当加入1.0mmol/L IPTG、37℃诱导8h后,E.canis-megp19及E.canis-megp-1重组蛋白均可大量表达,其分子质量分别为38和39ku;Western blot分析显示,该重组蛋白可被犬埃立克体阳性血清特异性识别,证实其具有良好的反应原性;小鼠免疫试验表明,该重组蛋白可诱导机体产生特异性抗体。【结论】制备的多表位融合重组蛋白能够高效地在大肠杆菌中表达且能够诱导机体产生特异性抗体。 展开更多

关键词 犬埃立克体 gp19 gp140 gp200 多表位融合抗原基因

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小鼠及家兔对丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗免疫应答的研究 被引量：12

10

作者 黄建生 陈丽珊 +8 位作者 雷呈祥 解咏梅 张潜 沈先荣 贾福星 张丽芸 陈立茵 郭明秋 任大明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-54,共3页

目的探讨ＨＣＶ复合多表位ＤＮＡ疫苗的可行性。方法把ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ克隆到真核表达载体ｐＲＥＰ９（ＲＳＶ启动子）及ｐＣＤＮＡ３（ＣＭＶ启动子）中，构建真核表达载体ｐＲＥＰ９／ＰＣＸ及ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ。将其... 目的探讨ＨＣＶ复合多表位ＤＮＡ疫苗的可行性。方法把ＨＣＶ多表位抗原基因ＰＣＸ克隆到真核表达载体ｐＲＥＰ９（ＲＳＶ启动子）及ｐＣＤＮＡ３（ＣＭＶ启动子）中，构建真核表达载体ｐＲＥＰ９／ＰＣＸ及ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ。将其肌肉注射免疫小鼠及家兔，检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平，并观察免疫小鼠的安全性。结果质粒ｐＲＥＰ９／ＰＣＸ及ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ于免疫后第 ６ｗｋ和第 １０ ｗｋ时，开始可检测到抗 ＧＺ－ＰＣＸ ＩｇＧ，随后抗体滴度逐渐升高，但水平较低，持续时间较短。ｐｃＤＮＡ３／ＰＣＸ肌肉注射免疫家兔后，于第８ｗｋ开始出现特异性抗体，至 ３个月后滴度升至 １： ３ ２００，随后也开始下降。免疫小鼠及家兔可诱发针对ＧＺ－ＰＣＸ融合蛋白的迟发型超敏反应，并刺激淋巴细胞转化。免疫后小鼠的体重正常，肝脾脏未见明显肿大，具有良好的安全性。结论ＨＣＶ多表位基因可诱发特异性免疫应答且安全性好，为ＨＣＶ疫苗的研究提供了一定的理论及实验依据。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 多表位抗原 基因免疫 免疫应答

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具有免疫反应性的猪瘟病毒多表位基因在大肠杆菌中的克隆表达和鉴定 被引量：1

11

作者 侯相民 田宏 +2 位作者 尚佑军 田永强 刘湘涛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第5期6-10,共5页

将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产... 将猪瘟病毒不同抗原表位基因串联构成重组基因BT21,化学合成后克隆至pMD18-T载体中,然后再将BT21串联基因片段插入原核表达载体pGEX-6P-1。经酶切和测序鉴定后,构建的重组质粒pGEX-BT21转化大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE分析,用Glutathione Sepharose 4B亲和层析法纯化目的蛋白和Western blot分析其免疫学活性。结果表明:融合蛋白GST-BT21以可溶形式表达,分子量约为33kDa,与预期大小相符,纯化的重组蛋白可被猪瘟病毒阳性血清所识别,具有良好的免疫学活性。从而为进一步研究该融合蛋白的免疫特性和功能奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 E2结构糖蛋白 多表位抗原 抗原活性

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猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析

12

作者 田宏 侯相民 +3 位作者 吴锦艳 陈妍 尚佑军 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期270-274,共5页

体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗... 体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 复合多表位抗原基因 融合表达 活性分析

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乙型肝炎病毒治疗性多表位基因疫苗在小鼠中的免疫应答研究

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作者 骆利敏 夏虎 +1 位作者 刘树人 李明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期260-262,共3页

目的:分析乙型肝炎病毒(HBV)重组多表位抗原基因在大肠杆菌中非融合表达的蛋白B-BPT的免疫原性,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pBAD/BPT,并在大肠杆菌中诱导表达。以纯化的蛋白B-BPT免疫BALB/c小鼠,用... 目的:分析乙型肝炎病毒(HBV)重组多表位抗原基因在大肠杆菌中非融合表达的蛋白B-BPT的免疫原性,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pBAD/BPT,并在大肠杆菌中诱导表达。以纯化的蛋白B-BPT免疫BALB/c小鼠,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测该融合蛋白诱导的小鼠细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答。用流式细胞术(FCM)检测小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群的比例,用MTT比色法检测淋巴细胞的增殖效应。结果:B-BPT蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导特异性CTL应答(P<0.05,与空白对照组比较);B-BPT蛋白免疫后,可显著刺激小鼠脾淋巴细胞增值(P<0.05,与空白对照组比较)。结论:该非融合表达的蛋白B-BPT可有效地诱导小鼠特异性CTL免疫应答,为进一步研制乙肝预防治疗性疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 治疗性疫苗 多表位抗原

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非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白P72的构建、表达及免疫学特性研究 被引量：5

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作者 郭晶 李重阳 +5 位作者 孟庆玲 乔军 伍晔晖 王立霞 马帅 才学鹏 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第6期60-65,共6页

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表... 非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的一种烈性传染病,对中国猪养殖产业的发展存在巨大的潜在威胁。为了建立有效的检测手段来防控ASFV的流行,本试验以GenBank中ASFV基因组序列为基础,运用在线软件对ASFV结构蛋白P72的优势线性抗原表位进行预测分析,利用预测结果分析合成多表位融合基因P72 (MeP72)。再将MeP72经pMD19-T克隆后插入到原核表达载体pET-32a(+)中得到重组质粒pET-MeP72,双酶切验证在402 bp及5 000 bp以上有条带,证明重组质粒构建成功。转化重组质粒pET-MeP72至大肠杆菌感受态细胞E.coli BL21 (DE3),用IPTG诱导表达并优化诱导条件,分析重组蛋白反应原性。SDS-PAGE检测结果显示,MeP72重组蛋白的分子质量为30.74 kDa;Western blot分析显示MeP72重组蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其反应原性良好;小鼠免疫试验证实MeP72蛋白可诱导机体产生特异性抗体,具有良好的免疫原性。研究表明MeP72重组蛋白可在大肠杆菌中高效表达,并诱导机体产生特异性抗体,为诊断抗原的研发奠定了前期基础。 展开更多

关键词 非洲猪瘟病毒 MeP72 多表位融合抗原基因 原核表达

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结合RNAi技术的三重表达HCV DNA疫苗的构建及其在HepG2细胞中的表达 被引量：1

15

作者 杨化强 曹以诚 +5 位作者 杜正平 卓敏 黄镜贤 李新建 石川 张珍武 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期82-86,共5页

目的:构建多表位抗原基因、hIL-12、小分子干扰RNA(siRNA)共质粒表达的新型复合丙型肝炎DNA疫苗并在HepG2细胞中表达。方法:设计并合成复合多表位丙肝抗原基因,将其与加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合克隆进真核表达载体pVAX1的多克隆... 目的:构建多表位抗原基因、hIL-12、小分子干扰RNA(siRNA)共质粒表达的新型复合丙型肝炎DNA疫苗并在HepG2细胞中表达。方法:设计并合成复合多表位丙肝抗原基因,将其与加强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合克隆进真核表达载体pVAX1的多克隆位点中;利用pVAX1载体上卡那霉素抗性基因与复制起始位点之间的非功能区域,将带CMV启动子的hIL-12表达单元克隆进该区域的BspH I位点中;同时将8组针对丙肝的siRNA表达单元分别克隆进载体复制起始位点下游非功能区域的MluI位点上,构建三重表达的HCV DNA疫苗pVAX1-HC-EGFP-hIL12-siRNA。以该重组质粒转染人肝癌细胞系HepG2,通过EGFP的荧光标记观察多表位抗原的表达;以靶向EGFP的siRNA做为对照验证siRNA的表达及其干扰效果;ELISA测定培养细胞上清中hIL-12的表达。结果:经酶切鉴定和测序证实三重表达的复合HCV DNA疫苗构建成功。在转染细胞中检测到绿色荧光,证实抗原表达;靶向EGFP的siRNA亦能显著抑制EGFP的表达;转染后48 h hIL-12的检出量为1 289 ng/L细胞上清,72 h检出量为1 712 ng/L细胞上清。结论:成功地构建多表位抗原基因、hIL-12和siRNA共质粒表达的丙肝DNA疫苗,并能在真核细胞中有效表达抗原基因、hIL-12并介导RNA干扰效应。为进一步研究该DNA疫苗抗HCV的免疫治疗和基因治疗效果打下基础。 展开更多

关键词 丙型肝炎 DNA疫苗 多表位抗原 SIRNA ML-12

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口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建 被引量：9

16

作者 马鸣潇 金宁一 +6 位作者 刘慧娟 沈国顺 郑敏 金明兰 鲁会军 霍晓伟 马海利 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期288-294,共7页

针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其... 针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株）作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒（FPV）表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子（P7.5）下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 复合多表位抗原 表达盒 OAAT口蹄疫病毒 鸡痘病毒

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重组多克隆抗体——一类新的治疗制剂 被引量：1

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作者 乔春霞 沈倍奋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期24-26,共3页

关键词 重组多克隆抗体 治疗制剂 多表位抗原 临床应用前景 疾病治疗 单克隆抗体 抗血清 基因改造

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基于奶牛乳腺炎无乳链球菌rSip-PGK-FbsA融合蛋白的间接ELISA检测方法的建立 被引量：2

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作者 吴金花 布日额 +10 位作者 王金良 陈金龙 锡林高娃 孙立杰 王华 王学理 刘燕 杜长智 朝洛蒙 于辰龙 白文丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期230-234,共5页

为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间... 为建立一种快速而准确的奶牛乳腺炎无乳链球菌抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的无乳链球菌的膜表面相关蛋白SIP、磷酸甘油激酶PGK及纤连蛋白FbsA 3种串联表达的融合蛋白rSip-PGK-FbsA为包被抗原,建立了检测奶牛无乳链球菌抗体的间接ELISA方法。该方法与化脓性链球菌阳性血清、大肠杆菌阳性血清、金黄色葡萄球菌阳性血清、表皮葡萄球菌阳性血清均无交叉反应,特异性良好;阳性血清稀释至1颐12 800仍检测为阳性,具有较高的敏感性;批内和批间试验变异系数均小于10%,重复性好。利用该方法与以SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法对160份已知样品进行检测,结果显示,该方法的阳性符合率达到98.6%,高于SIP、PGK单一蛋白建立的ELISA方法的阳性符合率。对389份临床样品进行奶牛无乳链球菌抗体检测,其阳性检出率为46.53%。本研究建立的间接ELISA方法为奶牛无乳链球菌的快速检测提供了一种更加准确、可靠的血清学方法。 展开更多

关键词 无乳链球菌 多表位融合抗原rSip-PGK-FbsA 纯化 ELISA检测

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