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犬布鲁氏菌多表位候选疫苗设计与免疫模拟预测
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作者 刘大虎 许春梅 +5 位作者 梁瑞英 汤新明 梁琳 赵晓民 丁家波 杨升 《动物医学进展》 北大核心 2025年第7期41-51,共11页
利用免疫表位数据库(IEDB)预测了布鲁氏菌中高度保守且已证明具有良好免疫原性抗原(Omp16、Omp19、VriB10、L7/L12、SOD)的T细胞和B细胞表位,将优势抗原表位(组)串联构建模拟重组多肽。在此基础上,利用SOPMA和TASSER预测模拟重组多肽的... 利用免疫表位数据库(IEDB)预测了布鲁氏菌中高度保守且已证明具有良好免疫原性抗原(Omp16、Omp19、VriB10、L7/L12、SOD)的T细胞和B细胞表位,将优势抗原表位(组)串联构建模拟重组多肽。在此基础上,利用SOPMA和TASSER预测模拟重组多肽的二级和三级结构,使用ExpasyProtparam分析模拟重组多肽的致敏性、抗原性、溶解性等理化特性。进一步利用HawkDock对接重组多肽与Toll样受体3(Toll-like receptor 3,TLR3),以预测它们之间的相互作用,并使用C-ImmSim进行免疫模拟预测。结果显示,重组多肽能有效与TLR3相互作用,有望激活相关的免疫信号通路;预测免疫后能刺激免疫个体产生高水平的抗体和IFN-γ、IL-2,说明重组多肽具有激发宿主产生体液免疫和细胞免疫应答的潜能。研究建立了基于生物信息学技术预测优势抗原表位并进行多肽疫苗设计的理论模型,可为犬布鲁氏菌病多肽疫苗的研发提供参考。 展开更多
关键词 犬布鲁氏菌 多表位疫苗 预测 免疫反应
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猫疱疹病毒多表位纳米颗粒疫苗的制备及免疫原性评价
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作者 杨丹丹 刘冰 +6 位作者 赵维昊 赵亚楠 张玉蝶 郭巾玲 刘冬禹 殷玉和 吴丛梅 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4260-4272,共13页
【目的】设计并开发针对猫疱疹病毒1型(FHV-1)gB、gD蛋白的多表位纳米颗粒疫苗,为FHV-1多表位纳米颗粒疫苗的抗原筛选与优化提供理论依据。【方法】本研究利用多种生物信息学工具对FHV-1 gB、gD蛋白的理化性质、跨膜结构、N-糖基化位点... 【目的】设计并开发针对猫疱疹病毒1型(FHV-1)gB、gD蛋白的多表位纳米颗粒疫苗,为FHV-1多表位纳米颗粒疫苗的抗原筛选与优化提供理论依据。【方法】本研究利用多种生物信息学工具对FHV-1 gB、gD蛋白的理化性质、跨膜结构、N-糖基化位点、二级结构、B细胞抗原表位、免疫原性和保守性进行分析。构建重组质粒pET20b-FBDF,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。经Ni柱亲和层析纯化及透析浓缩处理后得到重组蛋白FBDF,通过SDS-PAGE进行鉴定,BCA法测定蛋白含量,透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察自组装纳米颗粒的形态和粒径大小。将制备的FHV-1表位纳米颗粒疫苗皮下免疫BALB/c小鼠,评价其免疫原性。【结果】FHV-1 gB、gD蛋白的多个氨基酸域均表现出优异的亲水性、抗原性、结构柔韧性和表面可及性特征。FHV-1 gB、gD蛋白分别存在11和5个潜在的糖基化位点;蛋白二级结构均主要由α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲组成,其中无规则卷曲占比最高;分别产生17和6个B细胞线性表位。筛选出3个高抗原性和保守性的优势抗原表位:gB_(1):197-208,gB_(2):314-325,gD:221-232。将表位使用柔性连接子(GGGGS)与Ferritin相连,经密码子优化后,构建pET20b-FBDF重组质粒。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白FBDF在30℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h时成功可溶性表达。TEM和DLS结果显示,纯化后的FBDF蛋白可自组装成直径为16.55 nm的纳米颗粒。小鼠免疫结果显示,三免后14 d小鼠血清中抗体滴度达到峰值,其中FBDF+Al(OH)_(3)、FBDF+CpG、FRCPV组抗体滴度分别为1∶680000、1∶15600、1∶3500,显著高于PBS和Ferritin组(P<0.05)。接种FBDF可诱导小鼠产生较高水平的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和中和抗体,中和抗体水平最高可达1∶2^(5)。【结论】本研究构建的多表位纳米颗粒疫苗FBDF具有较好的免疫原性,可诱导BALB/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,为FHV-1多表位疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 猫疱疹病毒(FHV) gB蛋白 gD蛋白 抗原预测 多表位疫苗
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基于免疫信息学设计猪流行性腹泻病毒S蛋白的通用多表位疫苗
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作者 许大伟 朱琪 +3 位作者 程安琪 陈宇山 刘宇明 李冰 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第11期5381-5392,共12页
【目的】设计一种能广泛应对当前国内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株及未来可能出现的新变体的通用多表位疫苗,用于预防和控制PEDV感染。【方法】对国内PEDV流行毒株的S蛋白进行遗传进化分析及相似性比对,筛选出保守序列并预测其抗原性... 【目的】设计一种能广泛应对当前国内猪流行性腹泻病毒(PEDV)流行株及未来可能出现的新变体的通用多表位疫苗,用于预防和控制PEDV感染。【方法】对国内PEDV流行毒株的S蛋白进行遗传进化分析及相似性比对,筛选出保守序列并预测其抗原性。使用IEDB、DTU Health Tech、ABCpred等免疫信息学工具筛选T淋巴细胞及B淋巴细胞表位,并通过柔性连接子串联重组后构建多表位疫苗。对疫苗的抗原性、过敏原性、毒性、理化性质、N-糖基化位点、二级结构和三级结构进行预测。通过免疫模拟评估该疫苗引起的免疫反应。【结果】成功从S蛋白中筛选出4段保守抗原序列,并识别出3个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位、5个辅助T淋巴细胞(HTL)表位和6个线性B细胞表位。这些表位被重组构建成多表位疫苗rPEDV-S,其分子质量为33.53 ku,表现为亲水性,具有2个潜在N-糖基化位点,无过敏原性和毒性。rPEDV-S的二级结构中α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲分别占32.71%、14.02%和53.27%。三级结构分析显示,95.3%的残基位于Ramachandran有利区,Z-score为-5.30。免疫模拟结果显示,rPEDV-S能诱导强烈的T细胞和B细胞免疫应答。【结论】本研究成功设计出多表位疫苗rPEDV-S,可激发强烈的免疫反应,可为应对国内新型PEDV变异毒株提供新的研究思路及候选疫苗。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 免疫信息学 S蛋白 多表位疫苗
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基于免疫信息学技术的雏沙门菌多表位疫苗构建 被引量:1
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作者 谭菊 王永娟 +6 位作者 郭广富 赵长菁 夏爱鸿 李巨银 吴敏秋 王宇航 覃秋苹 《中国畜牧兽医》 CSCD 北大核心 2024年第1期312-322,共11页
【目的】设计针对雏沙门菌(Salmonella Pullorum)IpaJ蛋白的多表位疫苗(multi-epitope vaccine, MEV),为净化鸡白痢提供新的疫苗。【方法】选用IEDB预测雏沙门菌IpaJ蛋白的T淋巴细胞主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)类分子结合表位;用NetM... 【目的】设计针对雏沙门菌(Salmonella Pullorum)IpaJ蛋白的多表位疫苗(multi-epitope vaccine, MEV),为净化鸡白痢提供新的疫苗。【方法】选用IEDB预测雏沙门菌IpaJ蛋白的T淋巴细胞主要组织相容性复合体Ⅰ(MHCⅠ)类分子结合表位;用NetMHCIIpan 4.0 Server预测T淋巴细胞MHCⅡ类分子结合表位;用IEDB预测B淋巴细胞表位。将各个服务器预测结果筛选出的表位经过VaxiJen v 2.0评估抗原性后,将合格的表位通过柔性linker串联成多表位疫苗。对构建的多表位疫苗进行抗原性、理化性质、N-糖基化位点、二级结构和三级结构预测。使用分子对接评估多表位疫苗与免疫受体的结合能力,使用免疫模拟评估多表位疫苗的免疫效果,最后优化密码子便于克隆表达。【结果】经筛选后,选择4个MHCⅠ、4个MHCⅡ和8个B淋巴细胞表位优势表位构建的多表位疫苗MEV-IpaJ。多表位疫苗MEV-IpaJ的分子质量为28.18 ku,为稳定亲水蛋白,具有良好的抗原性,存在4个潜在的N-糖基化位点,α-螺旋、延长链、β-转角和无规则卷曲分别占20.38%、19.23%、8.08%和52.31%。三级结构Ramachandran作图显示,优势区域中含有残基数占89.9%%,进行细化后优势区域的残基数增加到94.0%,三级结构突出表位作图也证明MEV-IpaJ具有良好的免疫原性。分子对接结果显示,MEV-IpaJ与Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)和TLR4蛋白分子可对接。免疫模拟结果显示,MEV-IpaJ具有较好的免疫应答,能提高部分细胞因子的表达,经密码子优化确保设计的MEV-IpaJ可在大肠杆菌K12表达系统中高效、稳定地表达。【结论】本研究构建的多表位疫苗MEV-IpaJ可有效表达并可能诱导强烈的T细胞和B细胞免疫应答。本研究为雏沙门菌多表位疫苗的设计提供了一种新的方法,为雏沙门菌多表位疫苗的研发提供了理论依据及数据支持。 展开更多
关键词 雏沙门菌 免疫信息学 多表位疫苗
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基于减法蛋白组学和反向疫苗学方法设计禽致病性大肠杆菌O1和O78血清型多表位疫苗
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作者 陈洪 吴双 +5 位作者 车业贵 邱树磊 周子祥 王奕 王永娟 袁橙 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5425-5438,共14页
【目的】设计针对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)O1和O78血清型的多表位疫苗(multi-epitope vaccine,MEV),为APEC新型疫苗的研制奠定基础。【方法】本研究结合减法蛋白组学和反向疫苗学进行研究。通过CD-HIT... 【目的】设计针对禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)O1和O78血清型的多表位疫苗(multi-epitope vaccine,MEV),为APEC新型疫苗的研制奠定基础。【方法】本研究结合减法蛋白组学和反向疫苗学进行研究。通过CD-HIT、BLASTP等工具去除APEC O1、O78蛋白序列中的冗余和不相似蛋白。将APEC O1、O78中相似蛋白与鸡参考蛋白质组进行BLASTP比对,去除同源蛋白,保留非同源蛋白。采用DEG、VFDB等数据库筛选具有毒力的必需蛋白。利用在线工具PSORTb和VaxiJen v 2.0筛选候选蛋白。使用在线工具NetCTL 1.2和NetMHCⅡpan 4.0预测T淋巴细胞主要组织相容性复合体Ⅰ和Ⅱ类分子结合表位,用在线工具IEDB预测B淋巴细胞表位。经在线工具VaxiJen v 2.0评估抗原性后,将合格的表位通过柔性linker串联成多表位疫苗。对设计的多表位疫苗进行抗原性、理化性质、N-糖基化位点、二级结构和三级结构预测。通过分子对接和免疫模拟分别评估多表位疫苗与免疫受体的结合能力及免疫效果,优化密码子便于克隆表达。【结果】经筛选后,选择12个CLT表位、12个HTL表位和12个B淋巴细胞表位构建多表位疫苗MEV-O1O78。多表位疫苗MEV-O1O78分子质量为69.81 ku,为稳定亲水蛋白,具有良好的抗原性,存在7个潜在的N-糖基化位点。二级结构中,α-螺旋、延长链和无规则卷曲分别占7.93%、10.81%和81.27%。三级结构拉氏图显示,优势区域中含有的残基数占95.6%。免疫模拟结果显示,多表位疫苗MEV-O1O78能引起良好的体液免疫,并提高部分细胞因子的表达,经密码子优化确保设计的多表位疫苗MEV-O1O78在大肠杆菌K12表达系统中高效、稳定地表达。【结论】本研究成功设计了含36个优势表位的APEC O1和O78多表位疫苗MEV-O1O78,可为研发禽致病性大肠杆菌病的多表位疫苗提供理论依据和数据支持。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌(APEC) 血清型 多表位疫苗
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表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽重组乳酸乳球菌的构建及表征
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作者 张喜悦 李昕 +11 位作者 赵格 赵建梅 曲志娜 刘俊辉 王娟 王珠琳 刘娜 宋时萍 黄秀梅 高玉斌 邹明 王君玮 《中国动物检疫》 CAS 2024年第12期103-109,共7页
为构建能表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的重组乳酸乳球菌(Lactococcuslactis,L.lactis),以pET28a-9F1、pET28a-9F2、pET28a-9F3质粒作为模板,扩增具有不同表位排序的多表位肽序列,插入至表达载体pNZ8149中,并电转化至乳酸乳球菌NZ390... 为构建能表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的重组乳酸乳球菌(Lactococcuslactis,L.lactis),以pET28a-9F1、pET28a-9F2、pET28a-9F3质粒作为模板,扩增具有不同表位排序的多表位肽序列,插入至表达载体pNZ8149中,并电转化至乳酸乳球菌NZ3900感受态细胞,分别构建重组乳酸乳球菌pNZ8149-9F1/L.lactis、pNZ8149-9F2/L.lactis和pNZ8149-9F3/L.lactis。经1ng/mL乳链菌肽诱导表达后,对菌体进行Westernblot分析,对菌株的稳定性进行测定,并绘制重组菌株与亲本菌株的生长曲线。结果显示:PCR扩增均获得了993bp的目的片段;构建的重组质粒经PCR、双酶切和测序鉴定,证实目标片段已被正确插入pNZ8149质粒;经Westerm blot分析,3株重组菌株裂解物在39.55kDa处出现可与987P抗体和F18抗体反应的目的条带,与预期蛋白大小一致;经20次传代后,将重组菌株接种于Eliker筛选培养基,发现98%以上的菌落仍为阳性菌落;与亲本菌株相比,外源蛋白的插入导致了重组菌株生长减缓,但无显著差异(P0.05)。结果表明,成功构建了3株表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的重组乳酸乳球菌,其可稳定携带质粒,且生长性能并未受到显著影响。本试验构建的重组菌株为探索多表位肽重组乳酸乳球菌的最佳表位序列,研制有效的猪大肠杆菌987P-F18多表位肽重组乳酸乳球菌口服疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 猪大肠杆菌 乳酸乳球菌 多表位 免疫原性
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猪ETECK88ac、K99黏附素蛋白生物信息学分析及多表位疫苗载体构建
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作者 张铭洋 辛长卫 +6 位作者 赵格 曲志娜 赵建梅 宋时萍 彭磊 张喜悦 王君玮 《中国动物检疫》 CAS 2024年第7期104-111,共8页
由猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起的仔猪腹泻是规模化猪场最常见的疾病之一。目前国内和国际上制备ETEC疫苗的靶基因多为其黏附素基因K88ac、K99。本试验通过分析ETEC K88ac、K99黏附素蛋白的生物学信息,将抗原表位进行组合,设计了一种... 由猪产肠毒素大肠杆菌(ETEC)引起的仔猪腹泻是规模化猪场最常见的疾病之一。目前国内和国际上制备ETEC疫苗的靶基因多为其黏附素基因K88ac、K99。本试验通过分析ETEC K88ac、K99黏附素蛋白的生物学信息,将抗原表位进行组合,设计了一种同时含有K88ac、K99基因的多表位重组疫苗载体。首先应用ProParam、SOPMA和GOR软件分析K88ac、K99蛋白的理化特性及二级结构,应用IEDB与ABCpred软件预测二者的B细胞抗原表位,应用RANKPEP软件预测Th细胞表位,应用IEDB与NetMHC-4.0软件预测CTL细胞表位;然后将预测的B细胞、Th细胞和CTL细胞抗原表位加上接头序列,按照一定顺序进行组合,分别设计多表位连接多肽Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ;最后通过分析抗原性、致敏性,筛选抗原性最强的连接多肽,并对其进行表征。结果显示:共筛选出9个抗原表位,按照不同的排列组合获得了3种连接多肽,其中连接多肽Ⅱ抗原性最强,为0.906 8;应用AllerTOP v. 2.0在线工具对连接多肽Ⅱ进行过敏性预测,发现其没有过敏性;应用ZpGJn4在线工具对连接多肽Ⅱ进行三维建模,发现其结构表位暴露性较好,易与抗体结合,在蛋白分子构象上符合表位设计要求。将该多表位肽的氨基酸序列按照乳酸菌密码子嗜好性反向翻译为核苷酸序列,随后插入pET28a载体中获得了p ET28a-KT质粒。结果表明,构建的连接多肽Ⅱ适合作为多表位疫苗的备选载体蛋白。多表位肽的设计及pET28a-KT质粒的获得为下一步构建表达ETEC多表位抗原的重组乳酸菌提供了技术支撑。 展开更多
关键词 ETEC 多表位疫苗 K88ac K99
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鸡球虫病7价多表位嵌合重组抗原ET seven真核质粒的构建、表达及其初步功能分析
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作者 倪君丽 刘欣超 +7 位作者 孙栋 方肆云 王定爱 申翰钦 严专强 戚南山 孙铭飞 顾有方 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期5159-5172,共14页
为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其... 为构建以鸡柔嫩艾美耳球虫EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等入侵相关蛋白分子为抗原基础的多表位嵌合重组抗原ET seven真核表达质粒,同时验证其在DF-1细胞中的表达和通过不同辅助递送方式在鸡体内的表达及其免疫功能。本研究利用生信分析获得7个抗原表位,分别提取柔嫩艾美耳球虫不同发育阶段虫体总RNA,通过RT-PCR扩增获得EtAMA1、EtAMA2、EtMIC3、EtMIC4、EtMIC13、EtROP5和EtSAG1等7个抗原的表位区域编码基因,构建基因图谱由公司合成以pcDNA3.1(+)为真核表达载体,构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven;将鉴定阳性、测序正确的质粒pcDNA3.1-ET seven转染至DF-1细胞,利用RT-PCR和Western blot方法检测ET seven重组基因片段在DF-1细胞中的表达;以磷酸钙纳米颗粒作为辅助质粒递送佐剂检测pcDNA3.1-ET seven在鸡体内引起的细胞因子水平变化,间接ELISA检测特异性IgG抗体水平。结果显示:成功构建真核表达质粒pcDNA3.1-ET seven,RT-PCR和Western blot检测到ET seven的特异性表达,质粒通过磷酸钙纳米佐剂免疫鸡体后,检测细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IFN-γ、CD-40均在三次免疫后7 d高水平表达,其中CD-40与IL-6的表达水平最高。pcDNA3.1-ET seven重组质粒结合磷酸钙佐剂肌肉注射二次免疫后7 d间接ELISA检测特异性IgG抗体呈阳性。结果表明,pcDNA3.1-ET seven重组质粒构建成功,在鸡体内有良好的免疫原性,为鸡球虫病的疫苗防控提供新的思路和技术支撑。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 多表位重组质粒 真核 DNA疫苗
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基于生物信息学诺如病毒多表位抗原的构建及鉴定
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作者 杜雪 赵印震 +4 位作者 张怡青 王晓军 王旭东 郭兰英 王云龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2391-2398,共8页
目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初... 目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初步应用。结果:设计的多表位抗原二级结构中无规卷曲占比较大,理论分子质量及等电点(PI)为13.1 ku、7.16,性质稳定,亲水性较好。免疫评估显示具有良好的免疫原性,可激活体液免疫应答和细胞免疫应答。抗原序列连接pET-28a(+)、pET-32a载体后制备的蛋白分别以包涵体蛋白、可溶性蛋白的形式表达。经动物免疫、杂交瘤技术获得一对配对抗体,应用于胶体金试纸条灵敏度达0.5 ng/ml,试纸条可特异性结合两种基因型NoV重组衣壳蛋白。结论:成功制备诺如病毒多表位抗原并鉴定,为后续NoV通用型检测靶点探究及诊断原材料开发提供参考。 展开更多
关键词 诺如病毒 生物信息学分析 多表位抗原
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羊口疮病毒114蛋白的优势抗原表位预测及ORFV多表位疫苗的构建 被引量:2
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作者 周伟杰 梁绍波 +1 位作者 龙琴琴 庞峰 《贵州畜牧兽医》 2024年第1期21-24,共4页
为了探究羊口疮病毒114蛋白作为羊口疮病毒多表位疫苗靶标的可能性,试验利用在线软件ABCpred预测114蛋白的优势B细胞表位,利用在线软件IEDB的MHC-Ⅰbinding server预测114蛋白的优势细胞毒性T细胞(CTL)表位;利用IEDB的MHC-Ⅱbinding ser... 为了探究羊口疮病毒114蛋白作为羊口疮病毒多表位疫苗靶标的可能性,试验利用在线软件ABCpred预测114蛋白的优势B细胞表位,利用在线软件IEDB的MHC-Ⅰbinding server预测114蛋白的优势细胞毒性T细胞(CTL)表位;利用IEDB的MHC-Ⅱbinding server预测114蛋白的优势辅助性T细胞(HTL)表位;使用柔性短肽接头连接114蛋白的优势B、T细胞抗原表位,构建羊口疮病毒多表位疫苗。结果:羊口疮病毒114蛋白由346个氨基酸组成,包含12个优势B细胞抗原表位,分别位于292~307 aa、264~279 aa、146~161 aa、331~346 aa、113~128 aa、298~313 aa、35~50 aa、324~339 aa、281~296 aa、162~177 aa、315~330 aa、204~219 aa;包含1个优势CTL抗原表位,位于65~73 aa;包含5个优势HTL抗原表位,分别位于69~83 aa、68~82 aa、70~84 aa、48~62 aa、284~298 aa;构建了基于114蛋白的优势抗原表位的羊口疮病毒多表位疫苗。结论:羊口疮病毒114蛋白包含多个优势B细胞和T细胞抗原表位,可作为羊口疮病毒多表位疫苗的候选靶标,具有诱导强烈体液免疫与细胞免疫反应的可能性。 展开更多
关键词 羊口疮病毒 114蛋白 B细胞抗原 T细胞抗原 多表位疫苗
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小鼠及家兔对丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗免疫应答的研究 被引量:12
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作者 黄建生 陈丽珊 +8 位作者 雷呈祥 解咏梅 张潜 沈先荣 贾福星 张丽芸 陈立茵 郭明秋 任大明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期52-54,共3页
目的探讨HCV复合多表位DNA疫苗的可行性。方法把HCV多表位抗原基因PCX克隆到真核表达载体pREP9(RSV启动子)及pCDNA3(CMV启动子)中,构建真核表达载体pREP9/PCX及pcDNA3/PCX。将其... 目的探讨HCV复合多表位DNA疫苗的可行性。方法把HCV多表位抗原基因PCX克隆到真核表达载体pREP9(RSV启动子)及pCDNA3(CMV启动子)中,构建真核表达载体pREP9/PCX及pcDNA3/PCX。将其肌肉注射免疫小鼠及家兔,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平,并观察免疫小鼠的安全性。结果质粒pREP9/PCX及pcDNA3/PCX于免疫后第 6wk和第 10 wk时,开始可检测到抗 GZ-PCX IgG,随后抗体滴度逐渐升高,但水平较低,持续时间较短。pcDNA3/PCX肌肉注射免疫家兔后,于第8wk开始出现特异性抗体,至 3个月后滴度升至 1: 3 200,随后也开始下降。免疫小鼠及家兔可诱发针对GZ-PCX融合蛋白的迟发型超敏反应,并刺激淋巴细胞转化。免疫后小鼠的体重正常,肝脾脏未见明显肿大,具有良好的安全性。结论HCV多表位基因可诱发特异性免疫应答且安全性好,为HCV疫苗的研究提供了一定的理论及实验依据。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 多表位抗原 基因免疫 免疫应答
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乙型肝炎病毒多表位抗原DNA疫苗的免疫原性 被引量:5
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作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 陈百虹 王萍 郝文波 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期517-521,共5页
目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测... 目的 :探讨HBV复合多表位DNA疫苗诱导体液及细胞免疫的可行性。方法 :将HBV多表位抗原基因BPT克隆到真核表达载体pcDNA3.1中 ,构建重组真核表达载体pcDNA3.1/BPT。将其通过肌肉注射免疫BALB/c小鼠 ,用间接免疫ELISA法、CTL杀伤功能检测和淋巴细胞增殖试验 ,检测特异性体液免疫和细胞免疫的水平 ,并观察其对免疫小鼠的毒副作用。结果 :用重组质粒pcDNA3.1/BPT免疫BALB/c小鼠后 ,在效靶比为 10 0∶1时 ,可诱导显著地特异性CTL应答 (P <0 .0 5 )。ELISA检测免疫小鼠血清特异性IgG的水平明显升高 (P <0 .0 5 )。在BPT基因原核表达蛋白的刺激下 ,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖显著 (P <0 .0 5 )。RT PCR分析表明 ,IL 12mRNA的水平亦明显升高。结论 :HBV多表位基因疫苗可诱发特异性免疫应答 ,为预防。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 多表位抗原 基因免疫 免疫应答
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肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的表达及鉴定 被引量:4
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作者 刘宝山 赵芝娜 +1 位作者 赵雨杰 王桂珍 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期588-591,共4页
目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的... 目的探讨肺炎支原体CARDS毒素蛋白多表位拼接抗原的免疫反应活性。方法对CARDS毒素蛋白的抗原表位进行分析,选取10个重要的表位进行拼接,反向翻译后合成并克隆,插入pET28a表达载体构建pET-CARDS表达质粒并转入受体菌。经IPTG诱导表达的多表位拼接CARDS蛋白使用6×His单克隆抗体和人阳性血清进行了免疫印迹的检测。结果 CARDS毒素蛋白的多表位拼接抗原表达载体构建成功,诱导后表达大小为30KDa的重组蛋白,Western blot测定其能与6×His单克隆抗体和人阳性血清发生反应。结论本研究选取的CARDS毒素蛋白抗原表位具有较强的免疫活性,可为Mp感染的诊断提供新的候选抗原。 展开更多
关键词 肺炎支原体 CARDS毒素蛋白 多表位拼接抗原 鉴定
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绵羊肺炎支原体多表位融合基因MO-meAg1的构建、表达及重组蛋白免疫原性分析 被引量:5
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作者 田路路 孟庆玲 +7 位作者 乔军 陈诚 刘田莉 卢海亭 张星星 贡莎莎 才学鹏 陈创夫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期678-684,共7页
为获得具有良好免疫原性的绵羊肺炎支原体(MO)重组蛋白,利用ABCpred等软件预测分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合基因MO-meAg1,合成后将其亚克隆至表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-3... 为获得具有良好免疫原性的绵羊肺炎支原体(MO)重组蛋白,利用ABCpred等软件预测分析MO EF-P、PDHA、P97相似蛋白和EF-Ts蛋白的优势线性抗原表位,构建多表位融合基因MO-meAg1,合成后将其亚克隆至表达载体pET-32a(+),构建原核表达载体pET-32a(+)-MO-meAg1。将pET-32a(+)-MOmeAg1转化至感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达后检测重组蛋白反应原性和免疫原性。SDSPAGE结果显示,MO-meAg1重组蛋白分子质量约34.5ku;Western blot分析结果显示,该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别,具有良好的反应原性。小鼠免疫试验结果表明,重组蛋白MO-meAg1具有较强的免疫原性,诱导机体产生的抗血清其间接血凝效价可达1∶128以上。获得的多表位融合蛋白MO-meAg1为绵羊支原体肺炎的免疫学诊断及新型疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 抗原 多表位融合基因
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乙型肝炎病毒重组多表位抗原诱发的小鼠免疫应答 被引量:4
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作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 董文其 黄建生 陈百虹 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期427-430,434,共5页
目的:对乙型肝炎病毒重组多表位抗原基因在大肠杆菌中表达的融合蛋白P/BPT进行免疫原性分析,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pWR450-1/BPT,在大肠杆菌中诱导表达并纯化蛋白P/BPT,免疫BALB/c小鼠,乳酸脱... 目的:对乙型肝炎病毒重组多表位抗原基因在大肠杆菌中表达的融合蛋白P/BPT进行免疫原性分析,以期为HBV预防/治疗性疫苗的研制奠定实验基础。方法:构建重组质粒pWR450-1/BPT,在大肠杆菌中诱导表达并纯化蛋白P/BPT,免疫BALB/c小鼠,乳酸脱氢酶释放法检测该融合蛋白诱导小鼠的细胞毒T淋巴细胞(CTL)应答,ELISA法检测小鼠血清抗-P/BPT抗体水平,流式细胞仪检测小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞亚群比例,用RT-PCR方法半定量检测细胞因子特异性mRNA,MTT法测淋巴细胞增殖效应。结果:P/BPT蛋白免疫后,效靶比为100:1时,可有效诱发特异性CTL应答(P<0.05);ELISA方法测出小鼠血清抗-P/BPTIgG明显升高(P<0.05);P/BPT蛋白免疫后,可显著刺激小鼠脾淋巴细胞增值(P<0.05);CD4+T淋巴细胞和细胞因子IFN-γ的增殖和分泌水平亦有明显升高。结论:该融合蛋白可有效诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答,为进一步研制乙肝预防治疗性疫苗奠定了初步基础。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 治疗性疫苗 多表位
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绵羊痘病毒多表位基因的构建及原核表达 被引量:3
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作者 陈轶霞 王明明 +2 位作者 龙玲 邵忠伟 刘俊林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期86-90,共5页
通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位... 通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE,将其克隆到原核表达载体pET-32中,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒,构建pET32-mE质粒;用IPTG在不同条件下诱导表达,确定最佳表达条件,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,重组蛋白是分子质量为41ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5mmol/L,温度为37℃、诱导4h时目的蛋白的表达量最大,约占菌体的32%。Western-blotting试验表明,目的蛋白可被羊痘血清识别。 展开更多
关键词 绵羊痘病毒 抗原 多表位 嵌合基因 原核
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乙型肝炎病毒多表位治疗性抗原基因的合成、表达及抗原性研究 被引量:7
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作者 骆利敏 李明 +3 位作者 夏虎 黄建生 陈百虹 王萍 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第8期802-805,共4页
目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并... 目的研究乙型肝炎病毒多表位治疗性疫苗基因的合成、表达及其产物的抗原性。方法设计、并合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因BPT,克隆入融合表达载体pWR450-1,构建重组质粒PWR/BPT。在大肠杆菌中表达乙型肝炎多表位抗原蛋白并纯化该蛋白,并用Western-blotting方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。结果成功构建了融合表达载体PWR/BPT,在大肠杆菌中表达出乙型肝炎多表位抗原蛋白,Western-blotting 检测显示该蛋白具有良好抗原性。结论HBV多表位治疗性抗原基因的设计是成功的,其在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性,可能是较理想的HBV治疗性疫苗候选物。 展开更多
关键词 乙型肝炎 多表位 治疗性疫苗
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弓形虫多表位基因的构建及其在大肠杆菌系统中的表达鉴定 被引量:30
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作者 杨培梁 陈晓光 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2002年第2期37-40,16,共5页
目的 构建弓形虫和破伤风毒素多个表位的编码基因 ,将其在大肠杆菌系统进行表达 ,评价重组抗原的特异反应性。方法 从弓形虫保护性抗原及通用免疫增强佐剂破伤风毒素中选取含有T和 (或 )B细胞表位的抗原片段 ,通过软件分析在各片段之... 目的 构建弓形虫和破伤风毒素多个表位的编码基因 ,将其在大肠杆菌系统进行表达 ,评价重组抗原的特异反应性。方法 从弓形虫保护性抗原及通用免疫增强佐剂破伤风毒素中选取含有T和 (或 )B细胞表位的抗原片段 ,通过软件分析在各片段之间插入适当数目、起间隔作用的氨基酸 ,以保持个片段的空间构象独立性 ,从而确定氨基酸顺序。根据氨基酸序列选取适当的密码子构成弓形虫多表位基因。将该基因合成并鉴定后 ,亚克隆入原核表达载体 ,在大肠杆菌中表达并分析表达产物的表达形式和抗原活性。结果 成功构建了长度为 36 0bp的弓形虫多表位基因。该基因在原核表达系统中经诱导 ,得到了 14 4kDa的包涵体形式的表达产物。免疫印迹实验表明该产物具有强特异性抗原活性。 展开更多
关键词 弓形虫 多表位基因 大肠杆菌 蛋白 抗原活性
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流行性乙型脑炎病毒E蛋白多表位肽在毕赤酵母中分泌表达及其免疫原性研究 被引量:3
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作者 钟登科 黄艺珠 +4 位作者 魏建超 康乐 曹瑞兵 周斌 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期296-300,507,共5页
为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV) E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽(MP)序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中,构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中,重组酵母菌组子经甲醇诱导表... 为构建流行性乙型脑炎病毒(JEV) E蛋白多表位疫苗,本研究将人工合成的优化后E蛋白多表位肽(MP)序列克隆于酵母表达载体pPICZα-A中,构建分泌型重组酵母表达质粒pPICZ-MP后电转化导于毕赤酵母X-33中,重组酵母菌组子经甲醇诱导表达重组蛋白(rMP)。将其免疫小鼠后,通过测定rMP免疫小鼠的抗体水平、抗体亚型、中和抗体和CTL,以评价该多表位疫苗在小鼠模型的免疫原性。结果显示正确构建了表达JEV E蛋白多表位抗原的重组酵母菌株X33 (pPICZ -MP),并分泌表达多表位肽rMP ;纯化后的rMP免疫小鼠产生了较强的体液免疫和细胞免疫反应,其中和抗体水平、CTL活性均与活病毒疫苗组无显著差异(p〉0.05),而且能保护小鼠免受致死量JEV的攻击。上述结果表明本研究以酵母菌表达的JEV E蛋白多表位疫苗具有良好的的免疫原性,能够刺激小鼠产生特异性的细胞免疫和体液免疫应答反应,为流行性乙型脑炎多表位疫苗研制提供了新的思路。 展开更多
关键词 流行性乙型脑炎病毒 多表位疫苗 毕赤酵母 免疫原性
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具有免疫反应性的弓形虫多表位抗原在大肠杆菌中的可溶性表达和鉴定 被引量:4
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作者 杨培梁 陈晓光 +4 位作者 王元占 李华 周晓红 吴焜 言慧 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期528-530,544,共4页
目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠... 目的获得弓形虫多表位基因在原核系统中可溶性表达产物,为弓形虫病重组抗原试剂盒的制备及疫苗的研究奠定基础。方法以PCR法扩增弓形虫多表位基因,使其两端带有与载体pET32a相匹配的酶切位点,插入载体pET32a,酶切并测序鉴定后,转入大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG进行诱导,SDS-PAGE分析和鉴定该基因的表达水平、表达产物的可溶性及其相对分子质量,Western-blot分析表达产物的免疫反应性。结果该基因在原核表达系统中经诱导,得到了Mr31000的可溶性融合表达产物。经Ni-NTA纯化,纯度可达90%以上。免疫印迹实验表明该产物能够被弓形虫B36感染的小鼠血清和弓形虫RH感染的兔血清特异识别。结论弓形虫多表位基因在原核中的可溶性表达产物在弓形虫病诊断及疫苗研究中有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 弓形虫 多表位 大肠杆菌 蛋白 免疫反应性
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