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多色熔解曲线法快速检测5种小鼠病原体
1
作者
徐逸梦
刘欣怡
+3 位作者
胡珊珊
周宇荀
李凯
肖君华
《生物学杂志》
北大核心
2025年第2期107-111,117,共6页
借助多色熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感...
借助多色熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感染情况。同时添加辣椒基因组作为内参,排除假阴性干扰,使结果更准确可靠。通过对探针进行设计,使不同病原菌在不同荧光通道的不同的Tm值处出现熔解峰:在FAM荧光通道,金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的熔解峰Tm值分别为(53.51±0.94)℃、(61.23±0.34)℃;在ROX通道,铜绿假单胞菌和嗜肺巴斯德杆菌的熔解峰Tm值分别为(61.70±0.66)℃、(55.98±0.10)℃;在CY5通道,变形杆菌和辣椒内参的熔解峰Tm值分别为(63.91±0.19)℃、(57.43±0.31)℃。经验证,该方法对不同病原体具有不同的检测限,分别为金黄色葡萄球菌102 copies/μL、肺炎克雷伯菌101 copies/μL、铜绿假单胞菌102 copies/μL、嗜肺巴斯德杆菌102 copies/μL、变形杆菌102 copies/μL。综上,研究建立的多色熔解曲线方法能够对多种小鼠常见病原体在单管内进行快速有效的检测。
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关键词
多色熔解曲线分析
多重PCR
小鼠病原体
分子检测
快速检测
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职称材料
应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变
被引量：
7
2
作者
胡韦维
李进
+5 位作者
刘益
刘之岱
张娟
余朝文
邹琳
张鹏辉
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期830-835,共6页
目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者...
目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%,与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917,P<0.05);但女性的灵敏度仅10%,特异性100%,与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127,P<0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%,特异性100%,与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891,P<0.05);女性的灵敏度100%,特异性100%,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754),G6PD酶活性均正常。结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法。
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关键词
多色
探针
熔解
曲线
分析
法
G6PD缺乏症
杂合子
基因诊断
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职称材料
题名
多色熔解曲线法快速检测5种小鼠病原体
1
作者
徐逸梦
刘欣怡
胡珊珊
周宇荀
李凯
肖君华
机构
东华大学生物与医学工程学院
出处
《生物学杂志》
北大核心
2025年第2期107-111,117,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFA0801101)。
文摘
借助多色熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感染情况。同时添加辣椒基因组作为内参,排除假阴性干扰,使结果更准确可靠。通过对探针进行设计,使不同病原菌在不同荧光通道的不同的Tm值处出现熔解峰:在FAM荧光通道,金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的熔解峰Tm值分别为(53.51±0.94)℃、(61.23±0.34)℃;在ROX通道,铜绿假单胞菌和嗜肺巴斯德杆菌的熔解峰Tm值分别为(61.70±0.66)℃、(55.98±0.10)℃;在CY5通道,变形杆菌和辣椒内参的熔解峰Tm值分别为(63.91±0.19)℃、(57.43±0.31)℃。经验证,该方法对不同病原体具有不同的检测限,分别为金黄色葡萄球菌102 copies/μL、肺炎克雷伯菌101 copies/μL、铜绿假单胞菌102 copies/μL、嗜肺巴斯德杆菌102 copies/μL、变形杆菌102 copies/μL。综上,研究建立的多色熔解曲线方法能够对多种小鼠常见病原体在单管内进行快速有效的检测。
关键词
多色熔解曲线分析
多重PCR
小鼠病原体
分子检测
快速检测
Keywords
multicolor melting curve analysis
multiple PCR
mouse pathogens
molecular detection
rapid detection
分类号
Q93-332 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变
被引量：
7
2
作者
胡韦维
李进
刘益
刘之岱
张娟
余朝文
邹琳
张鹏辉
机构
重庆医科大学附属儿童医院检验科儿童发育疾病研究教育部重点实验室儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地重庆市干细胞治疗工程技术研究中心
陆军军医大学(第三军医大学)第三附属医院(野战外科研究所)检验科
重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期830-835,共6页
基金
重庆市社会民生科技创新专项(CSTC2016shmszx130032)~~
文摘
目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%,与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917,P<0.05);但女性的灵敏度仅10%,特异性100%,与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127,P<0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%,特异性100%,与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891,P<0.05);女性的灵敏度100%,特异性100%,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754),G6PD酶活性均正常。结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法。
关键词
多色
探针
熔解
曲线
分析
法
G6PD缺乏症
杂合子
基因诊断
Keywords
muhicolor melting curve analysis
G6PD deficiency
heterozygote
genetic diagnosis
分类号
R394.2 [医药卫生—医学遗传学]
R446.9 [医药卫生—诊断学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
多色熔解曲线法快速检测5种小鼠病原体
徐逸梦
刘欣怡
胡珊珊
周宇荀
李凯
肖君华
《生物学杂志》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变
胡韦维
李进
刘益
刘之岱
张娟
余朝文
邹琳
张鹏辉
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
7
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