多色熔解曲线法快速检测5种小鼠病原体

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作者 徐逸梦 刘欣怡 +3 位作者 胡珊珊 周宇荀 李凯 肖君华 《生物学杂志》 北大核心 2025年第2期107-111,117,共6页

借助多色熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感... 借助多色熔解曲线分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感染情况。同时添加辣椒基因组作为内参,排除假阴性干扰,使结果更准确可靠。通过对探针进行设计,使不同病原菌在不同荧光通道的不同的Tm值处出现熔解峰:在FAM荧光通道,金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的熔解峰Tm值分别为(53.51±0.94)℃、(61.23±0.34)℃;在ROX通道,铜绿假单胞菌和嗜肺巴斯德杆菌的熔解峰Tm值分别为(61.70±0.66)℃、(55.98±0.10)℃;在CY5通道,变形杆菌和辣椒内参的熔解峰Tm值分别为(63.91±0.19)℃、(57.43±0.31)℃。经验证,该方法对不同病原体具有不同的检测限,分别为金黄色葡萄球菌102 copies/μL、肺炎克雷伯菌101 copies/μL、铜绿假单胞菌102 copies/μL、嗜肺巴斯德杆菌102 copies/μL、变形杆菌102 copies/μL。综上,研究建立的多色熔解曲线方法能够对多种小鼠常见病原体在单管内进行快速有效的检测。 展开更多

关键词 多色熔解曲线分析 多重PCR 小鼠病原体 分子检测 快速检测

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应用多色探针熔解曲线法检测G6PD缺乏症杂合子的基因突变 被引量：7

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作者 胡韦维 李进 +5 位作者 刘益 刘之岱 张娟 余朝文 邹琳 张鹏辉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期830-835,共6页

目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者... 目的应用多色探针熔解曲线法(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立一种快速筛查葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症杂合子的临床方法。方法收集重庆地区2015年1月至2016年7月共429例(男性342例,女性87例)疑似G6PD缺乏症的患者外周血,采用G6PD/6PGD定量比值法和MMCA法分别检测男性和女性G6PD酶活性和基因突变,以金标准Sanger测序来评价两种方法。同时收集重庆地区进行G6PD缺乏症新生儿疾病筛查的1 754份女性末梢血滤纸片,采用MMCA法筛查G6PD基因突变。结果 429例疑似病例中,G6PD/6PGD定量比值法诊断男性的灵敏度96.8%、特异性100%,与Sanger测序法一致性好(Kappa=0.917,P<0.05);但女性的灵敏度仅10%,特异性100%,与Sanger测序法一致性差(Kappa=0.127,P<0.05)。MMCA法诊断男性的灵敏度95.7%,特异性100%,与Sanger测序法一致性较好(Kappa=0.891,P<0.05);女性的灵敏度100%,特异性100%,与Sanger测序法结果完全吻合(Kappa=1.000,P<0.05)。1 754例女性中杂合子占1.14%(20/1 754),G6PD酶活性均正常。结论与传统的G6PD/6PGD定量比值法比较,MMCA法检测杂合子灵敏度更高,可用于G6PD缺乏症杂合子筛查,为一种简便、准确的诊断新方法。 展开更多

关键词 多色探针熔解曲线分析法 G6PD缺乏症 杂合子 基因诊断

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荧光定量PCR探针熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药基因检测中的应用 被引量：34

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作者 胡春梅 郭晶 +2 位作者 严虹 施旭东 张侠 《中国防痨杂志》 CAS 2016年第1期38-41,共4页

目的应用荧光定量PCR探针熔解曲线法检测耐多药结核病患者的临床分离菌株对一线抗结核药物的耐药基因突变。方法于2009年1月1日至2012年12月31日留取南京市胸科医院结核科门诊部或住院的所有肺结核患者痰液标本，每人3～5ml，均进行痰... 目的应用荧光定量PCR探针熔解曲线法检测耐多药结核病患者的临床分离菌株对一线抗结核药物的耐药基因突变。方法于2009年1月1日至2012年12月31日留取南京市胸科医院结核科门诊部或住院的所有肺结核患者痰液标本，每人3～5ml，均进行痰结核分枝杆菌培养、鉴定和药物敏感性试验（简称“药敏试验”），分离出结核分枝杆菌菌株67株。应用荧光定量PCR探针熔解曲线法，根据靶序列熔点变化，实时PCR检测结核病患者的临床分离标本对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的耐药情况；通过与传统药敏试验进行对比，对2种结果不一致的菌株进行基因测序分析，探讨其发生突变的位点差异，并观察在治疗中的变化。结果利福平和异烟肼的表型和基因型检测具有较高的一致性，分别为99％（66／67）和97％（65／67），不一致的菌株都是表型检测法为耐药，而基因型检测为敏感，测序未检测到突变。乙胺丁醇和链霉素的表型和基因型检测一致性较低，分别为60％（40／67）和75％（50／67）。测序发现，乙胺丁醇的突变发生在embB306和embB406位点上；链霉素突变发生在rrs基因517位点和907位点，以及rpsL43耐药密码子。结论应用荧光定量PCR探针熔解曲线法，能快速筛查结核分枝杆菌对一线抗结核药物的耐药情况。 展开更多

关键词 探针熔解曲线法 结核 肺 抗药性 多种 细菌 耐药基因 突变

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探针熔解曲线法快速检测结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变 被引量：7

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作者 张婷 付军 +5 位作者 王国治 陈保文 杨蕾 卢锦标 许晔 李庆阁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期412-417,共6页

目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以... 目的评价结核分枝杆菌注射类二线药耐药突变检测试剂盒MeltPro TB/SL的分析性能以及临床性能。方法首先使用企业参考品对试剂盒的突变检出能力进行考察,之后将野生型基因组DNA以10倍梯度稀释后考察试剂盒的最低检测限,使用野生型质粒以及含常见耐药突变的质粒以不同突变比例混合考察试剂盒检测不均一耐药样本的能力,并使用23株非结核分枝杆菌标准株考察试剂盒的分析特异性,最后使用241份临床分离株对试剂盒进行临床评价。结果该试剂盒可以将9种耐药相关突变与1种野生型多态性与野生型进行区分。可以检测到低至5个拷贝的野生型基因组DNA。当突变比例为30%或更高时,试剂盒可以将其与野生型进行区分。23种非结核分枝杆菌的结果显示该试剂盒有良好的特异性。和比例法药敏试验进行对比,该试剂盒的临床灵敏度为卡那霉素90.0%(9/10),阿米卡星80.0%(8/10),卷曲霉素85.7%(6/7);特异性为卡那霉素98.8%(85/86),阿米卡星98.8%(85/86),卷曲霉素96.6%(86/89)。试剂盒检测结果与测序结果一致。结论该试剂盒灵敏度高、特异性好,可以快速、准确地检测结核分枝杆菌注射类二线药常见的耐药突变,有望应用于临床。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 注射类二线药 耐药突变 探针熔解曲线法

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高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变及其临床意义 被引量：4

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作者 王倩 顾页 林洁 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第8期840-842,共3页

目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠... 目的 K-ras基因在结直肠癌的发生、发展以及需要靶向药物治疗的药物选择方面具有重大临床意义。文中旨在探讨高分辨率熔解曲线分析法检测结直肠癌组织K-ras基因突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。方法收集179例结直肠癌患者的手术标本,检测结直肠癌组织中K-ras基因第12、13位密码子的突变情况,并分析K-ras基因突变与临床病理参数的关系。结果 179例结直肠癌组织标本中,K-ras基因突变率为43.02%（77/179）;在≥60岁组结直肠癌患者中K-ras基因突变率明显高于〈60岁组（55.17%vs 33.70%,P〈0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄对K-ras基因突变有显著影响（OR=1.506,95%CI：1.028~2.011）。结论结直肠癌患者K-ras基因的突变与年龄相关,与性别、分化程度、病变部位及Dukes分期无关。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析法 结直肠癌 K-RAS基因 突变

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岩石矿物中氧化铁电子探针价态定量分析方法的研究 被引量：3

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作者 朱德升 魏宝和 何锦发 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期510-515,共6页

本文主要论述利用标准曲线法测定矿物中价态铁含量的电子探针定量分析方法。电子探针定量分析含氧化铁矿物时,氧化铁的成分只能以"FeO"形式给出全铁的含量,而不能准确地把"Fe2O3"和"FeO"各自的百分含量分... 本文主要论述利用标准曲线法测定矿物中价态铁含量的电子探针定量分析方法。电子探针定量分析含氧化铁矿物时,氧化铁的成分只能以"FeO"形式给出全铁的含量,而不能准确地把"Fe2O3"和"FeO"各自的百分含量分开,这就给地质研究人员对于地质环境,矿物的成因,成岩作用及成岩后生作用等方面的研究带来很多困难。根据地质研究的需要,作者进行了此方法的研究及实验。利用天然菱铁矿和赤铁矿配制含有不同比例的FeO和Fe2 O3的标准样品。用电子探针测定这些标样中铁元素的Lα和Lβ的强度值,经过ZAF法修正,得到ILα/ILβ的强度比值,由Lα和Lβ线系的强度比和标样中价态铁的浓度比绘制成标准曲线。样品中铁元素的价态值,根据电子探针定量分析"FeO"数据及ILα/ILβ的比值,由此曲线求得FeO和Fe2O3的定量分析结果。 展开更多

关键词 电子探针定量分析 电子探针状态分析 标准曲线法

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色谱经济分析法在股票分类中的应用研究 被引量：2

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作者 游士兵 廖祺 《中南财经政法大学学报》 CSSCI 北大核心 2015年第3期63-70,共8页

本文利用色谱经济柱系统中的塔板理论,对有效市场假定条件下股票分类问题进行了相关的理论借鉴和模拟运算。模拟结果表明,某一类股票总体在色谱柱中的流动会形成一个类似于正态分布的流出曲线,这与从塔板理论导出的色谱流出曲线方程的... 本文利用色谱经济柱系统中的塔板理论,对有效市场假定条件下股票分类问题进行了相关的理论借鉴和模拟运算。模拟结果表明,某一类股票总体在色谱柱中的流动会形成一个类似于正态分布的流出曲线,这与从塔板理论导出的色谱流出曲线方程的正态分布峰相吻合。色谱柱放大了各类股票的差异性,当两峰完全分离时,可以认为在其中的每个峰值处流出的股票属于同一类别。因此,色谱分析法可以有效地将不同类别的股票进行分离。本研究不仅为股票的分类提供了一个新的思路,也为色谱经济分析法这一方法论提供了一个实际应用方面的例证。 展开更多

关键词 股票分类 色谱经济分析法 塔板理论 分配比 流出曲线

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白念珠菌唑类耐药分子检测体系的建立

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作者 王梦凡 王旭 +1 位作者 刘春龙 齐崴 《天津大学学报(自然科学与工程技术版)》 北大核心 2025年第4期414-422,共9页

随着免疫抑制剂与侵入性手术的应用,侵袭性真菌病的发病率逐渐上升,而由此出现的抗真菌药物大量使用也导致了真菌耐药性的增强.其中,白念珠菌(Candida albicans)对唑类药物耐药性日益明显,这对开发早期临床耐药性诊断方法提出了更大的需... 随着免疫抑制剂与侵入性手术的应用,侵袭性真菌病的发病率逐渐上升,而由此出现的抗真菌药物大量使用也导致了真菌耐药性的增强.其中,白念珠菌(Candida albicans)对唑类药物耐药性日益明显,这对开发早期临床耐药性诊断方法提出了更大的需求.相关研究显示,白念珠菌的耐药性涉及到多种机制,其中erg11基因上的热点区突变是其产生唑类耐药性的主要机制之一.本研究旨在基于多色探针熔解曲线分析技术(MMCA)建立一种针对白念珠菌唑类耐药的分子检测方法,从而对3个热点突变区内的4种主要的突变类型进行基因分型.研究纳入了11株耐药和22株敏感的白念珠菌,通过对其进行药敏检测、耐药相关基因突变类型鉴定,建立真菌耐药表型与耐药基因型之间的联系.药敏结果显示,11株耐药株和22株敏感株的最低抑菌浓度(MIC)值分别为16~64μg/mL和0.5~1.0μg/mL.耐药基因型鉴定结果显示有erg11HS1热点区突变的菌株9株,erg11HS3热点区突变的菌株2株,未能鉴定到erg11HS2热点区突变的菌株,相关突变型与耐药性之间的联系符合预期结果.在此基础上,通过设计数对特异性引物和荧光探针,并筛选最佳反应程序,建立了一种鉴定有关突变型与野生型的MMCA检测体系.对该检测体系的效果进行了评估和验证:所有4种突变型和野生型均被准确分型,两者的溶解温度差异均大于3.5℃,检出限最低可达1.9×10^(2)拷贝数/mL,扩增效率均大于90%.在33例白念珠菌的样本中,以一代测序为标准,该体系检测的一致率为93.94%(31/33),不同物种间无特异性交叉.本研究为白念珠菌病的早期唑类药物耐药性诊断提供了新方法. 展开更多

关键词 白念珠菌 耐药性 探针熔解曲线分析 突变型

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白血病NPM1基因突变快速检测与分型方法的研究 被引量：1

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作者 陈超 林珺 +2 位作者 龙凯 杨玉春 李志鹏 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期403-407,共5页

目的:建立一种通过荧光探针熔解曲线分析技术对急性髓系白血病(AML)中NPM1突变基因快速检测和分型的方法。方法:设计Nucleoplasmin(NPM1)第12号外显子突变基因mut A、mut B、mut D和野生型的一对共用引物和一条荧光单链探针(分子信标),... 目的:建立一种通过荧光探针熔解曲线分析技术对急性髓系白血病(AML)中NPM1突变基因快速检测和分型的方法。方法:设计Nucleoplasmin(NPM1)第12号外显子突变基因mut A、mut B、mut D和野生型的一对共用引物和一条荧光单链探针(分子信标),依据PCR产物与探针的熔解曲线峰值对A、B、D型基因突变进行检测与分型。结果:本方法可对NPM1的A、B、D型基因突变和野生型进行有效分型,灵敏度为1%。通过对62份AML临床样本进行检测,本方法的检出率、分型结果与临床样本测序信息一致。结论:本研究建立的NPM检测方法,PCR体系简单稳定,操作便捷,结果易于判读,可以与测序法互为补充作为AML早期诊断或伴随诊断的NPM1突变快速检测分型方法。 展开更多

关键词 荧光探针熔解曲线分析 NPM1 检测与分型

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彩色印刷图像平面呈色模型的验证与应用研究 被引量：5

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作者 徐敏 徐锦林 《包装工程》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期34-35,38,共3页

介绍彩色印刷网点图像平面呈色模型的基本內容,用FORCA及笔者自测的数据,采用回归及曲线拟合算法,建立IT8.7/3标准色谱中三色胶印色块的平面方程,列出具体的平面方程系数和曲线系数,并做了详细的误差分析,验证了平面模型的正确性,并对... 介绍彩色印刷网点图像平面呈色模型的基本內容,用FORCA及笔者自测的数据,采用回归及曲线拟合算法,建立IT8.7/3标准色谱中三色胶印色块的平面方程,列出具体的平面方程系数和曲线系数,并做了详细的误差分析,验证了平面模型的正确性,并对此呈色模型的进一步研究与应用前景做了初步探索。 展开更多

关键词 彩色印刷图像 网点图像 呈色模型 验证 平面模型 曲线拟合算法 误差分析

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FMCA技术分析大前庭水管综合征家系及产前诊断 被引量：2

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作者 高慧 刘晶晶 +3 位作者 沈姗姗 梁少明 危林耿 王沙燕 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期536-540,共5页

目的应用FMCA技术检测双侧前庭水管扩大家系SLC26A4基因,探讨前庭水管扩大与SLC26A4基因的关系及FMCA技术最优条件。方法收集EVA家系临床资料,基于荧光定量PCR熔解曲线平台,运用FMCA技术分析107例正常人,6个EVA家系19位成员的SLC26A4基... 目的应用FMCA技术检测双侧前庭水管扩大家系SLC26A4基因,探讨前庭水管扩大与SLC26A4基因的关系及FMCA技术最优条件。方法收集EVA家系临床资料,基于荧光定量PCR熔解曲线平台,运用FMCA技术分析107例正常人,6个EVA家系19位成员的SLC26A4基因IVS7-2A>G(919-2A>G),2168A>G及1229C>T突变位点。并用直接测序技术予以验证。结果 107例正常人中有2例SLC26A4基因杂合突变,突变率为1.87%;EVA家系中有3例SLC26A4基因纯合突变,3例SLC26A4基因复合杂合突变,10例SLC26A4基因杂合突变,3例无SLC26A4基因突变,SLC26A4基因突变率为84.21%。对家系a进行产前诊断,结果为IVS7-2A>G/1229C>T复合杂合突变。所有检测结果与测序结果一致,符合率为100%。结论 FMCA平台能快速检测SLC26A4基因的IVS7-2A>G,2168A>G与1229C>T突变,其操作简单,成本低。且经测序技术验证,结果准确。可作为诊断遗传性疾病及产前诊断的快速有效方法。 展开更多

关键词 耳聋 前庭水管扩大 SLC26A4基因 FMCA 探针熔解曲线分析技术

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几种定量线粒体DNA1555A>G异质性突变检测方法 被引量：1

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作者 高慧 沈姗姗 +7 位作者 刘晶晶 王琳凯 梁少明 张阮章 胡玉华 郭辉 林玉梅 王沙燕 《中华耳科学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第5期686-691,共6页

目的利用Taq Man探针建立熔解曲线定量分析技术平台,比较Taq Man探针熔解曲线技术、变性高效液相色谱技术(DHPLC)及测序技术在检测线粒体DNA 1555A>G异质性突变负荷方面的差异。方法建立Taq Man探针熔解曲线技术,分析氨基糖苷类药物... 目的利用Taq Man探针建立熔解曲线定量分析技术平台,比较Taq Man探针熔解曲线技术、变性高效液相色谱技术(DHPLC)及测序技术在检测线粒体DNA 1555A>G异质性突变负荷方面的差异。方法建立Taq Man探针熔解曲线技术,分析氨基糖苷类药物性耳聋家系及正常人群的线粒体DNA 1555A>G异质性突变水平,并与前期实验中DHPLC技术及测序技术的检测结果进行对比分析。结果 Taq Man探针熔解曲线技术成功分析50例样本的线粒体DNA 1555A>G突变水平,相比于Sanger测序技术多发现1例异质性突变,但比DHPLC技术少发现3例异质性突变。结论本实验建立的Taq Man探针熔解曲线技术成功检出19%至86%范围内的线粒体DNA 1555A>G异质性突变水平,操作简单,成本低。 展开更多

关键词 线粒体DNA1555A〉G 耳聋 TAQMAN探针 熔解曲线 变性高效液相色谱分析技术

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胶质瘤IDH1基因突变检测及其临床应用策略 被引量：5

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作者 黎相照 薛小磊 +3 位作者 张中满 张颖芬 丁彦青 韩慧霞 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期778-781,共4页

目的 比较免疫组化EnVision法与高分辨率熔解曲线分析（high resolution melting curve analysis,HRM）法在测定异柠檬酸脱氢酶-1（IDH1）基因突变中的优缺点,为临床IDH1基因突变的检测提供策略。方法 运用免疫组化EnVision法和HRM法检... 目的 比较免疫组化EnVision法与高分辨率熔解曲线分析（high resolution melting curve analysis,HRM）法在测定异柠檬酸脱氢酶-1（IDH1）基因突变中的优缺点,为临床IDH1基因突变的检测提供策略。方法 运用免疫组化EnVision法和HRM法检测279例人胶质瘤及胶质神经元混合性肿瘤中IDH1基因突变。结果 免疫组化检测结果：279例中有81例发生IDH1基因突变;HRM检测结果：275例中77例存在IDH1基因突变,4例因为DNA质量不佳导致检测无结果。免疫组化EnVision法和HRM法检测IDH1基因突变具有较好的一致性,差异无显著性（P=0.375）。结论 IDH1基因突变主要发生在WHOⅡ~Ⅳ级的星形细胞、少突胶质细胞以及星形-少突胶质细胞瘤中;中国人IDH1基因突变率较国外低,原因有待进一步分析。IDH1-R132H抗体免疫组化检测IDH1基因突变的结果与HRM法检测结果具有高度的一致性,临床IDH1-R132检测首推免疫组化法,IDH1突变分子检测适用于免疫组化检测突变阴性的病例。 展开更多

关键词 脑肿瘤 胶质瘤 IDH1 免疫组织化学 高分辨率熔解曲线分析法

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