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题名基于双菌耦合发酵策略的烟酰胺单核苷酸合成
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作者
孙婷
张洪涛
杨峰
柴文刚
薛皓阳
谭淑引
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机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
海军军医大学药学系无机化学教研室
伦敦帝国理工学院医学院
江南大学化工学院
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出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2023年第24期201-210,共10页
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基金
解放军后勤保障部开放课题(ZZCWS21J2001)。
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文摘
本研究构建了分别含有烟酰胺核苷激酶(nicotinamideribosidekinase,NRK)和多聚磷酸酶(polyphosphatekinase,PPK)的双菌耦合发酵体系,实现了基于PPK的ATP再生系统在烟酰胺单核苷酸(nicotinamide mononucleotide,NMN)生产中的应用。首先分别构建表达NRK1和NRK2的工程菌株,筛选得到高活性的大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)-pET28a-NRK1,NMN产量5.17 g/L,产率77.4%;然后对NRK1的诱导表达条件进行优化,发现低温16℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷0.7 mmol/L、接种量3%、诱导时长22 h更利于蛋白的可溶性表达;进一步对E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1合成NMN的最优体系进行探索,发现在菌体质量浓度100 g/L、温度18℃、时间12 h、ATP与烟酰胺核糖(nicotinamide riboside,NR)浓度比1∶1.5时,NMN产量最高为5.73 g/L,产率85.78%;最后,通过对E. coli BL21(DE3)pET28a-PPK和E. coli BL21(DE3)-pET28a-NRK1耦合发酵系统进行优化,得到最优体系为ATP与NR浓度比1∶3.5、菌体质量浓度比1∶2、发酵时间16 h,NMN产量达11.81 g/L。本研究所建立的高密度双菌耦合发酵产NMN工艺为高效、低成本的大规模发酵生产NMN开辟了新途径。
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关键词
烟酰胺单核苷酸
烟酰胺核苷激酶
多聚磷酸酶
ATP再生
耦合发酵
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Keywords
nicotinamide mononucleotide
nicotinamide nucleoside kinase
polyphosphate kinase
ATP regeneration
coupled fermentation
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分类号
Q815
[生物学—生物工程]
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题名PNKP沉默对骨肉瘤放疗的增敏作用
被引量：1
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作者
周斌
李宏维
史继德
王颢
张海鸿
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机构
兰州大学第二医院骨三科
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出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第4期390-395,共6页
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基金
甘肃省科技厅自然科学研究基金计划(1208RJZA272)
甘肃省科技厅创新研究群体计划(2013GS10047)~~
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文摘
目的研究多聚核苷酸激酶/磷酸酶(polynucleotide kinase/phosphatase,PNKP)在放疗诱导的细胞DNA损伤、细胞凋亡、细胞增殖和细胞周期中的调节作用。方法将U2OS细胞系分为3组:骨肉瘤细胞对照组、阴性si RNA转染组(si C)和PNKP si RNA转染组(si PNKP)。Western blot检测0、1、2、4、6、8 Gy 6个剂量水平γ-射线照射后U2OS细胞中PNKP的变化,CCK-8分析不同剂量γ-射线照射后细胞的存活率,彗星实验检测辐射后骨肉瘤细胞DNA的损伤,MTT法检测辐射后细胞增殖情况,流式细胞仪分析辐射后细胞凋亡、线粒体膜电位和细胞周期的变化。结果 4 Gy剂量的γ-射线可以显著降低骨肉瘤细胞U2OS中PNKP的表达(55.17%,P<0.01)和细胞的存活能力(与对照组相比下降50.16%,P<0.01)。与单独辐射组(si C+IR)对比,PNKP沉默可以抑制辐照后细胞的生长(抑制率增加到129.61%,P<0.01),增加DNA的损伤(DNA迁移量增加58.94%,P<0.01),使细胞周期停滞在S期,促进细胞凋亡以及降低线粒体膜电位水平。结论 PNKP沉默可以增加骨肉瘤细胞放射治疗的敏感性。
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关键词
多聚核苷酸激酶/磷酸酶
骨肉瘤
放疗敏感性
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Keywords
polynucleotide kinase/phosphatase
osteosarcoma
radiosensitivity
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分类号
R345.57
[医药卫生—基础医学]
R730.55
[医药卫生—肿瘤]
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