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多维离子交换色谱分离和串联质谱鉴定在小鼠肝脏膜蛋白质组分析中的应用
被引量：
2
1
作者
王灼维
彭福利
+4 位作者
王媛
童维
任艳
徐宁志
刘斯奇
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期115-122,共8页
膜蛋白质在变性剂作用下能够较充分地溶解。根据这一特点,我们试图在变性剂溶液中采用串联离子交换色谱法分离小鼠肝脏膜蛋白质。将小鼠肝脏膜蛋白质溶解于含有4mol/L尿素,20mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH9.0)中,用Q-Seph...
膜蛋白质在变性剂作用下能够较充分地溶解。根据这一特点,我们试图在变性剂溶液中采用串联离子交换色谱法分离小鼠肝脏膜蛋白质。将小鼠肝脏膜蛋白质溶解于含有4mol/L尿素,20mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH9.0)中,用Q-SepharoseFF和SephacrylS-200HR树脂组成的色谱柱结合大部分溶解的膜蛋白质,然后采用氯化钠线性梯度洗脱蛋白质,分步收集后采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进一步分离洗脱组分的蛋白质。利用胶内胰蛋白酶消化技术将SDS-PAGE胶内分离的蛋白质降解为相应的肽段,然后以反相高效液相色谱分离和离子阱质谱仪鉴定肽段。根据文献报道和蛋白质的功能分类,在所鉴定的392个蛋白质中有306个可能为膜蛋白质或膜结合蛋白质。蛋白质的疏水性计算表明,GRAVY(grandaverageofhydropathicity)得分大于或等于0.00的蛋白质有83个。综上所述,我们有理由认为本实验方法基本符合小鼠肝脏膜蛋白质组学研究的要求。
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关键词
多维离子交换色谱
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
反相高效液相
色
谱
串联质
谱
膜蛋白质
小鼠肝脏
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职称材料
题名
多维离子交换色谱分离和串联质谱鉴定在小鼠肝脏膜蛋白质组分析中的应用
被引量：
2
1
作者
王灼维
彭福利
王媛
童维
任艳
徐宁志
刘斯奇
机构
中国科学院北京基因组研究所
北京华大蛋白质研发中心有限公司
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期115-122,共8页
基金
国家高技术研究与发展计划("863"计划)项目(No.2006AA02A308)
国家自然科学基金项目(No.30700378)
文摘
膜蛋白质在变性剂作用下能够较充分地溶解。根据这一特点,我们试图在变性剂溶液中采用串联离子交换色谱法分离小鼠肝脏膜蛋白质。将小鼠肝脏膜蛋白质溶解于含有4mol/L尿素,20mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH9.0)中,用Q-SepharoseFF和SephacrylS-200HR树脂组成的色谱柱结合大部分溶解的膜蛋白质,然后采用氯化钠线性梯度洗脱蛋白质,分步收集后采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进一步分离洗脱组分的蛋白质。利用胶内胰蛋白酶消化技术将SDS-PAGE胶内分离的蛋白质降解为相应的肽段,然后以反相高效液相色谱分离和离子阱质谱仪鉴定肽段。根据文献报道和蛋白质的功能分类,在所鉴定的392个蛋白质中有306个可能为膜蛋白质或膜结合蛋白质。蛋白质的疏水性计算表明,GRAVY(grandaverageofhydropathicity)得分大于或等于0.00的蛋白质有83个。综上所述,我们有理由认为本实验方法基本符合小鼠肝脏膜蛋白质组学研究的要求。
关键词
多维离子交换色谱
十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
反相高效液相
色
谱
串联质
谱
膜蛋白质
小鼠肝脏
Keywords
multidimensional ion-exchange chromatography
sodium-dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE）
reversed-phase high performance liquid chromatography（RP-HPLC）
tandem mass spectrometry（MS/MS）
membrane protein
mouse liver
分类号
O658 [理学—分析化学]
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作者
出处
发文年
被引量
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1
多维离子交换色谱分离和串联质谱鉴定在小鼠肝脏膜蛋白质组分析中的应用
王灼维
彭福利
王媛
童维
任艳
徐宁志
刘斯奇
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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