藜磷酸肌醇5-磷酸酶基因(CaP5P)的表达分析和胁迫响应检测

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作者 贺转转 谷丽丽 +1 位作者 李秀明 兰海燕 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期731-737,共7页

植物通过多种信号途径感知外界环境变化,从而引发一系列的信号级联反应,其中磷脂信号途径起着重要的作用。本研究从藜盐胁迫差减文库中获得了一个EST05序列,利用RT-PCR检测了其在非生物胁迫下表达趋势,显示EST05序列在非生物胁迫下的表... 植物通过多种信号途径感知外界环境变化,从而引发一系列的信号级联反应,其中磷脂信号途径起着重要的作用。本研究从藜盐胁迫差减文库中获得了一个EST05序列,利用RT-PCR检测了其在非生物胁迫下表达趋势,显示EST05序列在非生物胁迫下的表达有升高。随后利用RACE技术获得其全长编码序列,测序结果显示其与蓖麻(Ricinus communis)的磷酸肌醇5-磷酸酶基因(P5P)的同源性达56%,遂将其命名为CaP5P。最后过量表达CaP5P在拟南芥中初步验证了功能,转基因植株表现对盐胁迫耐受性降低的趋势,呈现负调控的特征。本研究对磷酸肌醇5-磷酸酶基因功能的初步研究为磷脂信号途径中负调控组分的分析提供了参考依据。 展开更多

关键词 藜 磷酸肌醇5-磷酸酶 胁迫响应 负调控 表达分析

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miR-765靶向Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶调控肝细胞癌细胞的增殖

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作者 谢星 王小农 +3 位作者 谢斌辉 何晓 谢元康 曾青山 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期43-47,共5页

目的:探讨微小RNA(miR)-765对Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)调控及其对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的影响。方法:采用实时定量PCR检测8例HCC组织和癌旁组织以及8组... 目的:探讨微小RNA(miR)-765对Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)调控及其对肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的影响。方法:采用实时定量PCR检测8例HCC组织和癌旁组织以及8组HCC细胞株中的miR-765的表达水平;MTT法检测过表达miR-765对HCC细胞增殖的影响;利用分子生物学技术构建INPP4B的3′-UTR报告基因,分析miR-765对INPP4B的调控作用,然后采用Western blotting法分别检测过表达和沉默miR-765对INPP4B蛋白表达的影响;应用Western blotting法和克隆形成实验探讨特异性抑制INPP4B对HCC细胞株增殖的影响。结果:在HCC癌组织以及HCC细胞株中高表达miR-765(P<0.05)。转染miR-765促进HCC细胞的增殖[(3.78±1.25)vs(2.06±0.47),P<0.05]。miR-765能够显著下调INPP4B的3′-UTR报告基因的荧光表达[(0.42±0.01)vs(1.01±0.01),P<0.05],显著上调INPP4B蛋白的表达[(0.92±0.04)vs(0.42±0.02)、(0.62±0.03),P<0.05]。特异性抑制INPP4B后明显促进HCC细胞的增殖[(238.0±1.73)vs(66.33±5.04),P<0.05]。结论:miR-765通过调控INPP4B的表达来促进HCC细胞的增殖。 展开更多

关键词 肝细胞癌 微小RNA-765 Ⅱ型多磷酸肌醇4-磷酸酶 细胞增殖

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水稻1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶基因的电子克隆及表达

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作者 钮旭光 韩梅 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2006年第24期6408-6409,6411,共3页

利用电子克隆的基因克隆策略,以拟南芥1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶AtITL1的cDNA序列为信息探针,在水稻基因组数据库搜索到高度同源的水稻基因组序列,通过人工序列拼接及RT-PCR方法克隆得到了水稻编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物的基因... 利用电子克隆的基因克隆策略,以拟南芥1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶AtITL1的cDNA序列为信息探针,在水稻基因组数据库搜索到高度同源的水稻基因组序列,通过人工序列拼接及RT-PCR方法克隆得到了水稻编码1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶类似物的基因OsITL1的全长cDNA序列。RNA凝胶印迹分析表明,OsITL1基因的表达在转录水平上受NaCl、干旱及ABA的诱导,OsITL1可能参与了一些非生物胁迫的应答过程,在逆境条件下的基因转录和磷酸肌醇信号转导途径的调控中起重要作用。 展开更多

关键词 1 3 4-三磷酸肌醇5/6-激酶 电子克隆 非生物胁迫 表达分析

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花生1,3,4-三磷酸肌醇5/6激酶ITPK家族基因的鉴定和分析

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作者 任婧瑶 蒋春姬 +3 位作者 李新林 张鹤 于海秋 金华 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期432-440,共9页

1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶(ITPK)是一种保守的多功能酶,调控磷酸肌醇的代谢过程,广泛存在于动植物和线虫中。本研究从两个野生种花生基因组(Arachis duranensis和Arachis ipaensis)中获得Ad ITPK家族基因7个,Ai ITPK家族基因7个,利用生... 1,3,4-三磷酸肌醇5/6-激酶(ITPK)是一种保守的多功能酶,调控磷酸肌醇的代谢过程,广泛存在于动植物和线虫中。本研究从两个野生种花生基因组(Arachis duranensis和Arachis ipaensis)中获得Ad ITPK家族基因7个,Ai ITPK家族基因7个,利用生物信息学手段,系统地分析花生ITPK家族基因生物学特征。结果表明,Ad ITPKs和AiITPKs基因的染色体定位相似,在03号和05号染色体上都分别有2个ITPK家族成员,Ad ITPKs在A01、A08和A10号染色体上各1个,Ai ITPKs在B01、B07和B10号染色体上各1个;花生各ITPK基因含外显子数量在1~10个不等,可编码220~483个氨基酸;进化关系分析显示花生ITPK家族基因可分为3个亚家族;基于保守结构域分析显示,此家族蛋白含有4~6个保守结构基序。两基因组同源基因的二级结构相似性较大,而Ad ITPK5和Ai ITPK5、Ad ITPK6和AiITPK6两对同源基因例外;大部分基因的三级结构皆相似,但Ad ITPK1、Ad ITPK6、Ai ITPK1和Ai ITPK6与其余基因明显不同;花生ITPK家族基因在各器官中表达量不同,在发育前期的种子、根系和根瘤中表达较高。本研究为花生ITPK基因的后续研究奠定理论基础,为明确ITPK对花生生长中的调控作用提供了依据。 展开更多

关键词 花生 1 3 4-三磷酸肌醇5/6激酶(ITPK) 生物信息学分析

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miR-145-5p靶向双特异性磷酸酶6对人子宫内膜癌增殖、迁移、侵袭与凋亡的影响 被引量：12

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作者 门颖超 张蕾 艾浩 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期61-66,共6页

目的探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)靶向双特异性磷酸酶6(DUSP6)对于人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡能力的影响。方法人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为A组(未转染组)、B组(mimic NC组)、C组(mimic组)、D组(inhibitor NC... 目的探讨微小RNA-145-5p(miR-145-5p)靶向双特异性磷酸酶6(DUSP6)对于人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭与凋亡能力的影响。方法人子宫内膜癌Ishikawa细胞分为A组(未转染组)、B组(mimic NC组)、C组(mimic组)、D组(inhibitor NC组)、E组(inhibitor组),采用脂质体(Lipo 2000)细胞转染法转染。利用RT-PCR技术验证miR-145-5p的表达;过表达或抑制表达miR-145-5p对Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡影响将运用MTT、伤口愈合、Transwell及凋亡实验检测;运用生物信息学方法预测miR-145-5p的潜在靶基因;运用RT-PCR及Western Blot技术检测细胞转染后下游靶基因DUSP6mRNA及蛋白的表达水平。结果转染后48、72、96 h,C组比B组细胞增殖能力下降,E组比D组细胞的增殖能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。转染后24、48 h,C组比B组细胞迁移能力降低,E组比D组细胞迁移能力增强(P<0.05)。转染48 h后,C组比B组侵袭能力下降,E组比D组侵袭能力增强,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后,A组、B组、C组、D组、E组凋亡率分别为(0.66±0.05)%、(0.60±0.03)%、(17.74±1.02)%、(0.72±0.04)%、(0.31±0.02)%,差异有统计学意义(P<0.05)。经生物信息学在线软件预测DUSP6是miR-145-5p的潜在靶基因。转染48 h后,DUSP6 mRNA在A组、B组、C组、D组、E组中的相对表达水平分别为1.00±0.09、1.09±0.08、0.47±0.04、1.03±0.05、4.62±0.26,差异有统计学意义(P<0.05)。其蛋白的相对表达量为0.29±0.03、0.28±0.04、0.16±0.03、0.32±0.05、0.74±0.05,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-145-5p过表达后能够抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭并且促进癌细胞凋亡,其机制可能是通过负向调节DUSP6的表达而实现。 展开更多

关键词 miR-145-5p 子宫内膜癌 双特异性磷酸酶6 增殖 侵袭 凋亡

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产气肠杆菌磷酸酶基因克隆表达及其特性 被引量：7

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作者 赵洪新 来奇恒 +2 位作者 杨程 张子能 邢新会 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第8期2071-2078,共8页

产气肠杆菌(E.aerogenesIAM1183)的酸性磷酸酶,具有特异转移磷酸基团到核苷5′-位的功能,是极具应用价值的酶。本研究以产气肠杆菌(E.aerogenesIAM1183)的酸性磷酸酶(PhoC)为研究对象,采用基因工程手段,克隆了phoC基因,构建成酸性磷酸酶... 产气肠杆菌(E.aerogenesIAM1183)的酸性磷酸酶,具有特异转移磷酸基团到核苷5′-位的功能,是极具应用价值的酶。本研究以产气肠杆菌(E.aerogenesIAM1183)的酸性磷酸酶(PhoC)为研究对象,采用基因工程手段,克隆了phoC基因,构建成酸性磷酸酶(PhoC)与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合表达载体pMKL-c2x-phoC,把其转化到不同的宿主,进行催化研究。结果发现构建成的基因工程菌具有高于原始菌催化5′-I MP生成的能力、水解5′-I MP的活性降低、酶促反应的最适pH值近中性等特点。 展开更多

关键词 产气肠杆菌 酸性磷酸酶 克隆 5′-肌苷酸

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谷氨酰胺对早期断奶仔猪血清中GPT、AKP、5′-NT的影响 被引量：3

7

作者 陈静 刘显军 +1 位作者 边连全 汤喜林 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第3期109-112,共4页

研究了不同水平的谷氨酰胺对断奶仔猪血清中GPT、AKP、5′—NT活性的影响。试验证明,谷氨酰胺能够提高血清中酶的活性,缓解断奶给仔猪带来的应激,促进蛋白质的合成,还具有成骨作用。谷氨酰胺在断奶仔猪日粮中最适宜添加量为1.2%。

关键词 谷氨酰胺 断奶仔猪 血清 谷丙转氨酶 碱性磷酸酶 5’-核苷酸酶

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5-氮杂-2’-脱氧胞苷对涎腺腺样囊性癌中PTEN基因表达的影响

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作者 张华昌 向学熔 +2 位作者 范小平 杨明聪 吴静 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1194-1196,共3页

目的:研究5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dc)对涎腺腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞中抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosomet... 目的:研究5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-dc)对涎腺腺样囊性癌(Adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞中抑癌基因第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosometen,PTEN)的影响及可能的机制。方法:利用RT-PCR检测ACC细胞经甲基转移酶抑制剂5-Aza-dc作用后,PTEN基因mRNA的表达水平;Western blot检测5-Aza-dc干预对PTEN蛋白表达的影响。结果:在一定时间内,经5-Aza-dc作用后,ACC细胞中PTEN基因mRNA及蛋白表达水平逐渐增加,且差异有统计学意义(P<0.05),PTEN mRNA表达水平改变与PTEN蛋白的表达基本一致。结论:ACC细胞系中PTEN的低表达可能与PTEN基因启动子区甲基化状态有关。 展开更多

关键词 涎腺腺样囊性癌 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因

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微小RNA-26b-5p对缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道的影响

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作者 丁莹 王晶予 +1 位作者 汤天凤 郑丹丹 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 北大核心 2023年第10期1088-1092,共5页

目的探讨微小RNA(miR)-26b-5p对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PIP3)信号通路的调控作用以及对缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道的影响。方法选择SD大鼠72只,按照随机数表法分为假手术组、模型组、LY294002组、... 目的探讨微小RNA(miR)-26b-5p对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸(PIP3)信号通路的调控作用以及对缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道的影响。方法选择SD大鼠72只,按照随机数表法分为假手术组、模型组、LY294002组、阴性对照组、过表达组、联合组,每组12只。各组给予相应干预24h,除假手术组外的其余各组大鼠建立缺血性心律失常模型,假手术组大鼠仅开胸不结扎。建模过程中检测各组大鼠心律失常指标,采用Curtis-Walker评分法进行心律失常评分;荧光定量PCR法检测心房肌细胞中miR-26b-5p表达;全细胞膜片钳技术记录心房肌细胞L型钙通道电流(ICa-L);蛋白印迹法检测L型钙通道α1C亚基(CACNA1C)、钙调蛋白及PI3K/PIP3通路相关蛋白表达。结果与模型组比较,LY294002组大鼠左心室室性期前收缩次数、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间、心律失常评分、心房肌细胞ICa-L峰值密度绝对值、CACNA1C、钙调蛋白表达显著升高,磷酸化PI3K、PIP3、磷酸化蛋白激酶B(Akt)表达显著降低,过表达组大鼠左心室室性期前收缩次数、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间、心律失常评分、心房肌细胞ICa-L峰值密度绝对值、CACNA1C、钙调蛋白表达显著降低,miR-26b-5p、磷酸化PI3K、PIP3、磷酸化Akt表达显著升高(P<0.05)。与过表达组比较,联合组大鼠左心室室性期前收缩次数、室性心动过速持续时间、心室颤动持续时间、心律失常评分、心房肌细胞ICa-L峰值密度绝对值、CACNA1C、钙调蛋白表达显著升高,磷酸化PI3K、PIP3、磷酸化Akt表达显著降低(0.82±0.08vs1.09±0.11,0.91±0.09vs1.17±0.11,0.94±0.09vs1.20±0.12,P<0.05)。结论miR-26b-5p过表达可能通过激活PI3K/PIP3相关信号通路,阻滞缺血性心律失常大鼠心房肌细胞L型钙通道,改善心律失常表现。 展开更多

关键词 心律失常 心性 钙通道 L型 磷酸肌醇3-激酶类 微小RNA26b-5p

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枯草芽孢杆菌二步发酵法生产5’-肌苷酸 被引量：1

10

作者 何菊华 吴雪娇 +3 位作者 谢希贤 徐庆阳 张成林 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期24-29,共6页

5’-肌苷酸作为新一代增味剂的重要组成成分,在调味品行业具有十分重要的地位。为进一步缩短5’-肌苷酸生产周期,降低生产成本,在研究来源于摩氏摩根菌Morganella morganii的酸性磷酸酶AP/PTaseM催化条件基础上,将该酶编码基因pho CYM... 5’-肌苷酸作为新一代增味剂的重要组成成分,在调味品行业具有十分重要的地位。为进一步缩短5’-肌苷酸生产周期,降低生产成本,在研究来源于摩氏摩根菌Morganella morganii的酸性磷酸酶AP/PTaseM催化条件基础上,将该酶编码基因pho CYM克隆至肌苷生产菌株Bacillus subtilis JG,获得B.subtilis JAB和B.subtilis JAF,并根据重组菌株合成肌苷及表达酸性磷酸酶的特性,通过调控发酵条件实现了肌苷发酵和酶催化相偶联的二步发酵法生产5’-肌苷酸。经摇瓶发酵实验验证,两菌株5’-肌苷酸产量分别为2.4 g/L和3.0 g/L。 展开更多

关键词 5’-肌苷酸 酸性磷酸酶 枯草芽孢杆菌 二步发酵法

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Src homology 2 domain-containing inositol-5-phosphatase 1 （SHIP1） negatively regulates TLR4-mediated LPS response primarily through a phosphatase activity- and PI-3K-independent mechanism 被引量：6

11

作者 An H Xu H Zhang M Zhou J Feng T Qian C Qi R Cao X 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期45-45,共1页

关键词 同源关系 肌醇-5-磷酸酶1 酶活性 生物学

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骨髓间充质干细胞源外泌体miR-21-5p通过下调PHLPP2促进前列腺癌PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭 被引量：6

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作者 柯井卫 沈宏春 +2 位作者 刘星 戟美英 唐义权 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期534-540,共7页

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源的外泌体对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:采用q PCR检测miR-21-5p在前列腺癌细胞系中的表达水平。采用电子显微镜观察BMSC分离... 目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)来源的外泌体对前列腺癌细胞PC-3的增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:采用q PCR检测miR-21-5p在前列腺癌细胞系中的表达水平。采用电子显微镜观察BMSC分离出的外泌体形态,Western blotting检测外泌体表面标志物的表达以及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-21-5p和同源血小板富亮氨酸复重蛋白磷酸酶2(PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase 2,PHLPP2)的靶向调控关系。向PC-3细胞培养液中加入10μl的BMSC外泌体悬液(Exo组)、转染sh-PHLPP2或antagomiR,CCK-8和Transwell实验检测PC-3细胞增殖和迁移能力。结果:miR-21-5p在前列腺癌PC-3细胞系中高表达。成功分离BMSC培养液上清中的外泌体,透射电子显微镜下观察到外泌体典型的囊泡状结构,且表达CD9、CD63和CD81等特异性蛋白。Exo组中PC-3细胞的增殖、侵袭[(421.34±22.45)vs(200.09±14.22)个,P<0.05]、迁移能力和N-cadherin、Vimentin和miR-21-5p的表达水平均显著高于对照组(均P<0.05)。证实PHLPP2是miR-21-5p的靶基因。与对照组相比,Exo组和sh-PHLPP2组PC-3细胞中PHLPP2的表达明显降低(0.66±0.09、0.42±0.05 vs 1.09±0.08,均P<0.01),细胞增殖、侵袭和迁移[(87.23±12.67)%、(82.45±10.13)%vs(66.46±9.13)%]能力均显著提高(均P<0.01),E-cadherin表达水平显著降低而N-cadherin和Vimentin表达水平显著升高(均P<0.05)。结论:miR-21-5p在前列腺癌PC-3细胞系中高表达,BMSC外泌体miR-21-5p通过靶向下调PHLPP2提高PC-3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。 展开更多

关键词 骨髓间充质干细胞 外泌体 miR-21-5p 同源血小板富亮氨酸复重蛋白磷酸酶2 前列腺癌 PC-3细胞 增殖 迁移

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Mg^2+介导底物亲和力的改变增加黍子过氧化物酶的磷酸酶活性

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作者 崔晓东 王柯 王转花 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期310-318,共9页

黍子过氧化物酶(proso millet peroxidase,PmPOD)具有磷酸酶活性,可以断裂DNA中磷酸二酯键及脱氧核糖核苷酸(dNMPs)中磷酸单酯键。在此反应过程中,Mg^2+显著增强PmPOD的磷酸酶活性,但其具体的机制尚不明确。本文采用紫外-可见分光光谱... 黍子过氧化物酶(proso millet peroxidase,PmPOD)具有磷酸酶活性,可以断裂DNA中磷酸二酯键及脱氧核糖核苷酸(dNMPs)中磷酸单酯键。在此反应过程中,Mg^2+显著增强PmPOD的磷酸酶活性,但其具体的机制尚不明确。本文采用紫外-可见分光光谱法和荧光光谱法,研究了以dNMPs为底物时,Mg^2+对PmPOD磷酸酶活性的影响,并对其反应机制进行了初步的探究。紫外-可见分光光度法结果表明:Mg^2+介导了PmPOD与底物的相互作用,但Mg^2+并未直接与PmPOD发生相互作用。荧光光谱进一步表明,在Mg^2+存在的情况下,dNMPs对PmPOD内源荧光淬灭方式发生变化,由动态淬灭转变为静态淬灭。同时还发现,dNMPs与PmPOD的结合常数Ka增加约2~10倍(与不存在Mg^2+条件相比),依次为:KadCMP>KadGMP>KadTMP>KadAMP。高效液相色谱表明,Mg^2+可增强PmPOD水解dNMPs的速率3~13倍,且水解速率VdCMP>VdGMP>VdTMP>VdAMP,与结合常数的变化一致。因此,我们得出结论,PmPOD发挥磷酸酶活性时,Mg^2+首先与dNMPs形成中间产物,这一中间产物更适合与PmPOD形成复合物,增大了底物dNMPs与PmPOD结合常数,进而加速了PmPOD水解dNMPs。本研究为Mg^2+在过氧化物酶催化DNA水解的机制提供了相关依据,为研究金属离子增强蛋白酶活性的机制提供了理论基础。 展开更多

关键词 黍子过氧化物酶 磷酸酶 镁离子 荧光光谱 脱氧核糖核苷-5'-一磷酸

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SHIP2通过抑制PI3-K/Akt信号通路降低胰岛素敏感性 被引量：4

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作者 邹力 李法琦 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期62-64,共3页

含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改... 含SH2结构域的肌醇多磷酸5'-磷酸酶-2(Srchomology 2 domain containing insitol polyphos-phate5'-phosphatase2,SHIP2)负向调节磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B依赖的胰岛素信号通路,降低胰岛素敏感性。SHIP2基因的变异能显著改变胰岛素敏感性。抑制内源性SHIP2蛋白或其基因表达,能够提高胰岛素敏感性,从而改善胰岛素抵抗,有可能成为研究胰岛素抵抗相关疾病发病机制和治疗药物开发的新途径。 展开更多

关键词 肌醇多磷酸5’-磷酸酶 基因表达 胰岛素敏感性

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血清Tracp5b诊断乳腺癌骨转移的临床价值 被引量：5

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作者 王凤良 凌立君 +2 位作者 沈恩超 刘晓安 王水 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期702-705,共4页

目的:比较乳腺癌患者血清抗酒石酸酸性磷酸酶(Tracp5b)、糖类抗原-153(CA-153)及癌胚抗原(CEA)诊断乳腺癌骨转移的临床价值。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)及电化学发光法检测18例健康女性、26例无骨转移的乳腺癌患者及32例乳腺癌骨... 目的:比较乳腺癌患者血清抗酒石酸酸性磷酸酶(Tracp5b)、糖类抗原-153(CA-153)及癌胚抗原(CEA)诊断乳腺癌骨转移的临床价值。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)及电化学发光法检测18例健康女性、26例无骨转移的乳腺癌患者及32例乳腺癌骨转移患者的血清Tracp5b、CA-153及CEA水平。结果:乳腺癌骨转移组的血清Tracp5b水平较无骨转移组及健康对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);血清Tracp5b诊断乳腺癌骨转移的敏感性为78.13%,特异性为86.36%;CA-153的敏感性为37.50%,特异性为77.27%;CEA的敏感性为21.88%,特异性为84.09%;Tracp5b的敏感性较CA-153、CEA高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Tracp5b可以作为诊断乳腺癌骨转移的血清标记物之一。 展开更多

关键词 抗酒石酸酸性磷酸酶5B 糖类抗原-153 癌胚抗原 骨转移

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SHIP1基因过表达非小细胞肺癌细胞系的建立及其对细胞增殖能力的影响 被引量：1

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作者 陶星宇 付桥粉 +1 位作者 王莹 宋鑫 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期680-686,共7页

目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞... 目的:观察SHIP1对NSCLC细胞增殖的影响。方法:由NCBI Gene数据库查询获得人SHIP1基因CDS区,插至载体p TSB-CMV-MCS-SBP-3Flag-EGFP,构建SHIP1真核过表达质粒;进一步利用其构建SHIP1过表达慢病毒。用该慢病毒感染A549、SPCA-1和PC-9细胞株,获得SHIP1稳定过表达NSCLC细胞系。Western blotting和q RT-PCR分别从蛋白水平和m RNA水平检测SHIP1的表达变化。采用MTT法和克隆形成实验检测过表达SHIP1的PC-9细胞增殖活力和克隆形成能力。Western blotting检测AP-1蛋白复合体各组分的表达。结果:SHIP1真核过表达质粒经测序证实构建成功。稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞,在荧光显微镜下可见均一表达绿色荧光。与阴性对照组比较,细胞中SHIP1在m RNA(P<0.01)及蛋白水平均明显升高。在PC-9细胞中,过表达SHIP1使细胞增殖、克隆形成能力降低(均P<0.01),p-c-Jun、Fos B等表达降低。结论:成功构建了稳定过表达SHIP1的A549、SPCA-1和PC-9细胞模型;过表达SHIP1可通过抑制AP-1家族蛋白抑制NSCLC细胞增殖能力。 展开更多

关键词 多磷酸肌醇-5-磷酸酶 非小细胞肺癌 基因重组 稳定过表达 细胞增殖

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儿童骨代谢指标的检查 被引量：13

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作者 廖祥鹏 颜崇淮 刘忠厚 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2010年第12期956-960,共5页

儿童骨骼是一个充满活力的器官,种族、性别、儿童发育的不同阶段、营养、疾病都影响儿童骨标测量值。骨标志物浓度能早期灵敏地反映骨代谢转换动态状况,评估骨骼代谢疾病的病理生理,以及监测治疗效果。本文综述儿童骨代谢指标检查的方... 儿童骨骼是一个充满活力的器官,种族、性别、儿童发育的不同阶段、营养、疾病都影响儿童骨标测量值。骨标志物浓度能早期灵敏地反映骨代谢转换动态状况,评估骨骼代谢疾病的病理生理,以及监测治疗效果。本文综述儿童骨代谢指标检查的方法进展和参考值;包括骨代谢的直接指标如骨碱性磷酸酶、骨钙素、抗酒石酸酸性磷酸、吡啶交联物和交联断肽等,以及骨代谢间接调节指标,特别是最常检测的指标25-羟基维生素D。 展开更多

关键词 骨标 儿童参考值范围 骨碱性磷酸酶 骨钙素 抗酒石酸酸性磷酸5b片断 25-羟基维生素D

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吡唑化合物pyr3干预对压力负荷诱导的大鼠左心室肥厚的影响 被引量：3

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作者 田小芍 陈明 刘春霞 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2013年第3期226-229,共4页

目的：探讨瞬时受体电位通道C亚族3亚型（TRPC3）的选择性阻滞剂吡唑化合物Ethyl-1-（4-f2，3，3一trichloroacrylamide）phenyl）-5-（trifluoromethyl）-1H—pyrazole-4-carboxylate（pyr3）的体内干预对压力负荷大鼠左心室肥厚（LvH... 目的：探讨瞬时受体电位通道C亚族3亚型（TRPC3）的选择性阻滞剂吡唑化合物Ethyl-1-（4-f2，3，3一trichloroacrylamide）phenyl）-5-（trifluoromethyl）-1H—pyrazole-4-carboxylate（pyr3）的体内干预对压力负荷大鼠左心室肥厚（LvH）程度的影响。方法：采用腹主动脉缩窄手术建立左心压力负荷模型。30只200—240g雄性SD大鼠随机分为五组（n=6）：假手术对照组、手术对照组、假手术后全程给药组、手术后后期给药组，手术后全程给药组。6周后，计算各组大鼠左心室质量指数、左心室心肌细胞横径，逆转录多聚酶连反应（RT—PCR）、免疫组织化学和蛋白免疫印迹检测TRPC3和钙调神经磷酸酶A13信使核糖核酸（mRNA）和蛋白的表达水平。结果：与假手术对照组相比，手术对照组左心室肥厚相关指标（左心室质量指数和左心室心肌细胞横径）及TRPC3、钙调神经磷酸酶AB蛋白和mRNA的表达显著升高；假手术后全程给药组左心室肥厚相关指标无显著变化，而TRPC3和钙调神经磷酸酶AB蛋白及mRNA的表达量显著升高，差异均有统计学意义（P均〈0．05）。与手术对照组比较，手术后全程给药组左心室肥厚相关指标、TRPC3及钙调神经磷酸酶A13蛋白和mRNA表达均明显降低（P均〈0．05）；手术后后期给药组左心室肥厚相关指标及钙调神经磷酸酶AB蛋白和mRNA的表达下降，差异均有统计学意义（P均〈0．05），而TRPC3的蛋白和mRNA表达未见显著降低。结论：pyr3体内干预能够一定程度上阻止压力负荷导致的大鼠左心室肥厚，降低压力负荷大鼠左心室TRPC3和钙调神经磷酸酶AB表达的上调。 展开更多

关键词 Ethyl-1-(4-(2 3 3-trichloroacrylamide)phenyl)-5-(trifluoromethyl)-1H—pyrazole-4-carboxylate 压力负荷 左心室肥厚 瞬时受体电位通道C亚族3亚型 钙调神经磷酸酶Aβ

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苹果GMP、GME和GGP基因的克隆与表达分析 被引量：1

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作者 夏惠 张敏 马锋旺 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2014年第3期191-196,共6页

【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分... 【目的】克隆苹果GDP-甘露糖焦磷酸化酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GMP)、GDP-甘露糖-3′,5′-表异构酶(GDP-mannose-3′,5′-epimerase,GME)和GDP-1-半乳糖磷酸酶(GDP-L-galactose-1-phosphate phosphorylase,GGP)的基因序列并分析其表达特性,探讨GMP、GME和GGP基因在抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA)合成过程中的作用。【方法】以‘嘎啦’苹果幼果为材料,分别运用RT-PCR和PCR法克隆GMP、GME和GGP基因的cDNA和gDNA全长序列,对其序列及编码产物进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR,分析以上基因在苹果不同组织(幼叶、成熟叶、衰老叶、花、幼果、成熟果和根)中的表达情况。【结果】RT-PCR法克隆及序列分析显示,GMP基因的cDNA全长为1 280bp,编码361个氨基酸,gDNA序列中含有3个内含子;GME基因的cDNA全长为1 323bp,编码376个氨基酸,gDNA序列中含有5个内含子;GGP基因的cDNA全长为1 677bp,编码446个氨基酸,gDNA序列中含有6个内含子。基因表达的实时荧光定量PCR分析表明,GMP、GME和GGP在苹果不同组织中均有表达,在叶片中的表达量高于其他组织,且表达量随着叶片的生长逐渐升高;在花、幼果和成熟果中,GMP、GME和GGP的表达量差异不明显。【结论】克隆获得了苹果的GMP、GME和GGP基因,其在苹果不同组织的生长过程中有不同的表达特性,但GME的表达水平远远低于GMP和GGP,这在一定程度上表明,在苹果AsA的生物合成过程中,GMP、GGP较GME有更重要的作用。 展开更多

关键词 苹果 GDP-甘露糖焦磷酸化酶 GDP-甘露糖-3′ 5′-表异构酶 GDP-1-半乳糖磷酸酶 抗坏血酸

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氯胺酮对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度的影响．

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作者 李哲 赵砚丽 杨宾侠 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1117-1118,共2页

目的观察氯胺酮对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及其机制。方法采用酶解方法获得兔的气管平滑肌细胞。用钙敏荧光探针FLuo-3/AM标记细胞。将标记好的细胞随机分为氯胺酮组(A组)、氯胺酮+2-氨乙基硼酸二苯酯(2-A... 目的观察氯胺酮对兔离体气管平滑肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响及其机制。方法采用酶解方法获得兔的气管平滑肌细胞。用钙敏荧光探针FLuo-3/AM标记细胞。将标记好的细胞随机分为氯胺酮组(A组)、氯胺酮+2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)组(B组)和氯胺酮+斯里兰卡肉桂碱(RyD)组(C组)。每组再均分为三份,加入氯胺酮浓度分别为0、100和1 000μM。激光共聚焦显微镜下记录各组的[Ca2+]i。结果与氯胺酮为0μM时比较,氯胺酮为1 000μM时A、C组[Ca2+]i明显降低(P<0.05)。与A组比较,氯胺酮为0、100μM时B、C组[Ca2+]i均明显降低,氯胺酮为1 000μM时C组[Ca2+]i也明显降低(P<0.05)。结论 100μM氯胺酮对气管平滑肌[Ca2+]i无影响,1 000μM氯胺酮可以明显降低气管平滑肌[Ca2+]i。氯胺酮降低[Ca2+]i可能与其抑制内质网1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)通路有关,与内质网兰诺定通路无关。 展开更多

关键词 氯胺酮 气管平滑肌 1 4 5-三磷酸肌醇 兰诺定 钙

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