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LncRNA PiHL在奥沙利铂耐药结直肠癌细胞中的作用及初步机制
被引量：
1
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作者
李思
田思雨
袁宏
《临床检验杂志》
CAS
2021年第9期694-700,共7页
目的确定LncRNA PiHL在奥沙利铂耐药的结直肠癌细胞中的作用并探讨其作用机制。方法采用CCK8法检测奥沙利铂对结直肠癌细胞的抑制率,体外构建奥沙利铂耐药的结直肠癌细胞系,qRT-PCR检测结直肠癌细胞中PiHL的表达水平;利用分子克隆技术...
目的确定LncRNA PiHL在奥沙利铂耐药的结直肠癌细胞中的作用并探讨其作用机制。方法采用CCK8法检测奥沙利铂对结直肠癌细胞的抑制率,体外构建奥沙利铂耐药的结直肠癌细胞系,qRT-PCR检测结直肠癌细胞中PiHL的表达水平;利用分子克隆技术构建稳定过表达PiHL的正常结直肠癌细胞系和稳定干扰PiHL的奥沙利铂耐药结直肠癌细胞系,CCK8法和流式细胞术检测PiHL表达水平的改变对奥沙利铂作用下细胞的存活率和凋亡比例的影响;TCGA数据库分析和qRT-PCR预测PiHL与多梳抑制复合物2(PRC2)途径基因之间存在的相关性;RNA pull-down和western blot确定PiHL与Zeste增强子同源物2(EZH2)之间的作用关系;RNA-seq与qRT-PCR结合确定PRC2表观遗传作用靶点。结果耐药细胞系中PiHL的表达水平较正常细胞显著升高。稳定过表达PiHL细胞后对奥沙利铂的敏感性降低。同时,在耐药结直肠癌细胞系中,干扰PiHL表达组药物作用下细胞存活率明显低于对照组,细胞对奥沙利铂敏感性增加。TCGA数据库分析发现PiHL表达和PRC2的组成成分EZH2、SUZ12、EED的表达水平存在显著正相关,qRT-PCR确认结直肠癌组织样本中PiHL的表达与EZH2呈正相关;在HCT116细胞中,RNA pull-down和western blot结果显示,体外转录的LncRNA PiHL可以与细胞中EZH2蛋白直接结合;过表达或敲除PiHL后,EZH2蛋白的表达水平并不改变。PiHL表达下调可以显著增加细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、KLF2、KLF6、人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)等抑癌基因的表达。结论PiHL在奥沙利铂耐药结直肠癌细胞中高表达。PiHL可以促进结直肠癌细胞奥沙利铂耐药,耐药细胞中干扰PiHL表达可以抑制细胞增殖,促进药物诱导的细胞凋亡,提高奥沙利铂的敏感性。PiHL通过与多梳抑制复合物中的EZH2蛋白结合表观遗传抑制的抑癌基因CDKN2B、KLF2、KLF6、RUNX3的表达。
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关键词
LncRNA
PiHL
结直肠癌
奥沙利铂
耐药
多梳抑制复合物
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题名
LncRNA PiHL在奥沙利铂耐药结直肠癌细胞中的作用及初步机制
被引量：
1
1
作者
李思
田思雨
袁宏
机构
大连医科大学附属第一医院检验科
大连医科大学检验医学院
大连市中心医院检验科
出处
《临床检验杂志》
CAS
2021年第9期694-700,共7页
基金
国家自然科学基金(81871725)。
文摘
目的确定LncRNA PiHL在奥沙利铂耐药的结直肠癌细胞中的作用并探讨其作用机制。方法采用CCK8法检测奥沙利铂对结直肠癌细胞的抑制率,体外构建奥沙利铂耐药的结直肠癌细胞系,qRT-PCR检测结直肠癌细胞中PiHL的表达水平;利用分子克隆技术构建稳定过表达PiHL的正常结直肠癌细胞系和稳定干扰PiHL的奥沙利铂耐药结直肠癌细胞系,CCK8法和流式细胞术检测PiHL表达水平的改变对奥沙利铂作用下细胞的存活率和凋亡比例的影响;TCGA数据库分析和qRT-PCR预测PiHL与多梳抑制复合物2(PRC2)途径基因之间存在的相关性;RNA pull-down和western blot确定PiHL与Zeste增强子同源物2(EZH2)之间的作用关系;RNA-seq与qRT-PCR结合确定PRC2表观遗传作用靶点。结果耐药细胞系中PiHL的表达水平较正常细胞显著升高。稳定过表达PiHL细胞后对奥沙利铂的敏感性降低。同时,在耐药结直肠癌细胞系中,干扰PiHL表达组药物作用下细胞存活率明显低于对照组,细胞对奥沙利铂敏感性增加。TCGA数据库分析发现PiHL表达和PRC2的组成成分EZH2、SUZ12、EED的表达水平存在显著正相关,qRT-PCR确认结直肠癌组织样本中PiHL的表达与EZH2呈正相关;在HCT116细胞中,RNA pull-down和western blot结果显示,体外转录的LncRNA PiHL可以与细胞中EZH2蛋白直接结合;过表达或敲除PiHL后,EZH2蛋白的表达水平并不改变。PiHL表达下调可以显著增加细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B(CDKN2B)、KLF2、KLF6、人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)等抑癌基因的表达。结论PiHL在奥沙利铂耐药结直肠癌细胞中高表达。PiHL可以促进结直肠癌细胞奥沙利铂耐药,耐药细胞中干扰PiHL表达可以抑制细胞增殖,促进药物诱导的细胞凋亡,提高奥沙利铂的敏感性。PiHL通过与多梳抑制复合物中的EZH2蛋白结合表观遗传抑制的抑癌基因CDKN2B、KLF2、KLF6、RUNX3的表达。
关键词
LncRNA
PiHL
结直肠癌
奥沙利铂
耐药
多梳抑制复合物
Keywords
LncRNA PiHL
colorectal cancer
oxaliplatin
drug-resistance
polycomb repressive complex
分类号
R446 [医药卫生—诊断学]
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作者
出处
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被引量
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1
LncRNA PiHL在奥沙利铂耐药结直肠癌细胞中的作用及初步机制
李思
田思雨
袁宏
《临床检验杂志》
CAS
2021
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