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基于多拷贝鳜鱼β-防御素基因的重组毕赤酵母菌株构建
被引量：
3
1
作者
吕星星
陶妍
+1 位作者
谢晶
钱韻芳
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2021年第1期16-24,共9页
鳜鱼β-防御素(Siniperca chuatsiβ-defensin,ScBD)作为一种重要的蛋白质免疫因子,在其抵御病原微生物侵染的过程中起到了重要的作用,被认为是开发天然抗菌剂的理想候选者。ScBD的初级结构含信号肽和成熟肽,后者由43个氨基酸残基组成,...
鳜鱼β-防御素(Siniperca chuatsiβ-defensin,ScBD)作为一种重要的蛋白质免疫因子,在其抵御病原微生物侵染的过程中起到了重要的作用,被认为是开发天然抗菌剂的理想候选者。ScBD的初级结构含信号肽和成熟肽,后者由43个氨基酸残基组成,决定了其生物学活性。通过同源建模法预测了ScBD的空间结构,显示其具有β-片层、伸展链和无规则卷曲等构象单元;3对特有的二硫键作为维持其空间结构的关键性次级键,保障了ScBD具有稳定的生物学活性。为了解决前期研究中重组ScBD的低表达量问题、探索目的基因拷贝数对转录水平的影响,使用同尾酶法构建了ScBD基因的二拷贝和四拷贝表达盒载体pPICZαA-ScBDn(n=2或4),分别电转至毕赤酵母X 33后成功筛选到各种重组菌株。qRT-PCR测定结果表明:含一拷贝、二拷贝和四拷贝表达盒载体的重组菌株的基因组中ScBD基因的拷贝数分别为1.19×10^(5)、2.56×10^(5)和5.29×10^(5),证明载体所含的表达盒数目与嵌合进毕赤酵母基因组中的ScBD基因拷贝数之间存在正相关关系,也由此证明了多拷贝表达盒载体的构建是提高目的基因拷贝数和转录水平的有效方法。结果为进一步确定ScBD基因拷贝数与蛋白质表达量之间的关系提供参考。
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关键词
鳜鱼β-防御素
空间结构
多拷贝表达盒
毕赤酵母
重组菌株
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职称材料
题名
基于多拷贝鳜鱼β-防御素基因的重组毕赤酵母菌株构建
被引量：
3
1
作者
吕星星
陶妍
谢晶
钱韻芳
机构
上海海洋大学食品学院
上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2021年第1期16-24,共9页
基金
国家“十三五”重点研发计划资助项目(2016YFD0400106)。
文摘
鳜鱼β-防御素(Siniperca chuatsiβ-defensin,ScBD)作为一种重要的蛋白质免疫因子,在其抵御病原微生物侵染的过程中起到了重要的作用,被认为是开发天然抗菌剂的理想候选者。ScBD的初级结构含信号肽和成熟肽,后者由43个氨基酸残基组成,决定了其生物学活性。通过同源建模法预测了ScBD的空间结构,显示其具有β-片层、伸展链和无规则卷曲等构象单元;3对特有的二硫键作为维持其空间结构的关键性次级键,保障了ScBD具有稳定的生物学活性。为了解决前期研究中重组ScBD的低表达量问题、探索目的基因拷贝数对转录水平的影响,使用同尾酶法构建了ScBD基因的二拷贝和四拷贝表达盒载体pPICZαA-ScBDn(n=2或4),分别电转至毕赤酵母X 33后成功筛选到各种重组菌株。qRT-PCR测定结果表明:含一拷贝、二拷贝和四拷贝表达盒载体的重组菌株的基因组中ScBD基因的拷贝数分别为1.19×10^(5)、2.56×10^(5)和5.29×10^(5),证明载体所含的表达盒数目与嵌合进毕赤酵母基因组中的ScBD基因拷贝数之间存在正相关关系,也由此证明了多拷贝表达盒载体的构建是提高目的基因拷贝数和转录水平的有效方法。结果为进一步确定ScBD基因拷贝数与蛋白质表达量之间的关系提供参考。
关键词
鳜鱼β-防御素
空间结构
多拷贝表达盒
毕赤酵母
重组菌株
Keywords
Siniperca chuatsiβ-defensin
spatial structure
multi-copy expression cassettes
Pichia pastoris
recombinant strain
分类号
Q93-33 [生物学—微生物学]
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作者
出处
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被引量
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1
基于多拷贝鳜鱼β-防御素基因的重组毕赤酵母菌株构建
吕星星
陶妍
谢晶
钱韻芳
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2021
3
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