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基因替换及多基因共表达强化大肠杆菌辅酶Q_(10)的合成能力: 1; 作者傅楠叶江 +2 位作者吴海珍孔璐张惠展《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期654-659,共6页; 为了强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力,对大肠杆菌进行了相关的基因操作。通过敲除大肠杆菌染色体上的聚八异戊二烯焦磷酸合成酶基因ispB,并导入来自Gluconobactersuboxydans的聚十异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA,使大肠杆菌具有Co... 展开更多; 关键词大肠杆菌基因缺失多基因共表达辅酶Q; 在线阅读下载PDF 职称材料

酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用被引量：6: 2; 作者龚映雪台艳 +4 位作者肖文娟王峻梅唐根云全艳彩刘泽寰《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2010年第1期82-87,共6页; 构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基... 展开更多; 关键词基因工程可再生能源纤维素生物转化酿酒酵母多基因共表达绿色木霉内切葡聚糖酶纤维二糖水解酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

piggyBac转座子介导HepG2细胞不同亚型药物代谢酶稳定共表达方法比较被引量：1: 3; 作者庞士慧钟国瑞 +5 位作者谢水林李浩健邹淑香贾英戴仁科黄黎珍《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期125-134,共10页; 目的在piggy Bac(PB)转座子介导下,探索在HepG2细胞中实现多个药物代谢酶稳定共表达的策略,为建立体外药物代谢和肝毒性研究的理想细胞模型奠定基础。方法首先选择3种目前针对大片段DNA使用较广的转染方法:Lipofectamine~?LTX,Gen Jet^(... 展开更多; 关键词 PIGGYBAC转座子 HEPG2细胞药物代谢酶多基因共表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

重编程诱导犬脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化被引量：1: 4; 作者朱明德陈奕静 +2 位作者戴鹏秀张翊华张欣珂《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3205-3212,共8页; 本研究旨在利用转基因技术诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs),通过干细胞疗法达到临床治疗糖尿病的目的。本试验首先验证了Hnf1b基因在体外诱导... 展开更多; 关键词糖尿病犬脂肪间充质干细胞胰岛素分泌细胞 Hnf1b基因多基因共表达; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基因替换及多基因共表达强化大肠杆菌辅酶Q_(10)的合成能力: 1; 作者傅楠叶江吴海珍孔璐张惠展; 机构华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室; 出处《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期654-659,共6页; 文摘为了强化大肠杆菌合成辅酶Q10(CoQ10)的能力,对大肠杆菌进行了相关的基因操作。通过敲除大肠杆菌染色体上的聚八异戊二烯焦磷酸合成酶基因ispB,并导入来自Gluconobactersuboxydans的聚十异戊二烯焦磷酸合成酶基因ddsA,使大肠杆菌具有CoQ10合成能力的同时降低了内源性辅酶Q8(CoQ8)的合成。采用双质粒共表达系统,对CoQ生物合成途径中多个功能基因进行了强化表达,构建得到的重组大肠杆菌CoQ的合成能力、CoQ10合成的专一性都有明显改善,其中ubiCA和ddsA基因的协同表达效果最为明显,CoQ的合成能力比对照提高了65%,而CoQ10的合成量也提高了1.1倍。; 关键词大肠杆菌基因缺失多基因共表达辅酶Q; Keywords Escherichia coli gene disruption multigene coexpression ubiquinone; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用被引量：6: 2; 作者龚映雪台艳肖文娟王峻梅唐根云全艳彩刘泽寰; 机构暨南大学生命与健康工程研究院; 出处《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2010年第1期82-87,共6页; 基金新世纪优秀人才支持计划基金资助项目(NCET-05-0745) 珠海市科技攻关资助项目(PC20071080); 文摘构建含酿酒酵母组成型强启动子PGK、G418抗性基因及rDNA片段的整合型载体pScIKP,利用rDNA多个同源重组位点,将外源基因以多拷贝整合到酵母染色体上,无需诱导即可持续表达;利用载体位于表达盒两端同尾酶,可插入多个基因表达盒,实现多基因稳定共表达.为检验共表达情况,反转录从绿色木霉中获得纤维素酶基因eg3和cbh2,克隆并转化获得重组酵母菌株S.cerevisiae-ec.该重组酵母能降解羧甲基纤维素形成水解圈;用羧甲基纤维素还原糖法和滤纸酶活力法测定酶活力,其最适温度和最适pH值与所表达单酶相似,表明共表达未影响两种酶的生物学特性;且双酶具有协同作用,能更有效降解非结晶纤维素.pScIKP载体能成功用于多个外源基因共表达和产物协同作用的研究,为构建能直接降解纤维素的酿酒酵母菌株,实现纤维素可再生能源的生物利用奠定了基础.; 关键词基因工程可再生能源纤维素生物转化酿酒酵母多基因共表达绿色木霉内切葡聚糖酶纤维二糖水解酶; Keywords genetic engineering renewable energy resource cellulose bioeonversion Saccharomyces cerevisiae multigene co-expression Trichoderma viride endoglucanase cellobiohydrolase; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] X382.1 [环境科学与工程—环境工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名piggyBac转座子介导HepG2细胞不同亚型药物代谢酶稳定共表达方法比较被引量：1: 3; 作者庞士慧钟国瑞谢水林李浩健邹淑香贾英戴仁科黄黎珍; 机构华南理工大学生物科学与工程学院华南理工大学发酵和酶工程重点实验室; 出处《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期125-134,共10页; 基金国家自然科学基金项目(81202585) 广东省科技计划项目(2014A030304014)~~; 文摘目的在piggy Bac(PB)转座子介导下,探索在HepG2细胞中实现多个药物代谢酶稳定共表达的策略,为建立体外药物代谢和肝毒性研究的理想细胞模型奠定基础。方法首先选择3种目前针对大片段DNA使用较广的转染方法:Lipofectamine~?LTX,Gen Jet^(TM)(Ver.Ⅱ)和Neon~?Transfection System,分别转染N端标记增强型绿色荧光蛋白质粒(pEGFP-N2)和2A串联重组细胞色素3A4(CYP3A4)和CYP2C19的PB转座子质粒(pPB-CYP3A4-2A-2C19)至HepG2细胞,48 h后比较不同方法的转染效率和细胞毒性,确立高效低毒的HepG2细胞转染方法。然后选择该法进行转染,将设计的3组PB重组转座子:单基因转座子(PB-CYP3A4)、2A串联多基因转座子(PB-CYP3A4-2A-2C19)、多个单基因转座子混合物[PB-CYP3A4,PB-CYP2C8,PB-CYP2A6,有机阴离子转运多肽1B1的PB转座子(PB-OATP1B1)]分别转染HepG2细胞,利用嘌呤霉素和GFP进行单克隆细胞筛选:挑选具有抗性且表达GFP的细胞单克隆并进行扩大培养,采用实时荧光定量PCR、Western蛋白质印迹和高效液相色谱-串联质谱联用法分别检测各组药物代谢酶m RNA、蛋白质水平及酶活性,并进行统计分析。结果 3种转染方法比较发现,Gen Jet^(TM)法的转染效率显著高于其他2种(P<0.01),介导pEGFP-N2和pPB-CYP3A4-2A-2C19的转染效率分别高达(94.2±2.5)%和(89.3±3.3)%,且该法具有较低的细胞毒性。因此选择Gen Jet^(TM)法进行后续PB转座子转染。分别转染3组PB重组转座子发现,单个转座子PB-CYP3A4和PB-CYP3A4-2A-2C19转染后,筛选获得的抗性细胞克隆中各个药物代谢酶在m RNA、蛋白质及活性水平均显著提高,其中2A可实现CYP3A4和CYP2C19药物代谢酶协同稳定表达;而多个转座子混合共转染细胞中,仅有随机几个基因表达;且各药物代谢酶基因的表达不均衡,仅CYP3A4药物代谢酶基因在单克隆细胞中表达水平明显升高。结论 Gen Jet^(TM)法可成为PB重组转座子转染HepG2细胞的有效方法。PB转座子可介导基因稳定表达;但在实现多基因共表达时,与病毒载体法不同,理论上可行的PB多转座子共转染方法其基因表达效率下降,且各基因表达不均衡。相比之下,应用2A串联多个基因串联重组PB单转座子可实现各基因稳定表达。; 关键词 PIGGYBAC转座子 HEPG2细胞药物代谢酶多基因共表达; Keywords piggyBac transposon HepG2cells drug-metabolizing enzymes multi-gene co-expression; 分类号 R969.1 [医药卫生—药理学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重编程诱导犬脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化被引量：1: 4; 作者朱明德陈奕静戴鹏秀张翊华张欣珂; 机构西北农林科技大学动物医学院兽医外科实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3205-3212,共8页; 基金 2023年动物防疫专项-低免疫原性新生胰(K3031223086) 金福莱恩防治跳蚤、蜱感染的临床验证试验项目(K4020121004)。; 文摘本研究旨在利用转基因技术诱导脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)分化为胰岛素分泌细胞(insulin producing cells,IPCs),通过干细胞疗法达到临床治疗糖尿病的目的。本试验首先验证了Hnf1b基因在体外诱导犬AMSCs向IPCs分化中的作用,在此基础上联合胰岛细胞发育过程中起关键作用的级联调控因子Pdx1、Ngn3、Pax4、Nkx6.1,组成三种不同的多基因共表达腺病毒感染犬AMSCs,重编程其向IPCs分化,通过检测筛选出最佳诱导组合。结果表明,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用。pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3(A)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Pax4(B)、pAdEasy-Hnf1b-Pdx1-Ngn3-Nkx6.1(C)三种组合的多基因共表达腺病毒载体,在感染犬AMSCs 25 d后,A、B、C三组均形成胰岛样细胞团,且B组数量最多,双硫腙染色着色最深;高糖刺激下B组的胰岛素分泌量极显著高于A组和C组。A、B、C三组的胰岛细胞发育相关基因表达量显著升高;B组Pdx1基因的表达量显著高于A组和C组,Pcsk1基因表达量极显著高于C组;Ins基因的表达量显著高于A组。综上所述,Hnf1b基因对体外诱导犬AMSCs向IPCs分化具有促进作用,Hnf1b、Pdx1、Ngn3和Pax4基因联合诱导效率最佳。该研究结果为探究干细胞向IPCs分化的更高效方法提供新参考,也为糖尿病的临床治疗提供新思路。; 关键词糖尿病犬脂肪间充质干细胞胰岛素分泌细胞 Hnf1b基因多基因共表达; Keywords diabetes canine adipose-derived mesenchymal stem cells insulin producing cells Hnf1b gene multigene co-expression; 分类号 S856.5 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基因替换及多基因共表达强化大肠杆菌辅酶Q_(10)的合成能力	傅楠叶江吴海珍孔璐张惠展	《华东理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	酵母多基因表达载体在纤维素生物转化中应用	龚映雪台艳肖文娟王峻梅唐根云全艳彩刘泽寰	《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心	2010	6	在线阅读下载PDF 职称材料
3	piggyBac转座子介导HepG2细胞不同亚型药物代谢酶稳定共表达方法比较	庞士慧钟国瑞谢水林李浩健邹淑香贾英戴仁科黄黎珍	《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心	2018	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	重编程诱导犬脂肪间充质干细胞向胰岛素分泌细胞分化	朱明德陈奕静戴鹏秀张翊华张欣珂	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料