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犬附红细胞体PGK的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
1
作者
宋淇淇
钱丽敏
+3 位作者
苏苗
于晓雪
秦顺义
龚岳
《天津农学院学报》
CAS
2018年第3期42-46,共5页
为了原核表达、纯化犬附红细胞体磷酸甘油酸激酶(PGK),并制备多克隆抗体,本试验从NCBI中已公布的犬附红细胞体(Mycoplasma haemocanis)全基因组序列中,调取其磷酸甘油酸激酶(PGK)的基因序列,并选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化...
为了原核表达、纯化犬附红细胞体磷酸甘油酸激酶(PGK),并制备多克隆抗体,本试验从NCBI中已公布的犬附红细胞体(Mycoplasma haemocanis)全基因组序列中,调取其磷酸甘油酸激酶(PGK)的基因序列,并选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pgk,插入质粒pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-pgk,转化E. coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,利用Western-blot方法检测表达产物,表达产物经镍离子亲和层析纯化后免疫昆明小鼠,获得鼠抗犬附红细胞体PGK多克隆抗体,并利用间接ELISA法检测血清抗体效价。结果表明:成功构建了pET32a(+)-pgk原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,重组蛋白相对分子质量约为60 ku,在包涵体和上清中均有表达,经镍离子亲和层析获得了纯度较高的目的蛋白,利用纯化后的蛋白所制备的鼠抗血清效价可达1∶51 200。
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关键词
犬附红细胞体
磷酸甘油酸激酶
原核表达
纯化
多兊隆抗体
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职称材料
题名
犬附红细胞体PGK的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
1
作者
宋淇淇
钱丽敏
苏苗
于晓雪
秦顺义
龚岳
机构
天津农学院动物科学与动物医学学院
天津市滨海新区塘沽动物卫生监督所
出处
《天津农学院学报》
CAS
2018年第3期42-46,共5页
基金
天津农学院科学研究发展基金项目(2014N10)
天津农学院附属动物医院委托项目(科经第2018.96号)
国家自然科学基金项目(31702223)
文摘
为了原核表达、纯化犬附红细胞体磷酸甘油酸激酶(PGK),并制备多克隆抗体,本试验从NCBI中已公布的犬附红细胞体(Mycoplasma haemocanis)全基因组序列中,调取其磷酸甘油酸激酶(PGK)的基因序列,并选用原核生物偏爱的密码子优化基因序列,化学合成全新的基因序列pgk,插入质粒pET32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-pgk,转化E. coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导表达,利用Western-blot方法检测表达产物,表达产物经镍离子亲和层析纯化后免疫昆明小鼠,获得鼠抗犬附红细胞体PGK多克隆抗体,并利用间接ELISA法检测血清抗体效价。结果表明:成功构建了pET32a(+)-pgk原核表达载体,并在BL21中得以诱导表达,重组蛋白相对分子质量约为60 ku,在包涵体和上清中均有表达,经镍离子亲和层析获得了纯度较高的目的蛋白,利用纯化后的蛋白所制备的鼠抗血清效价可达1∶51 200。
关键词
犬附红细胞体
磷酸甘油酸激酶
原核表达
纯化
多兊隆抗体
Keywords
Mycoplasma haemocanis
phosphoglyceric kinase
prokaryotic expression
purification
polyclonal antibodies
分类号
S852.62 [农业科学—基础兽医学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
犬附红细胞体PGK的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备
宋淇淇
钱丽敏
苏苗
于晓雪
秦顺义
龚岳
《天津农学院学报》
CAS
2018
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