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丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建
被引量：
8
1
作者
汪天虹
吴志红
+1 位作者
刘世利
曲音波
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期736-742,共7页
采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,...
采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 .
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关键词
瑞氏木霉
外源基因表达系统
cbhI启动子
构建
表达
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职称材料
毕赤酵母外源基因表达系统研究进展
被引量：
8
2
作者
杜中军
朱水芳
+1 位作者
黄文胜
翟衡
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2002年第4期7-11,共5页
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、...
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。
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关键词
毕赤酵母
外源基因表达系统
研究进展
甲醇营养型酵母
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职称材料
高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建
被引量：
4
3
作者
胡耀辉
闫舟
于寒松
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第25期13617-13619,13625,共4页
[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CB...
[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶(hyg)基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。
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关键词
绿色木霉
CBHⅡ
基因
瑞氏木霉启动子
外源基因表达系统
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职称材料
题名
丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建
被引量：
8
1
作者
汪天虹
吴志红
刘世利
曲音波
机构
山东大学微生物技术国家重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期736-742,共7页
基金
国家自然科学基金 (No.3 0 0 70 0 14 )
山东省自然科学基金项目 (No .Y2 0 0 0D12 )~~
文摘
采用PCR技术体外扩增获得了瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ (CBHⅠ )启动子和终止子序列 .并以大肠杆菌质粒pUC1 9为骨架 ,在该启动子和终止子序列间加入多克隆位点 ,构建了瑞氏木霉强表达整合型载体pTRIL .以质粒pAN7 1为模板 ,体外扩增了带有潮霉素磷酸转移酶(hph)基因的DNA片段 ,将hph插入pTRIL的cbh1启动子和终止子序列之间 ,构建了Pcbh1 hph Tcbh1表达盒 .用此表达盒转化瑞氏木霉C30原生质体 ,在潮霉素平板上得到 1 5株抗性转化子 .对其中的H1转化子进行了PCR和Southern印迹分析 ,证实hph基因确实整合到转化子染色体DNA上 ,并在Pcbh1 启动子控制下进行高效表达 .转化子H1对潮霉素抗性达 1 5 0mg L ,比出发菌株提高 2倍 .
关键词
瑞氏木霉
外源基因表达系统
cbhI启动子
构建
表达
Keywords
Trichoderma reesei , heterogeneous genes expression system, promoter of cbh 1,construction and expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
毕赤酵母外源基因表达系统研究进展
被引量：
8
2
作者
杜中军
朱水芳
黄文胜
翟衡
机构
山东农业大学园艺学院
国家动植物检疫实验所
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2002年第4期7-11,共5页
文摘
巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris外源基因表达系统已经成功表达了很多胞间型和胞内型蛋白质。与酿酒酵母Saccharomycesceresiviae相比 ,该系统所具有的很多优势使其应用越来越广泛。有关研究主要涉及以下几个方面 :宿主菌株、表达载体、转化方法、外源基因整合、外源蛋白糖基化和高密度发酵培养等。
关键词
毕赤酵母
外源基因表达系统
研究进展
甲醇营养型酵母
Keywords
Methylotrophic yeasts Pichia pastoris Expression system
分类号
Q344.13 [生物学—遗传学]
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职称材料
题名
高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建
被引量：
4
3
作者
胡耀辉
闫舟
于寒松
机构
吉林农业大学食品科学与工程学院
出处
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010年第25期13617-13619,13625,共4页
基金
吉林省科技厅重点攻关项目
文摘
[目的]构建CBHⅡ基因过量表达的绿色木霉工程菌。[方法]根据绿色木霉cDNA序列设计合成引物,PCR扩增CBHⅡ基因序列,将完整的目的基因与表达载体pCAMBIA1302连接,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组质粒pCAMBIA1302-CBHⅠ。再将pCAM-BIA1302-CBHⅠ重组质粒与瑞氏木霉外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅱ(CBHⅡ)PcbhⅡ启动子片段连接,将潮霉素磷酸转移酶(hyg)基因片段插入PcbhⅡ启动子下游,转入大肠杆菌DH5α中,获得重组表达质粒pCAMBIA1302-CBHⅡ。[结果]构建的重组表达质粒电转化后经SDS-PAGE电泳检测,绿色木霉纤维素酶CBHII基因在原宿主菌中成功过量表达,证实CBHⅡ基因在PcbhⅡ启动子控制下进行高效表达。[结论]为高产纤维素酶系的工业化菌株构建奠定基础。
关键词
绿色木霉
CBHⅡ
基因
瑞氏木霉启动子
外源基因表达系统
Keywords
Trichoderma viride
CBH Ⅱ gene
Promoter of Trichoderma reesei
Heterogeneous genes expression system
分类号
TQ925 [轻工技术与工程—发酵工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
丝状真菌瑞氏木霉外源基因表达系统的构建
汪天虹
吴志红
刘世利
曲音波
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
毕赤酵母外源基因表达系统研究进展
杜中军
朱水芳
黄文胜
翟衡
《生物技术通报》
CAS
CSCD
2002
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
高产纤维素酶绿色木霉基因工程菌的构建
胡耀辉
闫舟
于寒松
《安徽农业科学》
CAS
北大核心
2010
4
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职称材料
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