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布鲁氏菌超快速荧光PCR方法建立与临床应用
1
作者
徐振娜
吴志鹏
+9 位作者
洪伟彬
管知深
林其明
莫钻兰
叶毅飞
谢海燕
李敏
朱燕秋
李小军
张险朋
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025年第3期278-283,共6页
目的 建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,应用于临床样品的快速检测。方法 以外源性重组质粒为内参,选取布鲁氏菌重要毒力因子T4SS分泌系统为靶基因设计引物、探针,建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法。评价该方法的灵敏度、特异性、...
目的 建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,应用于临床样品的快速检测。方法 以外源性重组质粒为内参,选取布鲁氏菌重要毒力因子T4SS分泌系统为靶基因设计引物、探针,建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法。评价该方法的灵敏度、特异性、重复性,绘制标准曲线,与荧光PCR方法检测临床样品比较符合率。结果 该方法检测时间短,10 min即可完成。标准曲线Y=-3.410 7x+38.357,R^(2)=0.998 5,线性关系良好,最低检测限为10 copies/μL。该方法具有良好的特异性,对布鲁氏菌以外的几个临床常见细菌均无特异性扩增。检测3种浓度的阳性质粒,CV值为0.20%~0.91%,说明该方法具有极好的重复性。与荧光PCR方法同时检测140份临床样品,结果完全一致,符合率100%。结论 本研究建立了一种用时短、特异性强、灵敏度高、重复性好布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,可用于布鲁氏菌临床检测和疫情紧急排查,对布鲁氏菌早期诊断具有重要意义。
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关键词
布鲁氏菌
超快速荧光PCR
外源
性
内参
实时荧光PCR
在线阅读
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职称材料
基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立
被引量：
6
2
作者
崔玉花
田莉莉
+3 位作者
王晓亮
姜海蓉
范伟兴
彭方毅
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期469-472,共4页
目的本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、...
目的本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较。结果荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4%,细菌分离培养检测阳性率为9.9%,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控。
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关键词
布鲁氏菌
荧光定量PCR
外源内参
内源
内参
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职称材料
题名
布鲁氏菌超快速荧光PCR方法建立与临床应用
1
作者
徐振娜
吴志鹏
洪伟彬
管知深
林其明
莫钻兰
叶毅飞
谢海燕
李敏
朱燕秋
李小军
张险朋
机构
东莞市动物疫病预防控制中心
东莞市人兽共患病重点实验室
超快生物技术(广州)有限公司
出处
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025年第3期278-283,共6页
基金
东莞市2021年省乡村振兴战略专项资金(“大专项+任务清单”)项目(No.20211800400112)。
文摘
目的 建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,应用于临床样品的快速检测。方法 以外源性重组质粒为内参,选取布鲁氏菌重要毒力因子T4SS分泌系统为靶基因设计引物、探针,建立布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法。评价该方法的灵敏度、特异性、重复性,绘制标准曲线,与荧光PCR方法检测临床样品比较符合率。结果 该方法检测时间短,10 min即可完成。标准曲线Y=-3.410 7x+38.357,R^(2)=0.998 5,线性关系良好,最低检测限为10 copies/μL。该方法具有良好的特异性,对布鲁氏菌以外的几个临床常见细菌均无特异性扩增。检测3种浓度的阳性质粒,CV值为0.20%~0.91%,说明该方法具有极好的重复性。与荧光PCR方法同时检测140份临床样品,结果完全一致,符合率100%。结论 本研究建立了一种用时短、特异性强、灵敏度高、重复性好布鲁氏菌超快速荧光PCR检测方法,可用于布鲁氏菌临床检测和疫情紧急排查,对布鲁氏菌早期诊断具有重要意义。
关键词
布鲁氏菌
超快速荧光PCR
外源
性
内参
实时荧光PCR
Keywords
Brucella
ultra-fast quantitative PCR
exogenous reference
real-time PCR
分类号
R382.2 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立
被引量：
6
2
作者
崔玉花
田莉莉
王晓亮
姜海蓉
范伟兴
彭方毅
机构
重庆理工大学药学与生物工程学院
中国动物卫生与流行病学中心
宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心
重庆市垫江县中医院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期469-472,共4页
基金
宁夏地区主要人兽共患病防控关键技术研究与示范(No.2013ZZN30)资助~~
文摘
目的本文建立一种基于样品检测的特异性好、灵敏性高的布鲁氏菌荧光定量PCR检测方法。方法以哺乳动物beta-actin基因和外源重组质粒为内参,针对布鲁氏菌属特异性基因IS711,建立用于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及稳定性,绘制标准曲线。将该方法用于哺乳动物样品检测,并与细菌分离培养检测结果比较。结果荧光定量PCR方法对布鲁氏菌检测有良好的特异性,3对引物对阴性对照菌均无非特异性扩增;该方法用于样品检测的最低检测限为17拷贝;内外源内参同时存在条件下,布鲁氏菌荧光定量PCR的标准曲线相关系数为R2=0.997(Y=-3.12X+40.9)。将该方法直接用于181份动物样本的检测,并与分离培养结果相比,荧光定量PCR检测阳性率为11.4%,细菌分离培养检测阳性率为9.9%,且细菌分离培养阳性样品与荧光定量PCR阳性样品中编号基本一致。结论本文建立的荧光定量PCR检测方法灵敏性高、特异性及稳定性好,可直接应用于样品的检测,检测结果受内参基因质控。
关键词
布鲁氏菌
荧光定量PCR
外源内参
内源
内参
Keywords
Brucella
real time PCR
exogenous refer-ence
endogenous reference
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
在线阅读
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
布鲁氏菌超快速荧光PCR方法建立与临床应用
徐振娜
吴志鹏
洪伟彬
管知深
林其明
莫钻兰
叶毅飞
谢海燕
李敏
朱燕秋
李小军
张险朋
《中国人兽共患病学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于样品检测的布鲁氏菌荧光定量PCR方法的建立
崔玉花
田莉莉
王晓亮
姜海蓉
范伟兴
彭方毅
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
6
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职称材料
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