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复合干扰素突变体在毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
被引量:
2
1
作者
于长明
付玲
+5 位作者
齐连权
张晓鹏
于婷
来大志
王海涛
陈薇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期317-320,共4页
根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素突变体基因 ,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K ,将重组载体pMEX CIFNm用SacⅠ线性化后 ,转化毕赤酵母GS115 .转化子经诱导后 ,培养上清有抗病毒活性的蛋白产生 .经过离子交换 ,疏水层析 ,凝胶过...
根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素突变体基因 ,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K ,将重组载体pMEX CIFNm用SacⅠ线性化后 ,转化毕赤酵母GS115 .转化子经诱导后 ,培养上清有抗病毒活性的蛋白产生 .经过离子交换 ,疏水层析 ,凝胶过滤三步层析纯化 ,得到了纯度大于95 %的重组复合干扰素突变体 ,经N端氨基酸序列分析表明 ,该蛋白N端序列与理论值一致 ,质谱测定分子量为 19 3kD ,与理论值一致 .用细胞病变抑制法测定其活性 ,并结合Lowry法蛋白定量计算其比活性为 6× 10 8IU mg ,与复合干扰素的比活相当 .
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关键词
毕赤酵母
表达
纯化
活性
复合干扰素突变体基因
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职称材料
猪基因工程复合干扰素对仔猪病毒性疾病防治效果观察
被引量:
9
2
作者
熊忠良
徐涤平
+4 位作者
李勇
刘泽文
杨克礼
伍锐
梁望旺
《湖北畜牧兽医》
2008年第12期10-11,共2页
以武汉市和江汉平原2个规模猪场发生猪瘟、猪蓝耳病等病毒性传染病为对象,用猪基因工程复合干扰素配合常规药物进行了预防和治疗效果试验。结果:干扰素配合常规兽药治疗总有效率分别为87.2%、84.6%;与对照组总有效率29.1%、26.1%相比较...
以武汉市和江汉平原2个规模猪场发生猪瘟、猪蓝耳病等病毒性传染病为对象,用猪基因工程复合干扰素配合常规药物进行了预防和治疗效果试验。结果:干扰素配合常规兽药治疗总有效率分别为87.2%、84.6%;与对照组总有效率29.1%、26.1%相比较,差异极显著(P<0.01);干扰素对病毒性疾病预防试验仔猪成活率分别为95.8%、93.6%,与对照组成活率54.7%、68.1%相比较,差异极显著(P<0.01)。试验表明,猪基因工程复合干扰素对规模猪场仔猪病毒性疾病防治效果良好。
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关键词
猪
基因
工程
复合
干扰素
猪瘟
猪蓝耳病
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职称材料
叶绿素缺乏油菜突变体的LHCⅡ多肽组成、蛋白含量与cab基因转录研究
被引量:
7
3
作者
张年辉
杜林方
+2 位作者
赵云
林宏辉
梁厚果
《西北植物学报》
CAS
CSCD
2004年第3期484-487,共4页
与野生型油菜相比 ,叶绿素缺乏油菜突变体 Cr35 2 9L HC 多肽组成并未发生改变 ,但其含量却都明显降低 .RNA印迹及点杂交结果都显示出 Cr35 2 9cab基因的转录增加 .这些结果表明 :该叶绿素缺乏突变体仅影响L HC 多肽的蛋白含量 ;并未影...
与野生型油菜相比 ,叶绿素缺乏油菜突变体 Cr35 2 9L HC 多肽组成并未发生改变 ,但其含量却都明显降低 .RNA印迹及点杂交结果都显示出 Cr35 2 9cab基因的转录增加 .这些结果表明 :该叶绿素缺乏突变体仅影响L HC 多肽的蛋白含量 ;并未影响其组成 ;突变体 L HC 蛋白量的减少并非 cab基因转录降低所致 .可见转录水平的调节仅对 L HC 在类囊体膜上的积累起有限作用 ;
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关键词
叶绿素缺乏
突变体
油菜
捕光色素蛋白
复合
物
cab
基因
表达
质体信号
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职称材料
基于CRISPR/Cas9核糖核蛋白体DNA定点内切酶体外活性建立高效基因型分析技术
被引量:
1
4
作者
王南
祁显涛
+2 位作者
刘昌林
谢传晓
朱金洁
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期978-986,共9页
建立快速、准确、高通量与简便易行的基因型分析技术对基因功能解析、分子育种与突变体鉴定研究具有重要价值。本研究的目标是利用Cas9或Cas9NG变体与单分子指导RNA(single guide RNA,sgRNA)核糖核蛋白复合体(sgRNA/Cas9-RNP或sgRNA/Cas...
建立快速、准确、高通量与简便易行的基因型分析技术对基因功能解析、分子育种与突变体鉴定研究具有重要价值。本研究的目标是利用Cas9或Cas9NG变体与单分子指导RNA(single guide RNA,sgRNA)核糖核蛋白复合体(sgRNA/Cas9-RNP或sgRNA/Cas9NG-RNP)体外DNA定点内切酶活性,建立与优化简便高效与低成本的基因型分析技术。以我们前期创制的CRISPR/Cas9定点编辑玉米ZmWx基因第7外显子区域定点突变基因编辑后代分离群体为材料,以ZmWx靶位点两侧特异引物扩增的PCR产物为底物,利用原核表达并纯化的Cas9或Cas9-NG蛋白为DNA内切酶,以体外转录的靶向ZmWx基因靶点的sgRNA或骨架序列优化的sgRNA(enhancedsgRNA,esgRNA)为Cas9或Cas9-NG酶定点活性指导元件,通过体外组装为sgRNA/Cas9-RNP复合体,对目标样本迚行酶切,以区分目标位点野生型、纯合突变体、杂合突变体基因型,并对反应体系迚行了优化。研究表明,基于esgRNA/Cas9的PCR/RNP检测技术可对ZmWx基因编辑目标突变体后代迚行快速有效的基因型鉴定;实验体系优化结果表明,esgRNA/Cas9蛋白质量比为1∶1,各为1?g,20?L反应体系,37℃酶切0.5h,可对500ng待测DNA底物充分酶切并确定基因型;esgRNA/Cas9NG反应体系优化结果表明,当esgRNA与Cas9-NG蛋白均为2μg时,37℃酶切4 h,可对500 ng DNA底物迚行酶切并实现基因型分析。利用Cas9NG拓宽靶位点检测范围的研究结果,暗示Cas9NG是以牺牲核酸酶酶切活性为代价降低了Cas9蛋白对PAM(protospacer adjacent motif,PAM)基序NGG序列的依赖性,实现PAM-NG基序识别能力,sgRNA/Cas9NG检测效率等仍有待提升与优化。本研究为基因功能解析、分子育种与突变体鉴定等研究提供了一套简便、成本低廉的技术方法,Cas9NG体外内切酶活性及其效率也为该Cas9突变体活体基因编辑技术研収提供了参考数据。
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关键词
sgRNA/Cas9核糖核蛋白
复合
体
Cas9NG
优化sgRNA(esgRNA)
基因
型分析
突变体
筛选
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职称材料
基因1型丙型肝炎抗病毒药物的初步研究
被引量:
1
5
作者
徐鹤
《临床肝胆病杂志》
CAS
2012年第12期892-892,共1页
对聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗没有反应的慢性丙型肝炎的患者,可能从增加多个直接作用的抗病毒药物治疗方案中受益。这种开放式模式,第2a期研究包括探索对以前治疗没有反应的1型慢性HCV的21例患者(即,应用聚乙二醇干扰素和利巴韦...
对聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗没有反应的慢性丙型肝炎的患者,可能从增加多个直接作用的抗病毒药物治疗方案中受益。这种开放式模式,第2a期研究包括探索对以前治疗没有反应的1型慢性HCV的21例患者(即,应用聚乙二醇干扰素和利巴韦林联合治疗≥12周后HCV RNA下降小于2log_(10)的患者)。
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关键词
慢性丙型肝炎
抗病毒药物
NS3蛋白酶抑制剂
聚乙二醇
干扰素
药物治疗方案
基因
利巴韦林
复制
复合
体
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职称材料
科技信息一束
6
《畜牧兽医科技信息》
2000年第10期21-22,共2页
1、美国培育出50—60只转基因鸡,其中一部分携带有一种可使其产下的蛋是产生人类生长因子;另一部分转基因鸡产下的蛋中含有一种可抗感染的人体抗体。此外,还培育出了产下的蛋中含有人体干扰素的转基冈鸡。(刘伟 供稿) 2。
关键词
科技信息
转
基因
鸡
复合
长效微量元素添加剂
生长因子
马立克病病毒
山西农业大学
干扰素
科技人员
技术转移中心
人工繁殖
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职称材料
题名
复合干扰素突变体在毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
被引量:
2
1
作者
于长明
付玲
齐连权
张晓鹏
于婷
来大志
王海涛
陈薇
机构
北京微生物流行病研究所
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第3期317-320,共4页
文摘
根据毕赤酵母密码子偏性合成了复合干扰素突变体基因 ,克隆至分泌型酵母表达载体pMEX9K ,将重组载体pMEX CIFNm用SacⅠ线性化后 ,转化毕赤酵母GS115 .转化子经诱导后 ,培养上清有抗病毒活性的蛋白产生 .经过离子交换 ,疏水层析 ,凝胶过滤三步层析纯化 ,得到了纯度大于95 %的重组复合干扰素突变体 ,经N端氨基酸序列分析表明 ,该蛋白N端序列与理论值一致 ,质谱测定分子量为 19 3kD ,与理论值一致 .用细胞病变抑制法测定其活性 ,并结合Lowry法蛋白定量计算其比活性为 6× 10 8IU mg ,与复合干扰素的比活相当 .
关键词
毕赤酵母
表达
纯化
活性
复合干扰素突变体基因
Keywords
consensus interferon mutant, Pichia pastoris, gene expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
Q511 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
猪基因工程复合干扰素对仔猪病毒性疾病防治效果观察
被引量:
9
2
作者
熊忠良
徐涤平
李勇
刘泽文
杨克礼
伍锐
梁望旺
机构
湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《湖北畜牧兽医》
2008年第12期10-11,共2页
基金
国家"十一五"支撑计划(2006BAD06A18-6)
文摘
以武汉市和江汉平原2个规模猪场发生猪瘟、猪蓝耳病等病毒性传染病为对象,用猪基因工程复合干扰素配合常规药物进行了预防和治疗效果试验。结果:干扰素配合常规兽药治疗总有效率分别为87.2%、84.6%;与对照组总有效率29.1%、26.1%相比较,差异极显著(P<0.01);干扰素对病毒性疾病预防试验仔猪成活率分别为95.8%、93.6%,与对照组成活率54.7%、68.1%相比较,差异极显著(P<0.01)。试验表明,猪基因工程复合干扰素对规模猪场仔猪病毒性疾病防治效果良好。
关键词
猪
基因
工程
复合
干扰素
猪瘟
猪蓝耳病
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
叶绿素缺乏油菜突变体的LHCⅡ多肽组成、蛋白含量与cab基因转录研究
被引量:
7
3
作者
张年辉
杜林方
赵云
林宏辉
梁厚果
机构
四川大学生命科学学院
出处
《西北植物学报》
CAS
CSCD
2004年第3期484-487,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 3 0 2 70 12 1
3 0 170 5 0 0
文摘
与野生型油菜相比 ,叶绿素缺乏油菜突变体 Cr35 2 9L HC 多肽组成并未发生改变 ,但其含量却都明显降低 .RNA印迹及点杂交结果都显示出 Cr35 2 9cab基因的转录增加 .这些结果表明 :该叶绿素缺乏突变体仅影响L HC 多肽的蛋白含量 ;并未影响其组成 ;突变体 L HC 蛋白量的减少并非 cab基因转录降低所致 .可见转录水平的调节仅对 L HC 在类囊体膜上的积累起有限作用 ;
关键词
叶绿素缺乏
突变体
油菜
捕光色素蛋白
复合
物
cab
基因
表达
质体信号
Keywords
chlorophyll reduced mutant
oilseed rape
light harvesting complex
cab gene expression
plastid signal
分类号
Q946.1 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9核糖核蛋白体DNA定点内切酶体外活性建立高效基因型分析技术
被引量:
1
4
作者
王南
祁显涛
刘昌林
谢传晓
朱金洁
机构
中国农业科学院作物科学研究所
安徽农业大学
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期978-986,共9页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2019ZX08010-003)资助。
文摘
建立快速、准确、高通量与简便易行的基因型分析技术对基因功能解析、分子育种与突变体鉴定研究具有重要价值。本研究的目标是利用Cas9或Cas9NG变体与单分子指导RNA(single guide RNA,sgRNA)核糖核蛋白复合体(sgRNA/Cas9-RNP或sgRNA/Cas9NG-RNP)体外DNA定点内切酶活性,建立与优化简便高效与低成本的基因型分析技术。以我们前期创制的CRISPR/Cas9定点编辑玉米ZmWx基因第7外显子区域定点突变基因编辑后代分离群体为材料,以ZmWx靶位点两侧特异引物扩增的PCR产物为底物,利用原核表达并纯化的Cas9或Cas9-NG蛋白为DNA内切酶,以体外转录的靶向ZmWx基因靶点的sgRNA或骨架序列优化的sgRNA(enhancedsgRNA,esgRNA)为Cas9或Cas9-NG酶定点活性指导元件,通过体外组装为sgRNA/Cas9-RNP复合体,对目标样本迚行酶切,以区分目标位点野生型、纯合突变体、杂合突变体基因型,并对反应体系迚行了优化。研究表明,基于esgRNA/Cas9的PCR/RNP检测技术可对ZmWx基因编辑目标突变体后代迚行快速有效的基因型鉴定;实验体系优化结果表明,esgRNA/Cas9蛋白质量比为1∶1,各为1?g,20?L反应体系,37℃酶切0.5h,可对500ng待测DNA底物充分酶切并确定基因型;esgRNA/Cas9NG反应体系优化结果表明,当esgRNA与Cas9-NG蛋白均为2μg时,37℃酶切4 h,可对500 ng DNA底物迚行酶切并实现基因型分析。利用Cas9NG拓宽靶位点检测范围的研究结果,暗示Cas9NG是以牺牲核酸酶酶切活性为代价降低了Cas9蛋白对PAM(protospacer adjacent motif,PAM)基序NGG序列的依赖性,实现PAM-NG基序识别能力,sgRNA/Cas9NG检测效率等仍有待提升与优化。本研究为基因功能解析、分子育种与突变体鉴定等研究提供了一套简便、成本低廉的技术方法,Cas9NG体外内切酶活性及其效率也为该Cas9突变体活体基因编辑技术研収提供了参考数据。
关键词
sgRNA/Cas9核糖核蛋白
复合
体
Cas9NG
优化sgRNA(esgRNA)
基因
型分析
突变体
筛选
Keywords
sgRNA/Cas9 ribonucleoprotein complex
Cas9NG
enhanced single guide RNA(esgRNA)
genotyping
mutant screening
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
基因1型丙型肝炎抗病毒药物的初步研究
被引量:
1
5
作者
徐鹤
机构
吉林大学第一医院肝胆胰内科
出处
《临床肝胆病杂志》
CAS
2012年第12期892-892,共1页
文摘
对聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗没有反应的慢性丙型肝炎的患者,可能从增加多个直接作用的抗病毒药物治疗方案中受益。这种开放式模式,第2a期研究包括探索对以前治疗没有反应的1型慢性HCV的21例患者(即,应用聚乙二醇干扰素和利巴韦林联合治疗≥12周后HCV RNA下降小于2log_(10)的患者)。
关键词
慢性丙型肝炎
抗病毒药物
NS3蛋白酶抑制剂
聚乙二醇
干扰素
药物治疗方案
基因
利巴韦林
复制
复合
体
分类号
R512.6 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
科技信息一束
6
出处
《畜牧兽医科技信息》
2000年第10期21-22,共2页
文摘
1、美国培育出50—60只转基因鸡,其中一部分携带有一种可使其产下的蛋是产生人类生长因子;另一部分转基因鸡产下的蛋中含有一种可抗感染的人体抗体。此外,还培育出了产下的蛋中含有人体干扰素的转基冈鸡。(刘伟 供稿) 2。
关键词
科技信息
转
基因
鸡
复合
长效微量元素添加剂
生长因子
马立克病病毒
山西农业大学
干扰素
科技人员
技术转移中心
人工繁殖
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
复合干扰素突变体在毕赤酵母中的表达、纯化及活性分析
于长明
付玲
齐连权
张晓鹏
于婷
来大志
王海涛
陈薇
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2003
2
在线阅读
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职称材料
2
猪基因工程复合干扰素对仔猪病毒性疾病防治效果观察
熊忠良
徐涤平
李勇
刘泽文
杨克礼
伍锐
梁望旺
《湖北畜牧兽医》
2008
9
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职称材料
3
叶绿素缺乏油菜突变体的LHCⅡ多肽组成、蛋白含量与cab基因转录研究
张年辉
杜林方
赵云
林宏辉
梁厚果
《西北植物学报》
CAS
CSCD
2004
7
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职称材料
4
基于CRISPR/Cas9核糖核蛋白体DNA定点内切酶体外活性建立高效基因型分析技术
王南
祁显涛
刘昌林
谢传晓
朱金洁
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
1
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职称材料
5
基因1型丙型肝炎抗病毒药物的初步研究
徐鹤
《临床肝胆病杂志》
CAS
2012
1
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职称材料
6
科技信息一束
《畜牧兽医科技信息》
2000
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