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猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析
1
作者
田宏
侯相民
+3 位作者
吴锦艳
陈妍
尚佑军
刘湘涛
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期270-274,共5页
体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗...
体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。
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关键词
猪瘟病毒
复合多表位抗原
基因
融合
表
达
活性分析
在线阅读
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职称材料
口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建
被引量：
9
2
作者
马鸣潇
金宁一
+6 位作者
刘慧娟
沈国顺
郑敏
金明兰
鲁会军
霍晓伟
马海利
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期288-294,共7页
针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其...
针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株）作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒（FPV）表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子（P7.5）下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。
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关键词
复合多表位抗原
表
达盒
OAAT口蹄疫病毒
鸡痘病毒
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职称材料
题名
猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析
1
作者
田宏
侯相民
吴锦艳
陈妍
尚佑军
刘湘涛
机构
中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期270-274,共5页
基金
国家863高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA241110)
文摘
体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。
关键词
猪瘟病毒
复合多表位抗原
基因
融合
表
达
活性分析
Keywords
classical swine fever virus compound multi-epitope gene
fusion expression activa-tion analysis
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建
被引量：
9
2
作者
马鸣潇
金宁一
刘慧娟
沈国顺
郑敏
金明兰
鲁会军
霍晓伟
马海利
机构
中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室
辽宁医学院动物医学院
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第3期288-294,共7页
基金
国家863计划（2001AA213071）资助项目.
文摘
针对我国口蹄疫（FMD）流行情况,利用计算机软件模拟分析,构建了口蹄疫病毒（FMDV）复合多表位基因工程疫苗表达盒OAAT。该表达盒以O型、A型FMDV结构蛋白VP1全基因和AsiaⅠ型FMDV2个基因拓扑型的结构蛋白VP1基因上的5个抗原表位基因（其中2个抗原表位来源于FMDVIND63/7株,该毒株与我国新疆分离株属于同一基因拓扑型,其余3个抗原表位来源于FMDVYNBS/58株）作为主要免疫原基因,以非结构蛋白上的2个Th2细胞表位基因及结构蛋白上的1个Th2细胞表位基因作为辅助基因。将构建好的表达盒OAAT和猪IL-18基因分别插入到鸡痘病毒（FPV）表达载体pUTA-16-LacZ复合启动子（ATI-P7.5×20）和单一启动子（P7.5）下游,构建了携带OAAT表达盒和猪IL-18基因的重组鸡痘病毒转移载体质粒pUTAL-OAAT-IL18。应用脂质体转染法,将重组鸡痘病毒转移载体质粒与282E4株FPV共转染鸡胚成纤维细胞（CEF）,经BrdU进行3次加压蚀斑筛选后,以不同代次的细胞mRNA为模板,利用FMDVVP1基因和猪IL-18基因特异引物进行RT-PCR和IFA检测,筛选出OAAT和猪IL-18基因共表达的重组鸡痘病毒rF-PV-OAAT-IL18,该重组鸡痘病毒的构建为新型FMDV活载体疫苗的研究奠定了基础。
关键词
复合多表位抗原
表
达盒
OAAT口蹄疫病毒
鸡痘病毒
Keywords
muhiplicity epitope, expression box, OAAT FMDV, FPV
分类号
S858.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析
田宏
侯相民
吴锦艳
陈妍
尚佑军
刘湘涛
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
口蹄疫三价重组鸡痘病毒疫苗分子设计及其构建
马鸣潇
金宁一
刘慧娟
沈国顺
郑敏
金明兰
鲁会军
霍晓伟
马海利
《高技术通讯》
CAS
CSCD
北大核心
2007
9
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