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HIV—1复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备: 1; 作者李英辉赵亚 +3 位作者刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳《科学技术与工程》 2008年第12期3119-3123,共5页; 为表达HIV—1复合多表位基因并制备其多克隆抗体。设计引物,以HIV—1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入大肠杆菌。将测序正确的p24MEG基因克隆入原核表达载体pET... 展开更多; 关键词 HIV—1 复合多表位基因原核表达多克隆抗体; 在线阅读下载PDF 职称材料

表达HIV-1复合多表位基因的p815细胞稳定株的建立和评价: 2; 作者张宁李英辉 +4 位作者赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳《科学技术与工程》 2009年第2期253-256,共4页; 建立稳定表达HIV-1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆。设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入pcDNA3.1(+)。在阳离子聚合物作用下重组真核质粒... 展开更多; 关键词 HIV-1 复合多表位基因稳定株; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析: 3; 作者田宏侯相民 +3 位作者吴锦艳陈妍尚佑军刘湘涛《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期270-274,共5页; 体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗... 展开更多; 关键词猪瘟病毒复合多表位抗原基因融合表达活性分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定被引量：2: 4; 作者田泽维董文其刘朝霞《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1174-1176,1180,共4页; 目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blottin... 展开更多; 关键词重组NS-1细胞株筛选鉴定乙型肝炎病毒核心抗原多表位复合基因杂合HBc颗粒; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HIV—1复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备: 1; 作者李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳; 机构第四军医大学病原生物学教研室; 出处《科学技术与工程》 2008年第12期3119-3123,共5页; 基金国家自然科学基金项目(30600527)资助; 文摘为表达HIV—1复合多表位基因并制备其多克隆抗体。设计引物,以HIV—1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入大肠杆菌。将测序正确的p24MEG基因克隆入原核表达载体pET32a并诱导表达。采用Ni2+-NTA亲和柱纯化目的蛋白,以p24抗体对纯化蛋白进行Western-blot分析。将纯化的融合蛋白免疫家兔制备多克隆抗体。通过PCR成功获得长度为651bp的HIV—1的p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG基因,通过诱导表达,显示在相对分子量约45000处有预计大小的特异性条带,表明成功表达出融合蛋白。经此纯化的融合蛋白免疫的家兔能产生特异性抗体,其滴度达到1∶3200。纯化的融合蛋白和多克隆抗体为研究新型HIV疫苗奠定一定的理论和实践基础。; 关键词 HIV—1 复合多表位基因原核表达多克隆抗体; Keywords HIV--1 fusion muhi-epitope gene prokaryotic expression polyclonal antibody; 分类号 R593.3 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名表达HIV-1复合多表位基因的p815细胞稳定株的建立和评价: 2; 作者张宁李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳; 机构第四军医大学病原生物学教研室; 出处《科学技术与工程》 2009年第2期253-256,共4页; 基金国家自然科学基金项目(30600527)资助; 文摘建立稳定表达HIV-1p24MEG复合多表位基因的p815细胞克隆。设计引物,以HIV-1标准株全长cDNA序列为模板,PCR扩增获得p24基因片段;合成改造后的多个表位基因MEG并且与p24片段相连接,克隆入pcDNA3.1(+)。在阳离子聚合物作用下重组真核质粒转染的p815(H-2d)细胞,以G418压力筛选,RT-PCR检测mRNA表达,间接免疫荧光检测蛋白表达。通过PCR获得了HIV-1p24片段,获得了与多表位基因连接后的p24MEG融合基因,成功构建了p24MEG基因的重组真核表达载体pcDNA3.1(+)/p24MEG。转染p815细胞后,RT-PCR检测到融合蛋白mRNA表达,间接免疫荧光显示p815细胞内有融合蛋白的表达。结论:建立了稳定表达HIV-1p24MEG融合蛋白的p815细胞克隆,为评价多表位抗原p24MEG在BALB/c小鼠体内诱导的细胞免疫应答奠定基础。; 关键词 HIV-1 复合多表位基因稳定株; Keywords HIV-1 fusion multi-epitope gene stable strain; 分类号 Q813 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析: 3; 作者田宏侯相民吴锦艳陈妍尚佑军刘湘涛; 机构中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期270-274,共5页; 基金国家863高技术研究发展计划(863)资助项目(2006AA241110); 文摘体外表达猪瘟病毒(CFSV)T、B细胞表位,并对表达产物的免疫原性进行分析。人工合成CFSV的多个T、B细胞表位及表位之间的连接linker基因,并将该基因插入pGEX-6P-1表达载体,经酶切和测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了CFSV复合多表位抗原基因的原核表达质粒pGEX-BT500,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达,纯化表达产物并免疫兔。结果:通过IPTG诱导目的基因可高效表达,SDS-PAGE结果表明,以终浓度为0.9mmol.L-1的IPTG进行诱导,7h后表达量最高,产物分泌表达,相对分子质量约43ku,表达产量约占菌体总蛋白的30%。Western blotting检测表明,表达的融合蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应;兔攻毒试验表明所免疫表达产物可保护(根据发热反应评价)兔。结果表明表达获得的产物具有良好的反应原性,这为应用该融合蛋白制备CSFV免疫血清学诊断试剂和多表位疫苗研究奠定了基础。; 关键词猪瘟病毒复合多表位抗原基因融合表达活性分析; Keywords classical swine fever virus compound multi-epitope gene fusion expression activa-tion analysis; 分类号 S852.651 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定被引量：2: 4; 作者田泽维董文其刘朝霞; 机构解放军第第一军医大学热带病研究室第一军医大学分校检验教研室; 出处《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1174-1176,1180,共4页; 基金国家自然科学基金(30170532)~~; 文摘目的建立稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株。方法将以HBV多表位复合基因取代脊区基因的杂合HBc真核表达质粒转染NS-1细胞,经G418及亚克隆筛选高表达阳性细胞株,并以RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测、鉴定重组细胞表达产物。结果筛选所得稳定表达细胞株经RT-PCR、ELISA、间接免疫荧光及Western blotting等方法检测均呈阳性反应,而阴性对照及空白对照未出现相应阳性反应。结论筛选获得稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组细胞株,命名为NS/HBc-Mep。为建立HBc-Mep特异的cELISA及CTL活性测定等实验方法提供可靠的靶细胞。; 关键词重组NS-1细胞株筛选鉴定乙型肝炎病毒核心抗原多表位复合基因杂合HBc颗粒; Keywords core antigen, hepatitis B virus compound multiepitopes gene recombinant NS-1 cell; 分类号 R346 [医药卫生—基础医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	HIV—1复合多表位基因的原核表达和多克隆抗体制备	李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳	《科学技术与工程》	2008	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	表达HIV-1复合多表位基因的p815细胞稳定株的建立和评价	张宁李英辉赵亚刘忠湘毛张翔黄豫晓薛采芳	《科学技术与工程》	2009	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪瘟病毒多表位基因的表达及其免疫原性分析	田宏侯相民吴锦艳陈妍尚佑军刘湘涛	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	稳定表达含HBV多表位短肽的杂合HBc颗粒的重组NS-1细胞株的筛选与鉴定	田泽维董文其刘朝霞	《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心	2003	2	在线阅读下载PDF 职称材料