基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测β-内酰胺酶的研究进展 被引量：9

1

作者 余佳佳 俞静 刘瑛 《上海交通大学学报（医学版）》 CSCD 北大核心 2017年第4期566-570,共5页

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种检测微生物的新型工具,不仅可用于微生物的快速鉴定,而且还可以检测细菌的耐药机制。产β-内酰胺酶是革兰阴性杆菌耐β-内酰胺类抗菌药物的主要耐药机制,目前利用MALDI-TOF MS快... 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种检测微生物的新型工具,不仅可用于微生物的快速鉴定,而且还可以检测细菌的耐药机制。产β-内酰胺酶是革兰阴性杆菌耐β-内酰胺类抗菌药物的主要耐药机制,目前利用MALDI-TOF MS快速检测细菌β-内酰胺酶的技术已被广泛报道,方法主要有检测β-内酰胺酶水解β-内酰胺类抗菌药物的活性,直接检测β-内酰胺酶分子、肽段或其相关蛋白以及检测β-内酰胺酶基因的单核苷酸多态性等。该文结合最新的研究成果对MALDI-TOF MS在β-内酰胺酶检测中的应用现状进行综述。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 Β-内酰胺酶 水解试验 单核苷酸多态性

在线阅读 下载PDF 职称材料

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌δ-毒素的应用 被引量：5

2

作者 郭庆昕 杨滨 强华 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 2019年第4期455-460,共6页

目的本研究采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)检测δ-毒素,评估其在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分型和毒力表达中的作用。方法使用Bruker microflex MALDI-TOF仪器,采集2000~20000Da质量范围内,以正线性模式采... 目的本研究采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)检测δ-毒素,评估其在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的分型和毒力表达中的作用。方法使用Bruker microflex MALDI-TOF仪器,采集2000~20000Da质量范围内,以正线性模式采集图谱,使用仪器配套的MALDI Biotyper 2.0软件分析MRSA菌株的原始图谱,产生的峰列表直接使用flexAnalysis、clinProTools 3.0软件分析。结果本研究中共检测83株MRSA,共有39(47.0%)株MRSA检出(3005±5)m/z信号峰,其中HA-MRSA19(22.9%)株,CA-MRSA20(26.5%)株,P=0.766,两者之间无显著性差异;33(39.8%)株MRSA检出(3035±5)m/z信号峰,其中HA-MRSA9(10.8%)株,CA-MRSA24(28.9%)株,P=0.003,两者之间有显著性差异;11(13.%)株MRSA既未检出(3005±5)m/z信号峰也未检出(3035±5)m/z信号峰,全部为HA-MRSA菌株。spa分型中检出(3005±5)m/z信号峰,15(18.1%)株为t062型,8株为t015(9.6%)型,4株为t030(4.8%)株,P=0,有显著性差异;检出(3035±5)m/z信号峰,31(37.3%)株为t437型,2(2.4%)株t8660型,P=0,有显著性差异;(3035±5)m/z作为spat437型特征信号ROC曲线下面积0.89,P=0。11株未检出δ-毒素,6株分离自骨关节标本,3株分离自呼吸道标本,1株分离自慢性溃疡的分泌物标本,1株分离自血液;在血平板的菌落特征,6株MRSA菌落形态发生改变,5株菌落形态正常。结论MALDI-TOF MS使用常规方法即可快速检测MRSA的δ-毒素,其质谱峰为(3005±5)m/z和(3035±5)m/z两种;(3035±5)m/z是δ-毒素的同基因变异体(HldG10S)的质谱峰,该峰可快速鉴别spat437型;不产生δ-毒素的菌株是agr调控系统失调的表现,与慢性感染、小菌落形成、无明显β-溶血有关。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 δ-毒素

在线阅读 下载PDF 职称材料

基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱鉴定鲨鱼硒结合蛋白 被引量：2

3

作者 王勇 李水明 何曼文 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第5期257-262,共6页

利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因... 利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了原核表达的白鳍鲨硒结合蛋白。实验表明,硒结合蛋白肽段之一被错误指认为胰酶自水解峰和混合谱是影响其未进行串联质谱分析或不能被数据库搜索匹配的主要原因,同时还发现,虽然赖氨酸结尾肽段在MALDI源中信号强度普遍很低,但对它们进行串联质谱分析也可获得较好的谱图质量,部分数据可用于从头测序。考虑以上因素后,硒结合蛋白鉴定覆盖率由35%增至51%。 展开更多

关键词 硒结合蛋白 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF TOF) 蛋白质鉴定 数据库 搜索 手工解析

在线阅读 下载PDF 职称材料

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱方法测定全氟烷基磺酸类化合物 被引量：2

4

作者 汪宁 刘冬豪 +3 位作者 容俊楠 周庆琼 漆亚乔 戚平 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2022年第22期292-298,共7页

以α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-cyano-4-hydroxycinnamic acid,HCCA)、2,5-二羟基苯甲酸、芥子酸3种常用基质作为基质,分析5种全氟烷基磺酸(全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟庚烷磺酸、全氟辛烷磺酸、全氟癸烷磺酸)的基质辅助激光解析电... 以α-氰基-4-羟基肉桂酸(α-cyano-4-hydroxycinnamic acid,HCCA)、2,5-二羟基苯甲酸、芥子酸3种常用基质作为基质,分析5种全氟烷基磺酸(全氟丁烷磺酸、全氟己烷磺酸、全氟庚烷磺酸、全氟辛烷磺酸、全氟癸烷磺酸)的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)信号,建立全氟烷基磺酸类化合物的MALDI-TOF MS快速检测方法,初步探究常用基质在负离子反射模式下产生的质谱峰及对待测物的干扰,为全氟烷基磺酸化合物MALDI-TOF MS定量分析及高通量检测方法的建立打下基础。以HCCA作为基质,建立了全氟辛烷磺酸的内标定量检测方法,解决了MALDI-TOF MS检测中定量难的问题。该研究结果表明,采用MALDI-TOF MS内标法测定水中全氟辛烷磺酸的重复性和灵敏度良好,在质量浓度为5~500 ng/mL时,线性相关系数R^(2)为0.9979,检出限为1 ng/mL,定量限为5 ng/mL,水样加标回收率为65%~106%,相对标准偏差为2.36%~17.7%,应用该方法检测水中的全氟辛烷磺酸,能有效实现环境水样中全氟辛烷磺酸的快速定量分析。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS) 负离子反射模式 全氟烷基磺酸类化合物 α-氰基-4-羟基肉桂酸 2 5-二羟基苯甲酸 芥子酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

磺基异硫氰酸苯酯化学辅助方法对新蛋白质进行从头测序 被引量：1

5

作者 周新文 严钦 +1 位作者 周珮 杨芃原 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第4期706-711,共6页

利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间(MALDI-TOF-TOF)质谱结合磺基异硫氰酸苯酯化学辅助的方法对一种从拟青霉(Paecilomyces bainier)分离纯化到的新人参皂苷Rb1水解酶的部分肽段进行了从头测序.共获得了这个新蛋白质8条肽段的序列,... 利用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间(MALDI-TOF-TOF)质谱结合磺基异硫氰酸苯酯化学辅助的方法对一种从拟青霉(Paecilomyces bainier)分离纯化到的新人参皂苷Rb1水解酶的部分肽段进行了从头测序.共获得了这个新蛋白质8条肽段的序列,一些磺化后信噪比非常低的肽段也获得了比较完整的序列.同时通过从头测序分析确定了一对甲硫氨酸非氧化和氧化肽段的序列.结果表明,磺化后的肽段离子化效率大大增强,在PSD(源后裂解)过程中只有肽键断裂产生的C端的碎片离子系列(y离子系列)出现在质谱图中,图谱背景清晰,信噪比高,单纯的y离子系列使得图谱解析变得非常容易.将这8条序列在NCBI(美国国立生物技术信息中心)数据库中进行BLAST(蛋白质序列比对工具)检索印证这种β-葡萄糖甘酶是一个新蛋白质,发现的两条相对保守的序列为进一步研究奠定了基础. 展开更多

关键词 磺基异硫氰酸苯酯 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱 新蛋白质 从头测序

在线阅读 下载PDF 职称材料

人工解析提高串联质谱鉴定肽段的数据利用度

6

作者 王勇 李水明 +1 位作者 何曼文 冯里茹 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2013年第5期538-544,共7页

为降低蛋白质鉴定的假阴性,利用标准蛋白和实际样品,探讨影响基质辅助激光解吸电离–串联飞行时间质谱数据利用度的原因.发现误差设置偏小、翻译后修饰、异常酶解和氨基酸突变等是导致蛋白质数据库检索不匹配目标肽段的主要原因.实验表... 为降低蛋白质鉴定的假阴性,利用标准蛋白和实际样品,探讨影响基质辅助激光解吸电离–串联飞行时间质谱数据利用度的原因.发现误差设置偏小、翻译后修饰、异常酶解和氨基酸突变等是导致蛋白质数据库检索不匹配目标肽段的主要原因.实验表明,典型情况下一级和二级质谱误差可设定在0.3Da.对未与数据库匹配的串联质谱进行亚胺离子辅助的人工解析发现,色氨酸双氧化、丝氨酸乙酰胺化和半胱氨酸丙酰胺化等不常见修饰,酪氨酸与苯丙氨酸、天冬氨酸与谷氨酸两两之间的突变和非特异性酶解等现象,该研究可提高质谱鉴定的数据利用度. 展开更多

关键词 蛋白质组学 数据库搜索 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱 人工解析 亚胺离子

在线阅读 下载PDF 职称材料

质谱法测定4种真菌毒素与载体蛋白偶联物的结合比 被引量：6

7

作者 王莹 王希春 +3 位作者 金福源 何成华 郑浩 张海彬 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2012年第2期219-223,共5页

采用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOFMS)对由3种真菌毒素伏马菌素B1(FB1)、赭曲霉毒素A(OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与两种载体蛋白... 采用基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight massspectrometry,MALDI-TOFMS)对由3种真菌毒素伏马菌素B1(FB1)、赭曲霉毒素A(OTA)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)与两种载体蛋白卵清白蛋白(OVA)、血清白蛋白(BSA)分别偶联制备得到的4种小分子-载体蛋白偶联物FB1-OVA、FB1-BSA、OTA-BSA、DON-OVA的偶联结合比进行测定,并与紫外吸收光谱法进行比较。基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法测得偶联物FB1-OVA、FB1-BSA、OTA-BSA、DON-OVA的结合比分别为5:1、11:1、3:1、0;紫外吸收光谱法测得OTA-BSA的结合比为4.4:1,DON-OVA的结合比为3.4:1,无法测定FB1-OVA、FB1-BSA结合比。 展开更多

关键词 基质辅助激光解吸-电离飞行时间质谱法 紫外吸收光谱法 真菌毒素 载体蛋白 偶联物 结合比

在线阅读 下载PDF 职称材料

Ni~Ⅱ-NTA修饰的银纳米粒/多孔硅芯片在线分离组氨酸标记蛋白和MALDI-TOF质谱检测(英文)

8

作者 颜红 王冲 +1 位作者 周小会 肖守军 《无机化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1642-1648,共7页

本文通过沉积在多孔硅表面的银纳米粒吸附对氨基苯硫酚和氨基的化学转化得到终端为NiII-Nα,Nα-二(羧甲基)-L-赖氨酸水合物-即NiⅡ-NTA体系的芯片。NiⅡ-NTA修饰的芯片被用于从高浓度的盐和助溶剂的缓冲体系中亲和捕获组氨酸标记的融... 本文通过沉积在多孔硅表面的银纳米粒吸附对氨基苯硫酚和氨基的化学转化得到终端为NiII-Nα,Nα-二(羧甲基)-L-赖氨酸水合物-即NiⅡ-NTA体系的芯片。NiⅡ-NTA修饰的芯片被用于从高浓度的盐和助溶剂的缓冲体系中亲和捕获组氨酸标记的融合蛋白:thioredoxin-urodilatin和SUMO-hu-aprotinin,并进行在线的MALDI-TOF质谱检测,克服了MALDI-TOF质谱中直接点样污染物妨碍样品与基质共结晶的问题,避免了繁琐的离线样品预处理。芯片在线分离、纯化和MALDI-TOF质谱分析体系有望在复杂或原始体液的溶液中分析目标分子。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离时间飞行质谱 NiⅡ-Nα Nα-二(羧甲基)-L-赖氨酸水合物 银纳米粒/多孔硅芯片 组氨酸标记的融合蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

水稻根尖质膜蛋白质组学研究方法的建立 被引量：7

9

作者 齐耀程 王宁 +2 位作者 程彦伟 徐朗莱 张炜 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期111-117,共7页

以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料，利用葡聚糖／聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90％的质膜组分，使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白，通过等电聚焦／十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（IEF／SDS-PAGE）分离和基质辅助激... 以徐稻3号水稻苗期幼嫩根尖为材料，利用葡聚糖／聚乙二醇两相分配法纯化得到纯度达90％的质膜组分，使用优化的双向电泳水化液溶解质膜蛋白，通过等电聚焦／十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（IEF／SDS-PAGE）分离和基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱（MAI-DI—TOF／TOF）分析，鉴定了31个水稻质膜相关蛋白。结果表明IEF／SDSPAGE双向电泳适合分离亲水性相对较高的膜附着蛋白。进一步利用高盐和温和去污剂对纯化的质膜进行洗涤，以降低质膜组分的复杂程度，通过SDS-PAGE单向电泳分离和液相色谱串联质谱（LC-MS／MS）分析，鉴定了8个质膜蛋白。经洗涤后的质膜组分复杂度显著降低，SDS-PAGE中的蛋白条带只包含1～2种蛋白，且主要为疏水性较强的穿膜蛋白，说明多种生物化学分离方法及不同质谱分析的综合运用，是解决生物膜蛋白质组学难点的有效途径。 展开更多

关键词 水稻 质膜 蛋白质组学 等电聚焦/十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶双向电泳 基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱 纳升电喷雾串联质谱

在线阅读 下载PDF 职称材料

色谱纯化和质谱分析法研究牛骨源咸味肽 被引量：9

10

作者 李迎楠 刘文营 +1 位作者 张顺亮 成晓瑜 《肉类研究》 北大核心 2016年第3期25-28,共4页

以牛骨为研究对象,通过中空纤维超滤装置、Sephadex G-25凝胶色谱柱对相对分子质量小于5 000的酶解产物进行初步分离,选用制备型及分析型高效液相色谱分析仪对咸味肽进行纯化、收集及分析。结果表明:收集得到牛骨源咸味肽为单一组分;用... 以牛骨为研究对象,通过中空纤维超滤装置、Sephadex G-25凝胶色谱柱对相对分子质量小于5 000的酶解产物进行初步分离,选用制备型及分析型高效液相色谱分析仪对咸味肽进行纯化、收集及分析。结果表明:收集得到牛骨源咸味肽为单一组分;用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪对咸味肽进行分析,得到其为相对分子质量均小于1 000的短肽,其呈现咸味的物质质荷比值可能为679.510 9。 展开更多

关键词 咸味肽 凝胶色谱 高效液相色谱 基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱仪

在线阅读 下载PDF 职称材料

蛋白质胰蛋白酶水解过程双位点漏切肽段的质谱鉴定 被引量：4

11

作者 王勇 李水明 +1 位作者 何曼文 邹永东 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第1期29-34,共6页

为说明胰蛋白酶漏切位点数目设置对蛋白质搜库结果的影响,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白。在细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液中分别发现了2... 为说明胰蛋白酶漏切位点数目设置对蛋白质搜库结果的影响,采用基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)高置信度地鉴定了细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白。在细胞色素C和大豆脱落胁迫成熟蛋白的胰酶水解液中分别发现了2个和4个双胰酶漏切位点肽段,确认了文献中报道的当赖氨酸和赖氨酸相邻或赖氨酸、精氨酸各自与天冬氨酸或者谷氨酸相邻时,会引起胰蛋白酶的漏切。此外,还发现组氨酸-赖氨酸-异亮氨酸/丙氨酸结构也有此现象。本研究中检测出漏切肽段并没有明显提高序列覆盖率,但显著增加了蛋白质鉴定结果的确定性。在实际样品分析中如将漏切数设置为1有可能产生肽段鉴定的假阴性。 展开更多

关键词 胰蛋白酶 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱 细胞色素C 大豆脱落胁迫成熟蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕微孢子虫蛋白水解酶的活性检测及质谱鉴定和序列分析 被引量：2

12

作者 党晓群 马强 +5 位作者 林立鹏 龙梦娴 李春峰 李田 潘国庆 周泽扬 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期281-287,共7页

微孢子虫的蛋白水解酶类不仅参与代谢活动,而且可能作为一种潜在的侵染宿主的毒力因子。为了研究家蚕微孢子虫蛋白水解酶的种类及蛋白质结构特点,将家蚕微孢子虫总蛋白经非变性凝胶电泳后与底物酪蛋白孵育,检测到可水解酪蛋白的蛋白酶... 微孢子虫的蛋白水解酶类不仅参与代谢活动,而且可能作为一种潜在的侵染宿主的毒力因子。为了研究家蚕微孢子虫蛋白水解酶的种类及蛋白质结构特点,将家蚕微孢子虫总蛋白经非变性凝胶电泳后与底物酪蛋白孵育,检测到可水解酪蛋白的蛋白酶类的活性。采用质谱法分析该类蛋白酶主要是锌离子依赖型的细胞质型亮氨酰氨肽酶和丝氨酸蛋白酶。细胞质型亮氨酰氨肽酶序列是由1 515个碱基编码的505个氨基酸组成,无信号肽,有2个潜在的锌离子结合部位,属于金属蛋白酶M17家族;丝氨酸蛋白酶具有肽酶S8结构域和跨膜域。通过序列比对发现在兔脑炎微孢子虫、蝗虫微孢子虫、蜜蜂微孢子虫、肠道微孢子虫和比氏肠道微孢子虫中均有这2种酶,且相似度较高,其进化较为保守。 展开更多

关键词 家蚕微孢子虫 蛋白水解酶 酶活性 基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱 序列特征

在线阅读 下载PDF 职称材料

缺血性脑卒中血清低分子量蛋白质的表达 被引量：1

13

作者 王屹 于艳 +2 位作者 涂文军 陈蕾 陈惠 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2012年第2期114-117,共4页

目的探讨缺血性脑卒中患者与正常人血清蛋白表达的差异性。方法选择缺血性脑卒中患者33例（病例组）,正常对照39例（对照组）,通过磁珠捕获血清蛋白组分,应用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术检测蛋白质谱,获得... 目的探讨缺血性脑卒中患者与正常人血清蛋白表达的差异性。方法选择缺血性脑卒中患者33例（病例组）,正常对照39例（对照组）,通过磁珠捕获血清蛋白组分,应用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术检测蛋白质谱,获得差异多肽谱。依据美国国立卫生院神经功能缺损评分（NIHSS）标准评价卒中的严重程度,依据改良整体生活功能量表（mRS）评价功能恢复。结果病例组和对照组共获得55个差异峰（P〈0.05）。分子量1000~2000范围中共有7个差异峰,包括4个正向增高的峰,3个反向差异峰,其中反向峰质核比为1864的峰强度在病例组中水平降低显著,其降低程度与脑卒中危险因素、卒中的严重程度、功能恢复等无相关性。结论质核比为1864的峰在缺血性脑卒中筛查中因不受其特定人群的影响可作为反向生物标记物,为缺血性脑卒中的筛查、早期诊断和干预提供依据。 展开更多

关键词 缺血性脑卒中 基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱 生物标记物

在线阅读 下载PDF 职称材料

亚胺及其相关离子在区分赖氨酸和谷氨酰胺残基中的应用 被引量：1

14

作者 李水明 何曼文 王勇 《质谱学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第3期256-261,共6页

完全从头测序要求区分肽段中的同量异序氨基酸谷氨酰胺和赖氨酸,而这通常需要借助高分辨质谱。谷氨酰胺和赖氨酸都可以产生m/z 101亚胺离子和m/z 84亚胺相关离子,尽管已知赖氨酸亚胺离子m/z101有时强度较弱,以及m/z84离子可预示赖氨酸... 完全从头测序要求区分肽段中的同量异序氨基酸谷氨酰胺和赖氨酸,而这通常需要借助高分辨质谱。谷氨酰胺和赖氨酸都可以产生m/z 101亚胺离子和m/z 84亚胺相关离子,尽管已知赖氨酸亚胺离子m/z101有时强度较弱,以及m/z84离子可预示赖氨酸的存在,但该特征能否用于区分赖氨酸和谷氨酰胺仍存在争议。本工作以合成肽段和蛋白质胰酶水解肽段为研究体系,利用基质辅助激光解吸电离的高能碰撞诱导解离模式产生的亚胺及其相关离子的相对强度区分这两种氨基酸。结果表明:谷氨酰胺更易产生m/z101离子,而赖氨酸更易产生m/z84和m/z129离子。对于不同时含有赖氨酸和谷氨酰胺的肽段,使用m/z84离子与亚胺离子m/z101的相对强度比值,而非它们的绝对强度,以及m/z101离子的测量值,可以直接判断序列中存在的是赖氨酸还是谷氨酰胺。对于含有谷氨酰胺,并以赖氨酸结尾或含有漏切赖氨酸的肽段,该强度比可为序列中谷氨酰胺的个数和位置提供参考。因此,低质量区提供的亚胺及其相关离子信息有助于区分赖氨酸和谷氨酰胺。 展开更多

关键词 亚胺离子 基质辅助激光解吸电离-串联飞行时间质谱 赖氨酸 谷氨酰胺 同量异序氨基酸

在线阅读 下载PDF 职称材料

MALDI-TOF MS法快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的研究 被引量：2

15

作者 张文刚 姜芹 +3 位作者 孙冰清 商军 徐锋 顾欣 《上海畜牧兽医通讯》 2018年第5期11-13,共3页

本研究考察了培养基、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的影响。结果表明:在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基和肠球菌显色营养琼脂培养基上培养对粪肠球菌、屎肠... 本研究考察了培养基、培养时间对基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDITOF MS)快速鉴定猪、鸡源大肠杆菌和肠球菌的影响。结果表明:在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基和肠球菌显色营养琼脂培养基上培养对粪肠球菌、屎肠球菌的鉴定没有显著区别;在哥伦比亚血琼脂培养基、胰酪大豆胨琼脂培养基上培养对大肠杆菌的鉴定没有显著区别,而麦康凯培养基则不适合大肠杆菌的快速鉴定。大于24h的培养时间对大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌3种细菌快速鉴定均有不同程度的影响,其中对大肠杆菌的影响最为显著,而对粪肠球菌的影响最小。重复性实验中,大肠杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌的鉴定分值均在90%以上,批间、批内变异系数均小于5%,说明本实验方法稳定性和重复性良好。与传统的生化鉴定方法比较,MALDITOF MS法操作简单快速、准确,可有效提升动物源细菌分离鉴定的工作效率。 展开更多

关键词 大肠杆菌 粪肠球菌 屎肠球菌 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法

在线阅读 下载PDF 职称材料

黄酒混浊蛋白组成成分及来源分析 被引量：1

16

作者 谢广发 樊世英 +8 位作者 傅建伟 胡志明 陆健 谭新勇 孙军勇 傅祖康 王兰 毛青钟 李国龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第8期215-219,共5页

采用双向电泳对混浊蛋白进行分离,并结合基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱法鉴定混浊蛋白的主要种类及来源。结果表明,黄酒混浊蛋白质来源于小麦的有类燕麦蛋白A、类燕麦蛋白B、类燕麦蛋白前体、二聚α-淀粉酶抑制剂和胰蛋白酶前... 采用双向电泳对混浊蛋白进行分离,并结合基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱法鉴定混浊蛋白的主要种类及来源。结果表明,黄酒混浊蛋白质来源于小麦的有类燕麦蛋白A、类燕麦蛋白B、类燕麦蛋白前体、二聚α-淀粉酶抑制剂和胰蛋白酶前体等,来源于水稻的有假定蛋白OSJ_04535、假定蛋白OSI_17439和蛋白H0313F03.18。通过N-三(羟甲基)甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对黄酒酿造原料及黄酒发酵过程中蛋白质的主要组成进行分析,结果表明黄酒混浊蛋白主要来源于大米和麦曲,并且在发酵过程中难以被微生物降解,存在于发酵的整个过程中。 展开更多

关键词 黄酒 混浊蛋白 基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱法 蛋白来源 发酵过程

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕孤雌生殖差异蛋白——热休克相关蛋白的生物信息学分析 被引量：5

17

作者 夏佳音 龙晓辉 +6 位作者 陈健 聂作明 王丹 吕正兵 徐杰 贺平安 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期568-573,共6页

应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这... 应用双向凝胶电泳(2-DE)技术研究家蚕孤雌生殖蚁蚕和正常蚁蚕的总蛋白质的差异,得到与孤雌生殖相关的差异蛋白点,并对这些蛋白点进行基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF MS)分析,获得了相关差异蛋白的序列特征。将这些序列与已构建的家蚕cDNA文库及蛋白质数据库进行比对,得到3个差异蛋白为热休克相关蛋白。通过5-′RACE的方法克隆到3个差异蛋白的全基因序列,并对它们进行结构和特征分析,有助于进一步研究其与孤雌生殖的关系。 展开更多

关键词 家蚕 孤雌生殖 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱 差异蛋白 热休克蛋白 结构分析

在线阅读 下载PDF 职称材料

家蚕微孢子虫与桑尺蠖来源微孢子虫的蛋白组学分析 被引量：1

18

作者 侯建革 沈中元 +2 位作者 唐旭东 徐莉 朱峰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期537-542,共6页

通过比较家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)与桑尺蠖来源微孢子虫之间的蛋白质组差异,探讨二者对家蚕的侵染力差异产生的原因。采用Percoll法纯化微孢子虫,再以玻璃珠破碎法提取2种来源的微孢子虫总蛋白质,经Bradford法测定蛋白质浓度后进... 通过比较家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)与桑尺蠖来源微孢子虫之间的蛋白质组差异,探讨二者对家蚕的侵染力差异产生的原因。采用Percoll法纯化微孢子虫,再以玻璃珠破碎法提取2种来源的微孢子虫总蛋白质,经Bradford法测定蛋白质浓度后进行双向电泳(2-DE)。通过Imagemaster软件分析比较家蚕微孢子虫与桑尺蠖来源微孢子虫总蛋白质的2-DE图谱,可较为明显地发现后者缺少11个蛋白点,前者缺少2个蛋白点。对13个差异蛋白点进行质谱鉴定,有一个大小约40 kD的差异蛋白点被注释为家蚕微孢子虫的极管蛋白3(PTP3);另有6个假定蛋白,其中5个源自家蚕微孢子虫,1个源自桑尺蠖来源微孢子虫;其它蛋白点则分别被注释为ATP酶、铁氧还蛋白、ABC转运蛋白、解旋酶等,其中一个被注释为HrpA样解旋酶的蛋白点源自桑尺蠖来源微孢子虫,其余则源自家蚕微孢子虫。初步推测桑尺蠖来源微孢子虫由于极管蛋白3相对表达量偏低或缺少PTP3的部分肽段或其结构不同,影响到极管的弹射伸长,因而对家蚕的侵染力下降。 展开更多

关键词 微孢子虫 家蚕 桑尺蠖 蛋白质组 双向电泳 基质辅助激光解析电离串联飞行时间质谱 极管蛋白

在线阅读 下载PDF 职称材料

澄清剂对黄酒混浊蛋白去除效果的研究 被引量：5

19

作者 樊世英 孙军勇 +1 位作者 谢广发 陆健 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期167-170,177,共5页

研究了单宁、硅胶和Polyclar R Brewbrite等澄清剂对黄酒混浊蛋白特异性去除的效果,并通过采用N-三(羟甲基)甘氨酸-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱,研究了黄酒混浊蛋白及不同澄清剂吸附蛋白... 研究了单宁、硅胶和Polyclar R Brewbrite等澄清剂对黄酒混浊蛋白特异性去除的效果,并通过采用N-三(羟甲基)甘氨酸-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱,研究了黄酒混浊蛋白及不同澄清剂吸附蛋白的分子量、蛋白质种类及来源,并比较了澄清剂处理前后酒样隆丁区分和非生物稳定性的变化。结果表明:黄酒混浊蛋白的主要成分为类燕麦蛋白和二聚α-淀粉酶抑制剂,主要来源于小麦,几种澄清剂对二聚α-淀粉酶抑制剂都有一定的吸附作用,且处理后的酒样稳定性得到提高,其中以单宁效果最为明显。 展开更多

关键词 黄酒 澄清剂 混浊蛋白 基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱 蛋白稳定性

在线阅读 下载PDF 职称材料

Edman降解中异硫氰酸苯酯新修饰位点的发现和验证 被引量：6

20

作者 周艳卿 蒋小岗 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期752-756,共5页

Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法,该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用,该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端,并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异... Edman降解是最早建立的一种用于多肽和蛋白质氨基端测序的方法,该方法现在仍被广泛用于生物化学领域。随着高通量蛋白质组学技术的发展和应用,该方法中的异硫氰酸苯酯反应被用于修饰蛋白质氨基端,并用于检测蛋白质水解位点。但还没有异硫氰酸苯酯是否可以修饰其他氨基酸侧链并影响多肽序列分析的研究。为了探究其修饰其他氨基酸的可能性,本文利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)研究了异硫氰酸苯酯对一个模型肽的化学修饰。质谱数据解析后发现在高浓度异硫氰酸苯酯的反应条件下,组氨酸上可以引入一个新的异硫氰酸苯酯修饰位点。这一修饰位点的发现预示着通过改变实验条件或分析方法,可以更准确地利用Edman降解和蛋白质组学技术分析多肽和蛋白质。 展开更多

关键词 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 液相色谱-串联质谱 Edman降解 异硫氰酸苯酯 模型肽 组氨酸

在线阅读 下载PDF 职称材料