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基于基因C型鸭甲肝病毒VP1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体ELISA检测方法的建立
被引量：
5
1
作者
杨发龙
张焕容
+2 位作者
程方明
岳华
汤承
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期1148-1153,共6页
以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L-1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL-1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100...
以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L-1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL-1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100,HRP酶标羊抗鸭IgG稀释度为1∶5 000,封闭液为含10%脱脂乳的0.01mol·L-1 PBS,37℃封闭2h,血清稀释液为含1%BSA的PBS,抗体反应时间为60min,酶标羊抗鸭IgG反应时间为30min,底物作用时间为15min,临界值为OD450nm≥0.474。该方法重复性好,批内变异系数为2.03%~2.95%,批间变异系数为3.28%~7.38%,与鸭圆环病毒(DUCV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭瘟病毒(DPV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸭抗大肠杆菌、鸭抗金黄色葡萄球菌、鸭抗沙门菌、鸭抗禽多杀性巴氏杆菌以及鸭疫里默杆菌阳性血清无交叉反应,而与基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)阳性血清有交叉反应,表明该方法可以作为检测DHAV-C和DHAV-A抗体的通用ELISA方法。与中和试验相比,阳性血清检测符合率为80%,阴性血清检测符合率为100%。初步临床应用表明:该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体消长的检测。本研究基于DHAV-C VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于基因A型和C型鸭甲型肝炎的血清流行病学调查和抗体检测。
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关键词
基因c型鸭甲肝病毒
VP1蛋白
间接ELISA
抗体检测
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职称材料
基因C型鸭甲肝病毒实验感染雏鸭的组织病理学及病毒分布
被引量：
2
2
作者
张焕容
皮晋魁
黄志宏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期622-628,共7页
旨在研究基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)感染导致雏鸭的组织病理学变化和病毒的组织分布,为该病毒的致病机理研究奠定基础。本研究以基因C型鸭甲肝病毒感染SPF雏鸭,感染后不同时间点采取雏鸭10个不同组织器官制备组织切片,通过HE染色和免疫...
旨在研究基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)感染导致雏鸭的组织病理学变化和病毒的组织分布,为该病毒的致病机理研究奠定基础。本研究以基因C型鸭甲肝病毒感染SPF雏鸭,感染后不同时间点采取雏鸭10个不同组织器官制备组织切片,通过HE染色和免疫酶组织化学染色对感染雏鸭的组织病理学变化及病毒抗原免疫组化定位进行观察。结果表明:DHAV-C感染导致雏鸭的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、胸腺、胰脏、大脑和法氏囊共10个组织器官均发生了不同程度的病变,同时在这些器官中均有病毒抗原检出,在10个检测组织器官中,以肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊、胸腺和胰脏等器官的组织病变和抗原检出最为明显,病变的严重程度与病毒抗原检出量成正相关。DHAV-C广泛分布到受检组织器官中,它导致的组织病理学变化严重程度与病毒抗原的检出量成正相关,推测DHAV-C入侵导致肝、肾和免疫器官的损害,是其急性感染发病的根本原因。
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关键词
基因c型鸭甲肝病毒
组织病理学
免疫组化
病毒
分布
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职称材料
题名
基于基因C型鸭甲肝病毒VP1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体ELISA检测方法的建立
被引量：
5
1
作者
杨发龙
张焕容
程方明
岳华
汤承
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
动物医学四川省高等学校重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第7期1148-1153,共6页
基金
国家高技术研究发展计划(2012AA101304)
西南民族大学研究生学位点建设项目(2014XWD-S0906)
四川省教育厅创新团队项目(13TD0057)
文摘
以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L-1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL-1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100,HRP酶标羊抗鸭IgG稀释度为1∶5 000,封闭液为含10%脱脂乳的0.01mol·L-1 PBS,37℃封闭2h,血清稀释液为含1%BSA的PBS,抗体反应时间为60min,酶标羊抗鸭IgG反应时间为30min,底物作用时间为15min,临界值为OD450nm≥0.474。该方法重复性好,批内变异系数为2.03%~2.95%,批间变异系数为3.28%~7.38%,与鸭圆环病毒(DUCV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭瘟病毒(DPV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸭抗大肠杆菌、鸭抗金黄色葡萄球菌、鸭抗沙门菌、鸭抗禽多杀性巴氏杆菌以及鸭疫里默杆菌阳性血清无交叉反应,而与基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)阳性血清有交叉反应,表明该方法可以作为检测DHAV-C和DHAV-A抗体的通用ELISA方法。与中和试验相比,阳性血清检测符合率为80%,阴性血清检测符合率为100%。初步临床应用表明:该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体消长的检测。本研究基于DHAV-C VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于基因A型和C型鸭甲型肝炎的血清流行病学调查和抗体检测。
关键词
基因c型鸭甲肝病毒
VP1蛋白
间接ELISA
抗体检测
Keywords
genotype
c
du
c
k hepatitis A virus(DHAV-
c
)
re
c
ombinant VP1protein
indire
c
t ELISA
antibody dete
c
tion
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
基因C型鸭甲肝病毒实验感染雏鸭的组织病理学及病毒分布
被引量：
2
2
作者
张焕容
皮晋魁
黄志宏
机构
西南民族大学生命科学与技术学院
动物医学四川省高等学校重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第4期622-628,共7页
基金
西南民族大学中央高校基本科研业务费专项(11NZYQN35)
国家"863"高技术发展研究计划(2012AA101304)
文摘
旨在研究基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)感染导致雏鸭的组织病理学变化和病毒的组织分布,为该病毒的致病机理研究奠定基础。本研究以基因C型鸭甲肝病毒感染SPF雏鸭,感染后不同时间点采取雏鸭10个不同组织器官制备组织切片,通过HE染色和免疫酶组织化学染色对感染雏鸭的组织病理学变化及病毒抗原免疫组化定位进行观察。结果表明:DHAV-C感染导致雏鸭的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、胸腺、胰脏、大脑和法氏囊共10个组织器官均发生了不同程度的病变,同时在这些器官中均有病毒抗原检出,在10个检测组织器官中,以肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊、胸腺和胰脏等器官的组织病变和抗原检出最为明显,病变的严重程度与病毒抗原检出量成正相关。DHAV-C广泛分布到受检组织器官中,它导致的组织病理学变化严重程度与病毒抗原的检出量成正相关,推测DHAV-C入侵导致肝、肾和免疫器官的损害,是其急性感染发病的根本原因。
关键词
基因c型鸭甲肝病毒
组织病理学
免疫组化
病毒
分布
Keywords
du
c
k hepatitis A virus genotype
c
（DHAV-
c
）
histopathologi
c
al
c
hange
immunohis-to
c
hemi
c
al （IH
c
） staining
virus distribution
分类号
S858.325.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
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作者
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发文年
被引量
操作
1
基于基因C型鸭甲肝病毒VP1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体ELISA检测方法的建立
杨发龙
张焕容
程方明
岳华
汤承
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基因C型鸭甲肝病毒实验感染雏鸭的组织病理学及病毒分布
张焕容
皮晋魁
黄志宏
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
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