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人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
王晓军
王爱民
+6 位作者
张忠荣
吴思宇
郭庆山
吴军
贺伟峰
汤守营
张全顺
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2005年第2期167-170,共4页
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携...
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs) 进行感染。采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度。结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功, 病毒滴度可达2．5×108pfu／ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含 hOPG重组腺病毒载体。
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关键词
人骨保护素
基因重组腺病毒载体
adEasy系统
大鼠骨髓基质细胞
细菌内同源
重组
法
基因
工程技术
293细胞
PCR方法
载体
质粒
基因
片段
大肠杆菌
骨架质粒
基因
转染
酶切鉴定
病毒
滴度
感染能力
G
基因
hOP
计数法
检测
荧光
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职称材料
rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究
被引量：
2
2
作者
陈俭云
崔海宁
+1 位作者
王正文
张克君
《海南医学院学报》
CAS
2012年第1期5-8,11,共5页
目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组...
目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P<0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P<0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。
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关键词
胰腺癌
slug
基因
的RNA干扰
重组
腺病毒
载体
移植瘤转移
血管生成
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职称材料
题名
人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
被引量：
1
1
作者
王晓军
王爱民
张忠荣
吴思宇
郭庆山
吴军
贺伟峰
汤守营
张全顺
机构
第三军医大学大坪附属医院野战外科研究所全军战创中心骨创伤科
第三军医大学西南医院烧伤研究所
解放军第
出处
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2005年第2期167-170,共4页
文摘
目的构建人骨保护素(hOPG)基因的重组腺病毒载体并检测其转染能力。方法采用基因工程技术,将hOPG基因片段插入到腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV上,利用PadEasy系统与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增,得到携带hOPG基因的重组腺病毒AdEasy-PAdtrack-CMV-hOPG,将重组腺病毒AdhOPG对大鼠骨髓基质细胞(rMSCs) 进行感染。采用PCR方法对重组腺病毒载体进行鉴定,利用绿色荧光报告基因转染结果,以荧光计数法检测重组腺病毒的滴度。结果酶切鉴定及PCR结果证明hOPG基因重组腺病毒载体成功, 病毒滴度可达2．5×108pfu／ml,具有很强感染能力,结论应用细菌内同源重组法,成功构建了含 hOPG重组腺病毒载体。
关键词
人骨保护素
基因重组腺病毒载体
adEasy系统
大鼠骨髓基质细胞
细菌内同源
重组
法
基因
工程技术
293细胞
PCR方法
载体
质粒
基因
片段
大肠杆菌
骨架质粒
基因
转染
酶切鉴定
病毒
滴度
感染能力
G
基因
hOP
计数法
检测
荧光
Keywords
Osteoporotegerin
Adenovirus
Homogenous recombination
Gene therapy
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
R373 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究
被引量：
2
2
作者
陈俭云
崔海宁
王正文
张克君
机构
海南医学院附属医院普外科
海南医学院肿瘤研究所
青岛大学医学院附属医院普外二科
出处
《海南医学院学报》
CAS
2012年第1期5-8,11,共5页
基金
海南省教育厅高等学校科研项目(Hjkj2010-34)~~
文摘
目的:研究slug基因的RNA干扰重组腺病毒载体(rAAV2-slug-siRNA)对原位胰腺癌移植瘤的转移和血管生成的影响。方法:建立胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型,随机分成3组,每组8只,分为空白对照组(腹腔注射生理盐水)、阴性对照组(腹腔注射rAAV2-GFP)、实验组(腹腔注射rAAV2-slug-siRNA)。10周后利用CO2麻醉法处死裸鼠,观察原位胰腺癌移植瘤的重量,抑瘤率,肝、胃肠、腹腔转移,腹水等情况,及肿瘤细胞微血管密度(MVD)。RT-PCR检测移植瘤的slug mR-NA表达,Western blot检测slug蛋白的表达。结果:胰腺癌细胞株AsPC-1裸鼠原位胰腺癌移植瘤模型建立成功,成瘤率100%。实验组原位胰腺癌移植瘤瘤重明显低于阴性对照组(P<0.05),抑瘤率为70.83%。阴性对照组诱发的裸鼠胰腺癌质地硬,肿块向四周浸润并形成癌性粘连,与阴性对照组相比,实验组腹膜、肝、毗邻脏器转移率和形成腹水率均明显下降(P<0.05)。实验组MVD明显少于阴性对照组(P<0.05),slug mRNA相对表达量(RT-PCR)和slug蛋白相对表达量(Western blot)明显低于阴性对照组(P<0.05)。结论:rAAV2-slug-siRNA可能通过抑制肿瘤血管生成而抑制原位胰腺癌移植瘤转移。
关键词
胰腺癌
slug
基因
的RNA干扰
重组
腺病毒
载体
移植瘤转移
血管生成
Keywords
Pancreatic cancer
slug RNA interference gene recombinant adenovirus vector
Tumor metastasis
Angiogenesis
分类号
R736.7 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人骨保护素基因重组腺病毒的构建及鉴定
王晓军
王爱民
张忠荣
吴思宇
郭庆山
吴军
贺伟峰
汤守营
张全顺
《中国骨质疏松杂志》
CAS
CSCD
2005
1
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职称材料
2
rAAV2-slug-siRNA对原位胰腺癌移植瘤转移和血管生成影响的实验研究
陈俭云
崔海宁
王正文
张克君
《海南医学院学报》
CAS
2012
2
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