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siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
1
作者
田生礼
刘桂云
+3 位作者
郑硕
梁惠卿
刘士德
张建华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1118-1125,共8页
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-M...
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用.
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关键词
RNA干涉
多药耐药相关蛋白1
基因表达沉默
RNA二级结构
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职称材料
题名
siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
1
作者
田生礼
刘桂云
郑硕
梁惠卿
刘士德
张建华
机构
深圳市微生物基因工程重点实验室
中国科学院广州生物医药与健康研究院
深圳华大基因研究院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1118-1125,共8页
基金
Supported by Fundation of Shenzhen Bureau of Science and Technology(No.20008)~~
文摘
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用.
关键词
RNA干涉
多药耐药相关蛋白1
基因表达沉默
RNA二级结构
Keywords
RNA interference
multidrug resistance-associated protein （ MRP1 ）
gene expression silencing
RNA secondry structure
分类号
Q752 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
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被引量
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1
siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
田生礼
刘桂云
郑硕
梁惠卿
刘士德
张建华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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