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hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位
被引量：
1
1
作者
蔡鑫泽
顾卉
+1 位作者
刘彤
李丰
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期816-819,共4页
目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋...
目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。
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关键词
hLMO1
基因
质粒构建
基因表达与定位
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职称材料
天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测
被引量：
1
2
作者
蒋玉萌
赵雪
+3 位作者
王宁
王洪才
张惊宇
杨子超
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期344-346,350,共4页
目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行...
目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒。用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况。结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与Gen-Bank中的人UBE3a cDNA序列一致。经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集。结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础。
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关键词
UBE3a
基因
天使综合征
体外神经元培养
基因表达与定位
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职称材料
题名
hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位
被引量：
1
1
作者
蔡鑫泽
顾卉
刘彤
李丰
机构
中国医科大学附属第一医院中心实验室
中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第11期816-819,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30771128)
文摘
目的构建hLMO1真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法以人胎脑文库cDNA为模板,PCR扩增hLMO1基因cDNA全长,亚克隆至pEGFP表达载体中。将构建的重组质粒进行酶切测序鉴定,并转染到人上皮细胞——HEK293细胞中,提取细胞蛋白进行Western blot检测。利用激光扫描共聚焦显微镜观察pEGFP-hLMO1在HEK293细胞内的定位。结果hLMO1基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP中,酶切鉴定片段为471bp。Western blot检测到了融合蛋白表达,分子量约为45kDa。pEGFR-LMO1在人HEK293细胞核与细胞质均有表达。结论成功构建了hLMO1基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-LMO1蛋白定位于HEK293细胞的细胞质和细胞核内。
关键词
hLMO1
基因
质粒构建
基因表达与定位
Keywords
LIM domain only 1 gene
plasmid construction
gene expression and localization
分类号
R [医药卫生]
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职称材料
题名
天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测
被引量：
1
2
作者
蒋玉萌
赵雪
王宁
王洪才
张惊宇
杨子超
机构
哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第4期344-346,350,共4页
文摘
目的:调取并构建含有人UBE3a基因全长cDNA的真核表达载体pEGFP-UBE3a,采用磷酸钙转染方法将构建的重组质粒在神经元细胞中表达并观察EGFP-UBE3a蛋白的亚细胞定位。方法:采用PCR技术从人胎脑组织cDNA文库中扩增UBE3a基因的ORF片段并进行酶切构建pEGFP-UBE3a的真核表达重组质粒。用磷酸钙转染方法将重组质粒转染入体外培养的神经元细胞,分别在体外培养8天和14天时通过倒置荧光显微镜观察重组蛋白的表达和定位情况。结果:PCR扩增获得人胎脑组织cDNA文库中UBE3a cDNA全长2559 bp,构建真核表达重组质粒pEGFP-UBE3a成功,经DNA测序与Gen-Bank中的人UBE3a cDNA序列一致。经倒置荧光显微镜观察重组质粒的表达情况,结果显示转染重组质粒的细胞中有高水平的EGFP-UBE3a蛋白表达,且UBE3a在早期神经元的细胞质和细胞核中广泛表达,并弥散在轴突和树突,而在成熟神经元细胞核中的表达明显富集。结论:本实验成功构建了pEGFP-UBE3a真核表达质粒,EGFP-UBE3a蛋白在体外培养的神经元细胞中能够有效表达,且随着神经元的成熟逐步向核内富集,为进一步研究UBE3a基因在天使综合征发生发展中的作用奠定了基础。
关键词
UBE3a
基因
天使综合征
体外神经元培养
基因表达与定位
Keywords
UBE3a gene
Angelman syndrome
Cultured neurons in vitro
Gene expression and location
分类号
Q52 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位
蔡鑫泽
顾卉
刘彤
李丰
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
天使综合征致病基因UBE3a在大鼠神经元细胞中的克隆和表达检测
蒋玉萌
赵雪
王宁
王洪才
张惊宇
杨子超
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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职称材料
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