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DNA甲基转移酶在表观遗传学中的应用研究进展
1
作者 周文健 崔晓楠 施威扬 《生物技术通报》 北大核心 2025年第2期30-39,共10页
DNA甲基转移酶是一类在DNA甲基化过程中起到关键作用的酶。在生物体内,DNA甲基转移酶可以将甲基基团添加到核酸分子上,从而引入DNA甲基化修饰,改变遗传表现并调控基因表达。DNA甲基转移酶可以在体外进行融合重组表达,并导入细胞在染色... DNA甲基转移酶是一类在DNA甲基化过程中起到关键作用的酶。在生物体内,DNA甲基转移酶可以将甲基基团添加到核酸分子上,从而引入DNA甲基化修饰,改变遗传表现并调控基因表达。DNA甲基转移酶可以在体外进行融合重组表达,并导入细胞在染色质上引入人为的DNA甲基化修饰。利用这一特性,近年来,科研人员通过对基因组特定位置进行甲基化标记,并结合高通量测序,开发了多种基于DNA甲基转移酶的表观遗传测序技术,其应用包括染色质可及性测量、核小体定位、转录因子印迹和组蛋白修饰检测等。这些技术在获得表观遗传修饰信息的同时也可以获得基因组学信息以及内源性的DNA甲基化信息,因此成为了表观遗传学的重要检测方法。本文介绍了表观遗传修饰研究方法,综述了多种基于DNA甲基转移酶检测表观遗传修饰的测序技术的原理及应用,并对其未来的发展进行了讨论与展望,以期为表观遗传学的研究提供参考。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶 dna甲基化 染色质可及性 dna-蛋白质互作 测序技术
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丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和甲基化转移酶的影响 被引量：16
2
作者 张颖 周明学 +4 位作者 李思耐 任攀 刘卫红 尚菊菊 刘红旭 《世界中医药》 CAS 2017年第2期247-250,253,共5页
目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐... 目的:研究丹红注射液对高脂喂养的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化(As)斑块的干预作用及基因组DNA甲基化水平和DNA甲基化转移酶(DNMTs)的影响。方法:将40只8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周后随机分为模型组、阿托伐他汀钙片(商品名:立普妥)(阳性对照组)、丹红注射液低剂量组和高剂量组(n=10),给予药物腹腔注射6周后。检测其血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平。行HE染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块面积。采用高效液相色谱(HPLC)法检测小鼠血清基因组甲基化水平,采用ELISA法检测各组小鼠血清DNMTs水平。免疫组化染色,图像分析测量小鼠主动脉As斑块内DNMT1的表达。结果:与模型组相比,丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清TG水平明显降低(P<0.01)、丹红注射液高剂量组LDL-C水平明显降低(P<0.01),丹红注射液低剂量组HDL-C水平明显升高(P<0.05),丹红注射液高剂量组小鼠动脉粥样硬化指数显著降低(P<0.01)。丹红注射液高剂量和低剂量组小鼠血清基因组甲基化和DNMTs水平显著降低(P<0.01)。丹红注射液与模型组相比,丹红注射液组As小鼠的校正后主动脉As斑块面积显著降低,以及斑块内DNMT1表达显著降低(P<0.01)。结论:丹红注射液可降低As小鼠血脂水平,减少As斑块面积,其机制可能与降低As小鼠血清基因组甲基化水平和整体DNMTs水平和抑制As小鼠主动脉斑块DNMT1表达有关。 展开更多
关键词 动脉粥样硬化 丹红注射液 dna甲基化 血脂异常 dna甲基化转移酶1
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中华蜜蜂DNA甲基化转移酶Dnmt3基因克隆及表达谱分析 被引量：5
3
作者 刘亭亭 刘俊峰 +4 位作者 王文祥 王欢 王子龙 曾志将 颜伟玉 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期284-290,共7页
为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4... 为探究中华蜜蜂Apis cerana cerana的DNA甲基化模式,本研究采用RT-PCR技术克隆了中华蜜蜂DNA甲基化转移酶3(Dnmt3)基因(GenBank登录号为JQ740768);采用荧光定量PCR检测不同发育时期工蜂(4日龄蛹,1,7和30日龄成年蜂及产卵工蜂)和蜂王(4日龄蛹,1日龄蜂王和产卵蜂王)头部的Dnmt3基因mRNA的表达量。结果表明:该基因cDNA序列全长2277bp,编码758个氨基酸残基,预测的蛋白分子量为88.24kD,等电点为7.85。将中华蜜蜂与其他物种的Dnmt3基因的结构域进行比对,同时将该基因推导的氨基酸序列与其他物种的Dnmt3氨基酸序列进行同源性比对和系统发育分析,发现与西方蜜蜂的Dnmt3序列一致性高达99%。该基因在工蜂和蜂王不同发育时期均有表达,1日龄工蜂与7日龄工蜂中没有显著差异(P>0.05),30日龄工蜂中的表达量显著高于前两者(P<0.05);蜂王蛹中的表达量显著高于工蜂蛹(P<0.05);1日龄的蜂王中的表达量显著高于1日龄的工蜂(P<0.05);产卵工蜂与产卵蜂王中的表达量没有差异(P>0.05)。这种表达情况提示其可能与工蜂劳动分工及蜜蜂卵巢发育有关。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 dna甲基化 dna甲基化转移酶 基因克隆 序列分析 表达谱分析
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急性白血病患者DNA甲基转移酶基因的表达其及临床意义 被引量：6
4
作者 乔淑凯 徐世荣 +1 位作者 郭晓楠 王颖 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第2期260-265,共6页
为了探讨DNA甲基转移酶(DNMT)基因在成人急性白血病(AL)患者中的表达及其与临床预后之间的 关系,对72例AL患者和20例正常人的骨髓采用RT-PCR方法进行DNMT、p15INK4B、mdrl mRNA水平的检测;对 56例AL患者和14例正常人p15INK4B基因启动子... 为了探讨DNA甲基转移酶(DNMT)基因在成人急性白血病(AL)患者中的表达及其与临床预后之间的 关系,对72例AL患者和20例正常人的骨髓采用RT-PCR方法进行DNMT、p15INK4B、mdrl mRNA水平的检测;对 56例AL患者和14例正常人p15INK4B基因启动子区域CpG岛甲基化率,采用甲基化特异性PCR方法进行检测。结 果表明:AL患者组所有3种DNMT表达均明显高于对照组(P<0.01),改用细胞增殖核抗原(PCNA)为内对照, 差别仍有统计学意义。AL患者3种DNMT基因表达之间呈明显正相关,表现为协同的高表达;p15INK4B、mdrl与 DNMT表达呈明显负相关。DNMT因同时阳性患者组完全缓解(CR)率明显高于DNMT基因部分阳性或阴性 患者组(P<0.01)。p15INK4B基因在56例AL患者中,31例(55.4％)完全甲基化,12例(21.4％)部分甲基化,14例 正常人在同一条件下则无1例甲基化。结论:DNMT基因在成人AL患者有异常高表达,其可能通过促使抑癌基因 启动子区域过甲基化,而使其转录失活,从而导致白血病恶性克隆的形成。对于高表达DNMT的AL患者,可能对 化疗更敏感,提示DNMT基因高表达可能是临床预后较好的指标。 展开更多
关键词 急性白血病 dna甲基转移酶 dna甲基转移酶基因
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水稻环阿屯醇C-24甲基转移酶的克隆及功能研究
5
作者 智博洋 雷龙 +2 位作者 黄思曙 刘贤青 罗杰 《热带生物学报》 2025年第1期1-12,共12页
植物甾醇是一类植物中保守的天然化合物,参与植物的生长发育过程,还具有降低胆固醇和预防心血管疾病等药理学功能,对人类健康具有重要价值。目前,水稻(Oryza sativa)中植物甾醇合成相关基因尚未被完全解析,这阻碍了高植物甾醇水稻品种... 植物甾醇是一类植物中保守的天然化合物,参与植物的生长发育过程,还具有降低胆固醇和预防心血管疾病等药理学功能,对人类健康具有重要价值。目前,水稻(Oryza sativa)中植物甾醇合成相关基因尚未被完全解析,这阻碍了高植物甾醇水稻品种的创制进程。为了进一步挖掘水稻中与植物甾醇合成相关的基因,使用液相色谱-质谱联用仪,对533份水稻品种中的3种主要植物甾醇(菜油甾醇、豆甾醇和β-谷甾醇)的含量进行了精确测定。在此基础上,利用代谢组全基因组关联分析定位并克隆了水稻OsSMT1基因。进一步的体外重组蛋白酶活实验和烟草瞬时表达实验,证实了该基因编码的蛋白具有催化植物甾醇生物合成中关键中间体24-亚甲基环阿屯醇合成的活性。 展开更多
关键词 水稻 植物甾醇 甾醇C-24甲基转移酶 代谢组全基因组关联分析
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糖尿病肾病大鼠肝DNA甲基化酶活性及基因组DNA对DNase敏感性的分析 被引量：2
6
作者 汪琛颖 马晴 何忠效 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期810-814,共5页
用 3H标记的 S-腺苷酰 - L -甲硫氨酸 (3H- SAM)作为甲基供体 ,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药“糖微康”治疗的糖尿病肾病大鼠、西药“开博通”治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的 DNA甲基化酶活性 ,并对从以上各组... 用 3H标记的 S-腺苷酰 - L -甲硫氨酸 (3H- SAM)作为甲基供体 ,以同位素掺入法测定了正常大鼠、糖尿病肾病大鼠、中药“糖微康”治疗的糖尿病肾病大鼠、西药“开博通”治疗的糖尿病肾病大鼠的肝细胞的 DNA甲基化酶活性 ,并对从以上各组动物肝组织中提取的基因组 DNA分别进行 DNase 敏感性分析 .结果显示 :糖尿病肾病大鼠肝 DNA甲基化酶活性明显低于正常鼠肝 ,其基因组 DNA对 DNase 敏感性比正常大鼠肝增强 ;中药“糖微康”治疗及西药“开博通”治疗的大鼠的肝 DNA甲基化酶活性均有所回升 ,且中药组更接近正常大鼠对 DNase 的敏感性 . 展开更多
关键词 大鼠 肝 酶活性 基因组dna 敏感性 糖尿病肾病 dna甲基化酶 dnaseⅠ 糖微康 中药 药理机制
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DNA甲基转移酶1与CD11a基因在系统性红斑狼疮患者中mRNA水平的表达 被引量：3
7
作者 王上上 徐金华 施伟民 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期6-9,共4页
目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期... 目的检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase 1,DNMT1)和CD11a基因的表达水平,探讨DNMT1的表达异常在SLE发病中的作用。方法用Real-time PCR方法测定SLE患者缓解期、活动期和正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中DNMT1和CD11a基因的表达水平。结果 SLE活动期患者PBMC中DNMT1的表达水平较对照组(P=0.014)和缓解期组(P=0.030)显著下降;缓解期的DNMT1表达水平与对照组(P=0.264)相比差异无统计学意义;SLE患者DNMT1的表达水平与SLE疾病活动指数(SLE disease activity index,SLEDAI)呈现负相关(P<0.05)。SLE活动期患者PBMC中CD11a的表达水平较对照组(P=0.003)显著升高(P<0.05);缓解期的CD11a表达水平与对照组(P=0.250)和缓解期组(P=0.069)相比差异无统计学意义(P>0.05);SLE患者CD11a的表达水平与SLEDAI呈正相关(P<0.05)。SLE患者DNMT1与CD11a的表达水平无显著相关性(P>0.05)。结论 SLE患者PBMC中DNMT1表达水平的降低可能是造成基因组DNA低甲基化的重要原因,使得CD11a等致病基因过度表达,进而导致SLE发病。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 dna甲基转移酶1 CD11a基因 外周血单个核细胞
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RNA干扰Rbl-2基因调控DNA甲基化转移酶介导心脏干细胞凋亡 被引量：2
8
作者 夏慧苏 余细勇 +4 位作者 林秋雄 李晓红 朱杰宁 麦丽萍 林曙光 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期2306-2310,共5页
目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PC... 目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PCR检测Rbl-2和DNMT-3B mRNA表达水平,Westernblotting检测DNMT-3B蛋白表达和caspase-3活化片段,并以Annexin V-FITC/PI双染色-流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在人心脏干细胞中,转染siRNA后Rbl-2 mRNA表达水平与阴性对照组相比显著降低(P<0.01),同时DNMT-3B mRNA和蛋白表达水平与阴性对照组相比均显著升高(P<0.01),差异显著。与阴性对照组相比,转染Rbl-2 siRNA的人心脏干细胞caspase-3激活,表现为caspase-3活性片段与caspase-3前体的比值显著增高(P<0.01),annexin V阳性细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论:Rbl-2基因在心脏干细胞的生存中具有正性调控作用,抑制其表达能促进心脏干细胞的凋亡,其调控机制与表观遗传学的修饰密切相关。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤样蛋白质2 dna甲基化转移酶 心脏干细胞 细胞凋亡
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RNAi抑制DNA甲基转移酶1的表达对胃癌细胞p16基因的影响 被引量：1
9
作者 赵军 朱磊 赵国海 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2018年第4期395-399,共5页
目的:运用RNAi(RNA interference)抑制胃癌细胞株BGC-823中DNA甲基转移酶1(DNA methylation transferase 1,DNMT1)基因的表达,当DNMT1基因沉默后观察p16基因的表达情况。方法:以DNMT1的mRNA核苷酸序列,构建si RNA质粒1、2、3和阴性对照s... 目的:运用RNAi(RNA interference)抑制胃癌细胞株BGC-823中DNA甲基转移酶1(DNA methylation transferase 1,DNMT1)基因的表达,当DNMT1基因沉默后观察p16基因的表达情况。方法:以DNMT1的mRNA核苷酸序列,构建si RNA质粒1、2、3和阴性对照si RNA质粒b,胃癌细胞培养后经脂质体转染。对DNMT1基因行QPCR检测其mRNA表达水平及Western blot检测其蛋白表达水平,确认其表达下调后筛选出最佳干扰质粒。以同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组、阴性对照组和空白对照组的p16基因的表达情况,以确认抑制DNMT1基因表达后对胃癌细胞p16基因的影响。结果:RNAi可有效抑制胃癌细胞株BGC-823中DNMT1基因的表达。对转染后的胃癌细胞DNMT1基因检测mRNA及蛋白表达情况,结果显示,转染si RNA2的胃癌细胞中DNMT1的表达明显低于其他转染组、阴性对照组及空白对照组(P<0.05),由此筛选出最佳干扰质粒si RNA2。用同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组(siRNA2)、阴性对照组和空白对照组的p16基因表达情况。结果显示,最佳干扰组的mRNA(1.6727±0.2242)及蛋白(0.9227±0.0337)表达水平均高于阴性对照组(1.0025±0.0877)、(0.5440±0.0229)和空白对照组(0.4729±0.0940)、(0.4767±0.0774)(P<0.05)。结论:用RNAi可以抑制胃癌细胞DNMT1基因的表达从而使p16基因去甲基化,使p16基因恢复表达。 展开更多
关键词 胃癌 dna甲基转移酶 RNA干扰 甲基化
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茶树DNA甲基转移酶基因CsDRM2的克隆及表达分析 被引量：7
10
作者 周艳华 曹红利 +4 位作者 岳川 王璐 郝心愿 王新超 杨亚军 《茶叶学报》 2015年第1期1-7,共7页
DNA甲基化作为表观遗传修饰的主要途径之一,能够通过对基因组DNA的修饰参与植物对外界环境胁迫的响应,DNA甲基化需要DNA甲基转移酶的参与。实验室前期研究表明,茶树在冷驯化过程中发生了甲基化反应。通过RACE克隆,获得了茶树中DNA甲基... DNA甲基化作为表观遗传修饰的主要途径之一,能够通过对基因组DNA的修饰参与植物对外界环境胁迫的响应,DNA甲基化需要DNA甲基转移酶的参与。实验室前期研究表明,茶树在冷驯化过程中发生了甲基化反应。通过RACE克隆,获得了茶树中DNA甲基转移酶Cs DRM2基因的c DNA全长序列(NCBI登录号KR057963)。Cs DRM2序列全长2328bp,含1815bp的开放阅读框,编码604个氨基酸,预测蛋白质分子量为67.39 k D,理论等电点(PI)为4.85。生物信息学分析结果显示,茶树Cs DRM2蛋白与芝麻和烟草的亲缘关系最近,Cs DRM2的氨基酸序列与其他植物的DRM2相似性均高于65%。Cs DRM2基因表达分析的结果发现,随着冷驯化的进行,Cs DRM2基因的表达量呈现出增加的趋势,参与茶树冷驯化过程的甲基化响应。 展开更多
关键词 茶树 dna甲基转移酶基因CsDRM2 克隆 表达分析 冷驯化
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DNA甲基转移酶1缺乏通过改善胆固醇积累改善巨噬细胞运动和伤口愈合
11
作者 赵川榕 杨倩茹 +2 位作者 汤润泽 姚伟娟 周菁 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期409-409,共1页
目的皮肤伤口的愈合需要在损伤部位招募巨噬细胞,驱动巨噬细胞运动的机制尚不清楚。方法通过微吸管吸吮实验,发现巨噬细胞中Dnmt1的抑制可以消除LPS刺激的细胞弹性和黏弹性的变化。纳米压痕法测定的细胞刚度表明,LPS以dnmt1依赖的方式... 目的皮肤伤口的愈合需要在损伤部位招募巨噬细胞,驱动巨噬细胞运动的机制尚不清楚。方法通过微吸管吸吮实验,发现巨噬细胞中Dnmt1的抑制可以消除LPS刺激的细胞弹性和黏弹性的变化。纳米压痕法测定的细胞刚度表明,LPS以dnmt1依赖的方式增加了胆固醇的细胞积累,胆固醇含量决定细胞刚度和运动性。脂质组学分析表明,Dnmt1抑制改变了细胞脂质稳态,并将抑制剂封装在热敏PF-127水凝胶中,将其作用于全层皮肤伤口探讨伤口愈合机制。结果和结论在这项研究中,骨髓特异性Dnmt1缺失增强了伤口修复。本研究发现,用LPS处理细胞增加了巨噬细胞的弹性模量k1(但没有k2)和黏性模量,表明细胞硬化的表型。LPS诱导的巨噬细胞硬化是由Dnmt1介导的。本研究验证了膜胆固醇含量和细胞刚度之间的相关性。通过使用经典的方法来增加或减少膜胆固醇,结果表明,添加胆固醇增加细胞硬度。本研究利用脂质组学分析定量研究胆固醇酯组分,有趣的是,与WT巨噬细胞相比,Dnmt1缺失降低了游离胆固醇含量,增加了胆固醇酯。此外,在热敏PF-127水凝胶中,avasimibe和probucol联合处理,可抑制Dnmt1KO小鼠的局部伤口愈合率。本研究揭示了Dnmt1依赖于巨噬细胞机械特性和相关趋化运动的表观遗传机制,表明Dnmt1既是疾病的标志,也是伤口愈合治疗干预的潜在靶点。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶1 皮肤伤口 伤口愈合 巨噬细胞 胆固醇酯 治疗干预 趋化运动 游离胆固醇
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DNA甲基转移酶在缺氧/缺血预处理DNA中的神经保护作用研究
12
作者 李瑞学 谢雅彬 邵国 《中国比较医学杂志》 北大核心 2024年第12期111-116,共6页
低氧/缺血预适应(hypoxic/ischemic preconditioning,H/IPC)可诱导内源性保护机制使神经细胞增加对低氧/缺血的耐受,这种保护机制是细胞在生死抉择时基因表达的变化。DNA甲基化作为基因表达调控的重要机制,在低氧/缺血耐受中发挥着至关... 低氧/缺血预适应(hypoxic/ischemic preconditioning,H/IPC)可诱导内源性保护机制使神经细胞增加对低氧/缺血的耐受,这种保护机制是细胞在生死抉择时基因表达的变化。DNA甲基化作为基因表达调控的重要机制,在低氧/缺血耐受中发挥着至关重要的作用。DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)通过调控DNA甲基化水平影响基因表达,从而对神经保护产生重要作用。因此,DNMTs在低氧/缺血预适应诱导的神经保护中具有重要功能。本文对DNMTs在此过程中的作用进行了综述,为以DNMTs为靶点的神经保护研究提供了一定思路。 展开更多
关键词 神经保护 低氧/缺血预适应 dna甲基化转移酶
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黑杨DNA甲基转移酶基因片段的分离及表达分析
13
作者 陈成彬 王彬 +2 位作者 胡宝全 王春国 宋文芹 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2013年第F10期87-95,共9页
利用同源序列克隆技术，分离了三倍体黑杨中4类（MET、CMT、DRM、DNMT2）8个特异甲基转移酶片段，其中，5个片段与二倍体同源性达到100％，3个片段发生了剪切变化。通过实时定量PCR技术检测8个甲基转移酶在不同倍性、不同部位、不同生... 利用同源序列克隆技术，分离了三倍体黑杨中4类（MET、CMT、DRM、DNMT2）8个特异甲基转移酶片段，其中，5个片段与二倍体同源性达到100％，3个片段发生了剪切变化。通过实时定量PCR技术检测8个甲基转移酶在不同倍性、不同部位、不同生长时期间表达模式的差异，通过对5个不同部位基因表达的检测，表明不同倍性黑杨在相同的部位可能由不同种类的甲基转移酶参与主要的甲基化调控。通过分析植株从分化早期的茎尖到分化晚期的叶和茎整个生长过程中基因表达的情况，发现随着时间的推移，MET家族（PnDl和PnD2）基因可能是拮抗调节，CMT（PnD3和PnD4）家族基因可能是协同调节；而隶属于DNMT2家族的PnD6基因在各部位的表达都比较弱，唯独三倍体茎尖有很高的表达。由于茎尖是生长旺盛的部位，PnD6有可能是影响三倍体速生的重要基因。这些结果可能暗示，DNA甲基转移酶基因可能参与了黑杨发育过程中叶片形态发生的过程。 展开更多
关键词 黑杨 多倍体 dna甲基转移酶 表达差异
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DNA甲基化转移酶hsdM基因对维氏气单胞菌运动性的影响
14
作者 陈婷 李宏 +4 位作者 王丹 唐燕琼 唐鸿倩 马香 刘柱 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期28-32,共5页
为探究I型RM系统甲基转移酶基因hsdM对维氏气单胞菌运动性的影响,研究构建hsdM基因敲除的维氏气单胞菌突变株ΔhsdM,并探究该基因敲除对维氏气单胞菌生长、运动能力及鞭毛基因表达的影响。生长曲线测定结果表明:ΔhsdM菌株的生长速率在... 为探究I型RM系统甲基转移酶基因hsdM对维氏气单胞菌运动性的影响,研究构建hsdM基因敲除的维氏气单胞菌突变株ΔhsdM,并探究该基因敲除对维氏气单胞菌生长、运动能力及鞭毛基因表达的影响。生长曲线测定结果表明:ΔhsdM菌株的生长速率在对数期生长后期开始缓慢降低,但总体生长水平与野生型基本一致;平板运动实验结果显示,hsdM基因敲除后,维氏气单胞菌运动性极显著下降;RT-qPCR结果表明,ΔhsdM菌株部分鞭毛基因表达显著下调。探究hsdM基因敲除对细菌表观性状的调节作用,为进一步探究N6-甲基腺嘌呤(6mA)甲基化调节基因表达的机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 dna甲基化 甲基转移酶 维氏气单胞菌 细菌运动性
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DNA甲基转移酶1基因沉默对HT-29细胞凋亡的影响
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作者 王居峰 刘莺 +1 位作者 刘文静 何素英 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第5期770-773,共4页
目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响。方法:HT-29细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组及DNMT1siRNA组,后2细胞转染对照siRNA和DNMT1siRNA,24h后,通过RT-PCR和Westernblot观察3组细胞DNMT1、Caspase-3/9... 目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响。方法:HT-29细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组及DNMT1siRNA组,后2细胞转染对照siRNA和DNMT1siRNA,24h后,通过RT-PCR和Westernblot观察3组细胞DNMT1、Caspase-3/9、bcl-2及BaxmRNA和蛋白表达的变化,通过流式细胞术分析HT-29细胞凋亡,并测定Caspase-3/9的活性。结果:DNMT1siRNA组中DNMT1mRNA和蛋白的相对表达量为(0.273±0.016)和(1.127±0.019),低于未处理组[分别为(1.729±0.023)和(2.741±0.031)]和对照siRNA组[分别为(1.751±0.018)和(2.673±0.027)](F分别为5822.683和3656.560,P均<0.001)。DNMT1siRNA组细胞凋亡率为(22.65%±1.67%),高于未处理组(7.92%±1.29%)和对照siRNA组(8.13%±1.21%)(F=108.460,P<0.001)。DNMT1siRNA组细胞的Caspase-3/9活性[分别为(2671.83±57.63)和(2187.71±68.35)]高于未处理组[(196.47±16.73)和(511.35±34.90)]和对照siRNA组[(215.29±14.38)和(534.78±41.70)](F分别为4790.975和1089.891,P均<0.001)。与未处理组和对照组相比DNMT1siRNA组Bcl-2mR-NA和蛋白的表达降低,但Caspase-3/9和BaxmRNA和蛋白的表达升高(P<0.05)。结论:DNMT1的下调能诱导HT-29细胞凋亡,其可能的作用机制与caspase-3/9、bcl-2和bax表达的变化密切相关。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶1 结肠癌 HT-29细胞 细胞凋亡 基因沉默
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DNA甲基转移酶3a与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的分子机制
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作者 周鑫 范昊 +4 位作者 王安 秦嘉沛 白怡冰 马志强 胡毅 《解放军医学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第12期1426-1436,共11页
目的探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法收集2009年5月-2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科行手术治疗的47例肺鳞癌患者进行回顾性分析。采用免疫组织化学染色检测DNM... 目的探讨DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)表达与肺鳞癌预后的相关性及其介导肺鳞癌进展的潜在分子机制。方法收集2009年5月-2014年1月于空军军医大学第二附属医院胸外科行手术治疗的47例肺鳞癌患者进行回顾性分析。采用免疫组织化学染色检测DNMT3a在肺鳞癌组织与癌旁组织中的表达,根据肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分中位数分为DNMT3a高表达组(n=25)与DNMT3a低表达组(n=22),结合临床病理信息与公共生物信息学数据库进行预后相关性分析。为探索DNMT3a介导肺鳞癌进展的分子机制,采用慢病毒感染法构建DNMT3a过表达的肺鳞癌H1703细胞系,设置DNMT3a过表达组与对照组,采用功能表型实验检测两组细胞增殖、迁移的差异。构建DNMT3a过表达的裸鼠皮下肿瘤异种移植模型,设置DNMT3a过表达组与对照组(n=3),观察两组皮下移植瘤的生长。Western blotting检测两组细胞与两组皮下移植瘤中相关蛋白的表达。功能回复实验先采用c-Myc抑制剂(10058-F4)处理DNMT3a过表达细胞,EdU增殖染色实验检测细胞增殖;再采用RNAi-锌指E盒结合同源框1(ZEB1)慢病毒感染DNMT3a过表达细胞敲低ZEB1表达,Transwell迁移实验检测细胞迁移。采用DNMT特异性抑制剂(SGI-1027)处理DNMT3a过表达组与对照组细胞,观察抑制DNMT3a后的细胞增殖及迁移。结果免疫组化染色结果显示,肺鳞癌中DNMT3a免疫组化评分明显高于癌旁组织(P<0.0001)。DNMT3a高表达与N分期、TNM分期、肿瘤分化程度等密切相关(P<0.05或P<0.01),DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素(P<0.05)。功能表型实验表明,DNMT3a过表达组的克隆形成数、Edu阳性细胞比例、细胞迁移率、细胞迁移数均高于对照组(P<0.05)。DNMT3a过表达组裸鼠皮下移植瘤体积与重量明显高于对照组(P<0.001)。Western blotting检测结果显示,DNMT3a过表达组细胞与皮下移植瘤的c-Myc、ZEB1蛋白表达量明显高于对照组(P<0.05)。功能回复实验表明,10058-F4处理DNMT3a过表达组细胞EdU阳性细胞比例明显降低(P<0.05);慢病毒敲低ZEB1后,DNMT3a过表达组细胞迁移数明显减少(P<0.05),而DNMT3a蛋白的表达则无明显变化(P>0.05)。此外,SGI-1027抑制DNMT3a表达后,DNMT3a过表达组与对照组克隆形成数及细胞迁移率均明显降低(P<0.05)。结论DNMT3a高表达是肺鳞癌患者预后不良的独立危险因素;DNMT3a可能通过上调c-Myc表达增强肺鳞癌的增殖能力,上调ZEB1表达增强肺鳞癌的迁移能力。 展开更多
关键词 dna甲基转移酶3a 肺鳞状细胞癌 预后 细胞增殖 细胞迁移
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球孢白僵菌DNA甲基转移酶基因Dim-2的克隆及其表达分析 被引量：1
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作者 汪超 谢翎 黄勃 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2014年第6期736-742,共7页
本研究运用RACE技术,从球孢白僵菌中克隆出完整的DNA甲基转移酶基因Dim-2的编码区序列。该基因c DNA全长4021 bp,5′端非翻译区283 bp,3′端非翻译区303 bp,开放阅读框(ORF)3429 bp,编码1142个氨基酸。蛋白理论分子量为128 k D,理论等... 本研究运用RACE技术,从球孢白僵菌中克隆出完整的DNA甲基转移酶基因Dim-2的编码区序列。该基因c DNA全长4021 bp,5′端非翻译区283 bp,3′端非翻译区303 bp,开放阅读框(ORF)3429 bp,编码1142个氨基酸。蛋白理论分子量为128 k D,理论等电点为6.13。结构域分析显示,该基因编码蛋白含有1个BAH结构域和合成5-甲基胞嘧啶的活性区域。Real-time PCR与HPLC检测表明,球孢白僵菌DNA甲基化程度会随着其生长发育的变化而不断改变。结果显示,球孢白僵菌Dim-2基因的转录表达量与基因组DNA的5-甲基胞嘧啶百分含量在菌体培养初始产孢阶段(即培养第7 d),均出现了1个低谷。这可能意味着球孢白僵菌Dim-2基因所引起的DNA甲基化与其生长发育之间具有内在的联系。本研究将为进一步探索DNA甲基化在虫生真菌生长发育中具体功能机制奠定基础。 展开更多
关键词 球孢白僵菌 dna甲基转移酶 Dim-2基因 dna甲基化 表观遗传学
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5-Aza-CdR通过抑制大鼠原代肾肌成纤维细胞Epo基因启动子高甲基化逆转PMT
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作者 袁玲 王蕾 +2 位作者 程鹏 江茜 崔晓雪 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第1期79-85,共7页
目的观察去甲基化剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对大鼠原代肾肌成纤维细胞的周细胞肌成纤维细胞转化(pericyte-myofibroblast transition,PMT)的影响。方法取5-Aza-CdR 250 ng/mL处理大鼠原代肾肌成纤维细胞... 目的观察去甲基化剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对大鼠原代肾肌成纤维细胞的周细胞肌成纤维细胞转化(pericyte-myofibroblast transition,PMT)的影响。方法取5-Aza-CdR 250 ng/mL处理大鼠原代肾肌成纤维细胞72 h,采用焦磷酸测序方法检测促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)基因启动子甲基化程度,采用免疫荧光与Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMΑ)、血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptorβ,PDGFRβ)和DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a,Dnmt3a)的蛋白表达水平,并检测细胞上清液EPO水平。结果与对照组相比,5-Aza-CdR处理能显著降低Dnmt3a的表达和Epo启动子高甲基化水平,并随之降低了肌成纤维细胞中α-SMA的表达及α-SMA与PDGFRβ的表达比例,同时,5-Aza-CdR处理提高了细胞上清液中EPO的水平。结论5-Aza-CdR可通过抑制大鼠原代肾肌成纤维细胞Epo启动子高甲基化逆转PMT。 展开更多
关键词 周细胞-肌成纤维细胞转化 EPO dna甲基化 5-氮杂-2’脱氧胞苷 dna甲基转移酶
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家蚕不同化性品系间DNA甲基转移酶基因转录特性及胚胎早期甲基化水平差异分析 被引量：1
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作者 胡超超 朱娟 +4 位作者 陈艳花 王梅仙 鲁月 蒋涛 沈兴家 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期30-36,共7页
DNA甲基化修饰参与昆虫胚胎发育。家蚕是典型的胚胎滞育昆虫,为探明家蚕DNA甲基化在胚胎发育及滞育调控中的作用,以不同化性家蚕品系为材料,包括一化性品系安康4号(V^(1)AK4)和鲁一(V^(1)Lu1)、二化性品系秋丰(V^(2)QF)和P50(V^(2)P50)... DNA甲基化修饰参与昆虫胚胎发育。家蚕是典型的胚胎滞育昆虫,为探明家蚕DNA甲基化在胚胎发育及滞育调控中的作用,以不同化性家蚕品系为材料,包括一化性品系安康4号(V^(1)AK4)和鲁一(V^(1)Lu1)、二化性品系秋丰(V^(2)QF)和P50(V^(2)P50)、有滞育多化性品系四海(V^(3)SH)、无滞育多化性品系Nistari(V^(3)Nistari),利用qRT-PCR技术分析家蚕甲基化酶基因BmDnmt在家蚕不同化性品系的表达水平,并利用免疫荧光法测定胚胎发育早期DNA甲基化水平。结果显示,在胚胎发育早期BmDnmt1和BmDnmt2在V^(1)AK4、V^(2)P50和V^(3)Nistari品系中表达水平较高,在V^(3)Nistari品系中BmDnmt1的表达水平显著高于V^(3)SH品系;在幼虫期,BmDnmt1和BmDnmt2在多化性家蚕卵巢或精巢组织中表达水平显著高于二化性家蚕,且它们在V^(3)Nistari中的表达水平显著高于V^(3)SH。采用免疫荧光法测定子代蚕卵的DNA甲基化水平,发现不同化性品系中DNA甲基化水平整体呈上升趋势,在产卵后96 h,多化性品系的DNA甲基化水平显著高于二化性品系。以上结果表明,BmDnmt在家蚕不同化性品系胚胎发育早期的表达水平和DNA甲基化水平均存在差异,推测家蚕幼虫期卵巢组织及胚胎发育早期的DNA甲基化水平与家蚕滞育性及化性有关联。研究结果为进一步解析DNA甲基化在家蚕胚胎发育和滞育中的调控机制提供了新的见解。 展开更多
关键词 家蚕 dna甲基化 dna甲基转移酶 化性 滞育 胚胎发育
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猪DNA甲基转移酶基因家族进化分析
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作者 龚文滔 潘向春 +4 位作者 蔡佳丽 王祎菲 李加琪 张哲 袁晓龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第9期3283-3291,共9页
【目的】探究猪DNA甲基转移酶(DNMT)基因家族的基因特性及表达模式。【方法】利用生物信息学方法鉴定猪全基因组范围的DNMT基因家族,并对其染色体定位、理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位、基因结构、保守基序、系统进化关系、共线性关... 【目的】探究猪DNA甲基转移酶(DNMT)基因家族的基因特性及表达模式。【方法】利用生物信息学方法鉴定猪全基因组范围的DNMT基因家族,并对其染色体定位、理化性质、蛋白质结构、亚细胞定位、基因结构、保守基序、系统进化关系、共线性关系和基因表达模式进行分析。【结果】共鉴定得到5个猪DNMT基因家族成员:Pig DNMT 1、Pig DNMT 2、Pig DNMT3、Pig DNMT4和Pig DNMT5,分别位于2、3、13、14、17号染色体上。猪DNMT基因家族进化树分析发现,PigDNMT1和PigDNMT4、PigDNMT2和PigDNMT5的亲缘关系较近。PigDNMT2和PigDNMT5具有相同数量和排列顺序的保守基序,但在基因结构上差异较大。系统进化树结果揭示,猪、人、小鼠和牛的DNMT基因家族分为4个亚族,其中猪与牛的DNMT基因家族亲缘关系更近。基因共线性分析显示,猪与人、小鼠、牛之间都具有4对直系同源DNMT基因,表明4个物种的DNMT基因间存在较强的共线性关系。猪DNMT家族蛋白长度在228~1706个氨基酸之间,分子质量在26133.32~192267.80 u之间,等电点在6.00~9.06之间。二级结构预测分析结果显示,猪DNMT蛋白主要由无规则卷曲组成。亚细胞定位分析发现,5个猪DNMT蛋白定位于细胞核。母猪性腺轴的转录组数据分析发现,PigDNMT1在下丘脑、垂体和卵巢组织中随着初情启动过程而展现出不同的表达模式。【结论】本研究在猪基因组上共鉴定出5个DNMT基因,并发现性腺轴组织中的PigDNMT1在初情启动过程中呈现出不同的表达模式,为解析猪DNMT基因家族功能提供一些参考。 展开更多
关键词 猪 dna甲基转移酶(DNMT) 系统进化 表达分析
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