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高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法
被引量:
20
1
作者
王慧娜
初志战
+2 位作者
马兴亮
李日清
刘耀光
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期1200-1205,共6页
制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2~5mg)双子叶植物叶片...
制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2~5mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒直径4mm或3mm的合金珠和150μL制备缓冲液,盖上硅橡胶盖,在涡旋器或震动研磨器震动2~4min破碎组织。此方法获得的粗制gDNA样品浓度约2~4ngμL?1。用96针复制器或多通道移液器转移约0.5~1.0μL的gDNA溶液到96孔PCR板的反应液中,利用各种类型的PCR标记(简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测。此方法制备的gDNA模板也适合于较大DNA片段(>1kb)的扩增。本方法的关键是控制好在一定溶液量中破碎合适量的叶片,以及不要加入过量的gDNA溶液,以免带入过多的杂质抑制PCR效果。这种从材料种植、制备gDNA、转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的快速、高通量、低成本的方法特别适合大量植物样品的规模化基因型检测。
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关键词
基因组dna制备
PCR
基因
分型
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职称材料
采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨
被引量:
1
2
作者
宋君
张容
+3 位作者
宋昭彬
郭灵安
王东
雷绍荣
《中国测试技术》
CAS
2008年第1期125-127,共3页
AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难。文中以齐口裂腹鱼为研究对...
AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难。文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索。结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L。银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰。
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关键词
AFLP
基因组dna制备
条件优化
银染
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职称材料
野生稻细胞核DNA提取的研究
被引量:
3
3
作者
侯思名
张薇
+4 位作者
白现广
钟巧芳
高月芬
黄兴奇
程在全
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2009年第5期1215-1218,共4页
药用野生稻是中国最具利用价值的野生稻资源之一,具有许多优良的性状和有利基因,是改良栽培稻培育新品种的宝贵基因库,而其CC基因组的优良基因有望以大片段形式通过B IBAC等载体转化到栽培稻中。B IBAC文库不仅能作为大片段基因组文库...
药用野生稻是中国最具利用价值的野生稻资源之一,具有许多优良的性状和有利基因,是改良栽培稻培育新品种的宝贵基因库,而其CC基因组的优良基因有望以大片段形式通过B IBAC等载体转化到栽培稻中。B IBAC文库不仅能作为大片段基因组文库的载体,而且能通过根癌农杆菌介导将克隆片段导入植物基因组直接进行转化,可用于筛选分离基因等研究。如何获得基因组DNA大片段非常关键,本研究采取琼脂糖包埋基因组的方法获得大片段DNA,并对其中的一些步骤进行了优化,为构建药用野生稻B IBAC文库打下了很好的基础,值得在其它植物类似研究中参考。
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关键词
药用野生稻
BIBAC载体
基因组
大片段
dna
制备
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职称材料
题名
高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法
被引量:
20
1
作者
王慧娜
初志战
马兴亮
李日清
刘耀光
机构
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室/华南农业大学生命科学学院
出处
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第7期1200-1205,共6页
基金
国家重点基础研究发展计划(973计划)项目(2011CB100203)资助
文摘
制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2~5mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒直径4mm或3mm的合金珠和150μL制备缓冲液,盖上硅橡胶盖,在涡旋器或震动研磨器震动2~4min破碎组织。此方法获得的粗制gDNA样品浓度约2~4ngμL?1。用96针复制器或多通道移液器转移约0.5~1.0μL的gDNA溶液到96孔PCR板的反应液中,利用各种类型的PCR标记(简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测。此方法制备的gDNA模板也适合于较大DNA片段(>1kb)的扩增。本方法的关键是控制好在一定溶液量中破碎合适量的叶片,以及不要加入过量的gDNA溶液,以免带入过多的杂质抑制PCR效果。这种从材料种植、制备gDNA、转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的快速、高通量、低成本的方法特别适合大量植物样品的规模化基因型检测。
关键词
基因组dna制备
PCR
基因
分型
Keywords
Genomic
dna
preparation
PCR
Genotyping
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
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职称材料
题名
采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨
被引量:
1
2
作者
宋君
张容
宋昭彬
郭灵安
王东
雷绍荣
机构
四川省农业科学院分析测试中心
中国医学科学院输血研究所
四川大学生命科学学院
出处
《中国测试技术》
CAS
2008年第1期125-127,共3页
文摘
AFLP(选择性扩增片断长度多态性)指纹技术被认为是当今最有效的DNA指纹分析技术之一,但是由于该技术操作流程较长,对模板DNA质量要求较高以及PCR反应成分等变数条件的影响,要获得高清晰的DNA指纹图谱比较困难。文中以齐口裂腹鱼为研究对象,对AFLP的分析条件作了一定的探索。结果表明:基因组DNA必须是高纯度、高分子量;酶切充分;PCR反应最佳条件为:引物E-XYZ,M-XYZ在体系中的浓度分别为1ng/mL,5ng/mL;dNTPs浓度为0.2mmol/L;MgCl2浓度为1.9mmol/L。银染时在NaOH条件下显色比在传统银染法中的Na2CO3条件下显色,图谱背景更干净,条带更清晰。
关键词
AFLP
基因组dna制备
条件优化
银染
Keywords
AFLP
Genome
dna
preparation
Condition optimization
Sliver-stain
分类号
Q523 [生物学—生物化学]
Q959.483 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
野生稻细胞核DNA提取的研究
被引量:
3
3
作者
侯思名
张薇
白现广
钟巧芳
高月芬
黄兴奇
程在全
机构
云南省农科院生物技术与种质资源研究所
昆明学院生命科学与技术系
云南大学生命科学学院
云南南省陆良县蚕桑站
出处
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2009年第5期1215-1218,共4页
基金
国家自然科学基金项目(NSFC30660090)
文摘
药用野生稻是中国最具利用价值的野生稻资源之一,具有许多优良的性状和有利基因,是改良栽培稻培育新品种的宝贵基因库,而其CC基因组的优良基因有望以大片段形式通过B IBAC等载体转化到栽培稻中。B IBAC文库不仅能作为大片段基因组文库的载体,而且能通过根癌农杆菌介导将克隆片段导入植物基因组直接进行转化,可用于筛选分离基因等研究。如何获得基因组DNA大片段非常关键,本研究采取琼脂糖包埋基因组的方法获得大片段DNA,并对其中的一些步骤进行了优化,为构建药用野生稻B IBAC文库打下了很好的基础,值得在其它植物类似研究中参考。
关键词
药用野生稻
BIBAC载体
基因组
大片段
dna
制备
Keywords
Oryza officinalis
BIBAC vector
Extraction of genome large fragment
分类号
S511.9 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法
王慧娜
初志战
马兴亮
李日清
刘耀光
《作物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
20
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
采用AFLP分析齐口裂腹鱼DNA指纹的技术探讨
宋君
张容
宋昭彬
郭灵安
王东
雷绍荣
《中国测试技术》
CAS
2008
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
野生稻细胞核DNA提取的研究
侯思名
张薇
白现广
钟巧芳
高月芬
黄兴奇
程在全
《西南农业学报》
CSCD
北大核心
2009
3
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职称材料
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