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传染性法氏囊病病毒中国超强毒株Harbin-1基因组A节段全长cDNA的连接 被引量:1
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作者 黄广明 姜丽琼 +1 位作者 孙安赛 袁克湖 《动物医学进展》 CSCD 2002年第3期51-52,共2页
本研究利用单酶切位点 Sal消化传染性法氏囊病病毒中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段的上段和下段克隆 p GEM-T-P1 2和p GEM-T-P3 4,经过去磷酸化以后 ,再用连接酶将上下段连接起来。酶切和测序鉴定结果表明 ,我们得到了全长的 IBDV基... 本研究利用单酶切位点 Sal消化传染性法氏囊病病毒中国超强毒株 Harbin-1基因组 A节段的上段和下段克隆 p GEM-T-P1 2和p GEM-T-P3 4,经过去磷酸化以后 ,再用连接酶将上下段连接起来。酶切和测序鉴定结果表明 ,我们得到了全长的 IBDV基因组 A节段编码区c DNA克隆。本研究结果为以后的工作奠定了基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病病毒 中国超强毒株 Harbin-1基因组 a节 全长cdna 连接
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鸡传染性法氏囊病病毒(ZJ2000)基因组B节段全长的克隆及其毒力位点的分析预测 被引量:2
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作者 魏永伟 郑江涛 +2 位作者 王连胜 李龙 于涟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期252-256,共5页
将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9~10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登... 将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9~10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登录的IBDV基因组B节段进行了大量分析,发现B节段的5′-NCR存在1个基因高突变区,并且ZJ2000株的5′-NCR可形成独特的二级结构。经过对VP1一级结构的大量分析,筛选出B节段中17个可能对IBDV毒力产生影响的候选毒力位点,并在此基础上又对这些位点氨基酸的特性进行统计分析,进一步探讨了这些位点对VP1功能影响的可能性,为深入研究IBDV基因组B节段对其毒力的影响作了有益的探索。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 基因组B全长 克隆
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传染性法氏囊病病毒浙江分离株(TL2004)A节段cDNA的克隆及序列分析
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作者 郑江涛 魏永伟 +1 位作者 刘岩 于涟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期658-662,667,共6页
用Long accurate RT-PCR(LA-PCR)的方法一步法克隆了IBDV TL2004基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明:克隆的A节段全长3260个核苷酸,包括5′、3′的非编码区(NCRs)和2个重叠的开放阅读框(ORF1和ORF2),与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒... 用Long accurate RT-PCR(LA-PCR)的方法一步法克隆了IBDV TL2004基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明:克隆的A节段全长3260个核苷酸,包括5′、3′的非编码区(NCRs)和2个重叠的开放阅读框(ORF1和ORF2),与来自GenBank IBDV血清Ⅰ型毒株核苷酸序列的同源性高达95.2%~99.2%。二级结构分析表明,在5′-NCRs和3′-NCRs各存在一个大型的颈环发夹结构。ORF1编码1 012个氨基酸的VP2-VP3-VP4,在氨基酸水平上VP2、VP3、VP4与参比Ⅰ型毒株的同源性分别达96.7%~99.6%、94.2%~99.2%、96.7%~99.6%。PRF2编码145个氨基酸的VP5,与参比Ⅰ型毒株的同源性高达95.9%~99.3%。TL2004在第2个小亲水区内279位氨基酸由S替代了N、290位M替代了L,这2个突变可能是IBDV抗原漂变的原因。分子系统进化树分析表明,TL2004与欧洲Cu21株和中国JD1、Harbin株的关系较近,而与欧洲、香港、日本的超强毒株和美国的变异株相对较远。 展开更多
关键词 IBDV 基因组a节段全长cdna 克隆 序列分析
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