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罗非鱼无乳链球菌强毒株基因组表达文库的构建及鉴定 被引量:5
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作者 刘志刚 可小丽 +5 位作者 卢迈新 方伟 王淼 朱华平 高风英 曹建萌 《南方水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期34-40,共7页
为了筛选罗非鱼(Oreochromis niloticus)无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)在鱼体内特异诱导表达基因,该研究构建了罗非鱼无乳链球菌强毒株Hod-1的基因组表达文库。采用Sau3AI对无乳链球菌菌株Hod-1基因组DNA进行不完全酶切,... 为了筛选罗非鱼(Oreochromis niloticus)无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)在鱼体内特异诱导表达基因,该研究构建了罗非鱼无乳链球菌强毒株Hod-1的基因组表达文库。采用Sau3AI对无乳链球菌菌株Hod-1基因组DNA进行不完全酶切,回收大小为0.5—2.0kb的DNA片段,并与经BamHI单酶切且去磷酸化的pET-28a/b/c表达载体连接,转化表达宿主菌BL21(DE3)。结果显示,所构建的无乳链球菌菌株Hod.1基因组表达文库含1.024×10^5个克隆,远大于覆盖无乳链球菌全基因组所需的最小库容量(45579个)。PCR检测结果显示重组子中外源片段的插入率为94%,插入片段大小为0.5—2.0kb,且分布均匀,测序结果显示插入序列与GenBank中无乳链球菌基因组序列同源性高达99%以上。结果表明该研究成功构建了罗非鱼无乳链球菌的基因组表达文库,该文库可用于无乳链球菌在罗非鱼体内诱导表达基因的筛选。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 无乳链球菌 基因组表达文库
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猪传染性胸膜肺炎放线杆菌基因组表达文库的构建及对小鼠的免疫保护作用研究
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作者 刘慧芳 周媛媛 +8 位作者 刘思国 宫强 王勇 刘建东 王春来 常月红 迟磊 赵昆 云孟克 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期153-156,共4页
本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp~3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有106个... 本研究应用限制性内切酶MboⅠ消化胸膜肺炎放线杆菌血清7型的基因组DNA,回收500bp~3000bp的片段,插入到真核表达载体pCDNA3.1(+)的BamHⅠ酶切位点构建重组质粒,电转化大肠杆菌TG1,获得胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库(大约含有106个克隆)。将该文库随机分为10个亚文库(10个Clone pool),分别提取每个亚文库的重组质粒免疫小鼠(n=130只),免疫剂量为100μg,免疫3次后以1型胸膜肺炎放线杆菌进行攻毒,通过相对保护率、肺组织荷菌数、病理组织学3个指标测定其对小鼠的免疫保护作用。试验结果表明,Clone pool3、Clone pool2、Clone pool6和Clone pool7的免疫效果明显优于其他免疫组,尤其是Clone pool3的免疫保护效果最佳。本研究成功构建了7型胸膜肺炎放线杆菌的基因组表达文库,从而为筛选和获得新的保护性抗原基因奠定基础。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 基因组表达文库 构建 保护作用
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绵羊肺炎支原体基因组DNA表达文库的构建与鉴定 被引量:2
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作者 陈诚 乔军 +5 位作者 孟庆玲 刘田莉 胡政香 马玉 才学鹏 陈创夫 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期646-651,共6页
为了筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)免疫原性相关基因,提取MO基因组DNA,利用限制性内切酶Sau3AⅠ对基因组DNA进行酶切,回收500-3 000bp的基因组DNA片段,用T4DNA连接酶将其与经BamHⅠ酶切并去磷酸化处理的pET28a/b/... 为了筛选绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)免疫原性相关基因,提取MO基因组DNA,利用限制性内切酶Sau3AⅠ对基因组DNA进行酶切,回收500-3 000bp的基因组DNA片段,用T4DNA连接酶将其与经BamHⅠ酶切并去磷酸化处理的pET28a/b/c载体连接,然后转化至DH5α感受态细胞,通过菌液PCR对插入到载体中的片段大小及插入率进行鉴定。从转化的平板上提取质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,构建MO基因组表达文库。随机挑选单菌落,用pET28a/b/c通用引物进行PCR鉴定,结果显示插入片段大小为300-2 000bp,插入率为90%,表明成功构建了MO基因组表达文库,该文库的构建为进一步筛选MO相关的免疫性基因及潜在候选疫苗靶点奠定前期基础。 展开更多
关键词 MO 基因组表达文库 构建 鉴定
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