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题名蚕微卫星DNA体外自我扩增条件初步研究
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作者
李关荣
廖芳
鲁成
向仲怀
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机构
西南农业大学农学与生命科学学院
西南农业大学蚕学与生物技术学院
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出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
2003年第3期231-235,共5页
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文摘
采用一种类似PCR的基因组自我引发PCR(GSP PRC)法 ,初步研究了家蚕、野桑蚕、天蚕、蓖麻蚕和柞蚕的微卫星DNA的体外基因组自我引发PCR扩增条件。质量浓度为 10 0mg/L的基因组DNA经 10 0℃变性 15min后 ,与等量相同浓度未变性的DNA混合作为模板 ,在 80 μL扩增体系 [含 0 2mmol/LdNTPs、5 0mmol/LKCl、10mmol/LTris HCl(pH 9 0 )、4mmol/LMgCl2 、1 2 5UTaqpolymerase]中加入 1μL此混合模板 ,在92℃、1min→ 5 5℃、2min→72℃、2min ,30～ 90次累积循环的扩增条件下 ,成功地得到了PCR产物。反应体系中 ,基因组DNA的适宜质量浓度为 1 2 5mg/L。GSP PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后的部分片段回收后 ,在同样条件下 ,30～ 6 0个循环可得到同样大小范围的产物。GSP PCR产物经 6 %的变性测序胶电泳 ,得到典型的梯状带 ,表明为微卫星DNA。
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关键词
蚕
微卫星DNA
体外自我扩增
GSP-PRC
扩增条件
基因组自我引发pcr
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Keywords
SilkwormMicro satellite DNAGenomic self priming pcr(GSP pcr)
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分类号
Q75
[生物学—分子生物学]
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