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菖蒲芋螺不同大小基因组DNA片段的分离制备 被引量:1
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作者 丁青 刘月鹏 +3 位作者 朱晓鹏 吴科榜 罗素兰 长孙东亭 《热带生物学报》 2017年第3期267-276,共10页
使用常规酚/氯仿抽提法(CTAB法)、离心柱法和磁珠吸附法,分别从菖蒲芋螺毒腺、肌肉及肝胰脏中提取基因组DNA,利用普通琼脂糖凝胶电泳与脉冲场电泳(PFGE)对基因组DNA片段进行分离,并检测提取DNA的大小和分布范围,同时,对脉冲场电泳条件... 使用常规酚/氯仿抽提法(CTAB法)、离心柱法和磁珠吸附法,分别从菖蒲芋螺毒腺、肌肉及肝胰脏中提取基因组DNA,利用普通琼脂糖凝胶电泳与脉冲场电泳(PFGE)对基因组DNA片段进行分离,并检测提取DNA的大小和分布范围,同时,对脉冲场电泳条件进行了优化。结果表明,3种方法均可提取基因组DNA,其中CTAB法和离心柱法提取的毒腺DNA纯度高,产率大,可用于后续实验,而磁珠法产率适中且纯度不高,但离心柱法的DNA片段较小,大多在9 kb以下,而CTAB法提取的DNA片段较大,获得的20 kb以上的大片段量较多,更适合于大片段基因组文库的构建。3种芋螺组织中,肝胰脏产率最高但片段弥散有降解,毒腺DNA片段较大且集中,产率也较高,而肌肉的DNA片段产率最低且片段较小。因此,用CTAB法提取菖蒲芋螺毒腺的DNA更适合构建大片段基因组DNA文库。筛选高质量的菖蒲芋螺的DNA,利用优化的脉冲场电泳条件进行分离回收,获得了不同大小片段的DNA,为后续菖蒲芋螺不同载体系统的基因组文库构建奠定了基础。 展开更多
关键词 菖蒲芋螺 基因组dna提取方法 基因组dna片段 分离制备 脉冲场电泳
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高通量PCR模板植物基因组DNA制备方法 被引量:20
2
作者 王慧娜 初志战 +2 位作者 马兴亮 李日清 刘耀光 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期1200-1205,共6页
制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2~5mg)双子叶植物叶片... 制备大量生物样品的模板DNA用于PCR检测是费时费工的工作。本文介绍一种快速高通量的植物基因组DNA(gDNA)制备及其用于PCR基因型检测的操作方法。将一小段单子叶植物苗叶片(与96方孔板的孔深大致相同)或一小块(约2~5mg)双子叶植物叶片放入96方孔板的各孔中、放入一粒直径4mm或3mm的合金珠和150μL制备缓冲液,盖上硅橡胶盖,在涡旋器或震动研磨器震动2~4min破碎组织。此方法获得的粗制gDNA样品浓度约2~4ngμL?1。用96针复制器或多通道移液器转移约0.5~1.0μL的gDNA溶液到96孔PCR板的反应液中,利用各种类型的PCR标记(简单序列重复SSR,插入缺失InDel等)进行基因型检测。此方法制备的gDNA模板也适合于较大DNA片段(>1kb)的扩增。本方法的关键是控制好在一定溶液量中破碎合适量的叶片,以及不要加入过量的gDNA溶液,以免带入过多的杂质抑制PCR效果。这种从材料种植、制备gDNA、转移样品gDNA,到PCR都是96格式化操作的快速、高通量、低成本的方法特别适合大量植物样品的规模化基因型检测。 展开更多
关键词 基因组dna制备 PCR 基因分型
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苹果基因组AFLP分析的DNA模板的制备及技术体系的建立 被引量:13
3
作者 王彩虹 王倩 +3 位作者 戴洪义 贾建航 王斌 束怀瑞 《山东农业大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2001年第2期197-200,共4页
AFLP对模板的质量要求较高。在苹果上用常规的SDS法提取基因组DNA ,若加以适当纯化 ,也可以达到AFLP分析的要求。另外 ,在AFLP分析体系中 ,应注意选择性扩增模板的浓度 ,以及选用适当的引物组合 ,同时也应掌握好变性的条件。
关键词 苹果 dna模板 AFLP分析 基因组 制备 技术体系 SDS法
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家蚕蛹体基因组DNA的快速制备方法 被引量:27
4
作者 赵巧玲 张志芳 何家禄 《蚕业科学》 CAS CSCD 2000年第1期63-64,共2页
关键词 家蚕蛹体 基因组dna 制备方法
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真核细胞基因组DNA的制备 被引量:3
5
作者 汪渊 胡若磊 +6 位作者 朱光能 张素梅 左莉 卜丽佳 朱华庆 周青 桂淑玉 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第1期74-76,共3页
关键词 真核细胞 基因组 dna 制备 分离 提纯
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酵母基因组DNA的两个简易制备方法 被引量:5
6
作者 罗樨 刘秋云 +2 位作者 何康泽 赫然 李宝健 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第1期59-59,共1页
关键词 基因组dna 简易制备 酵母
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山羊草属S基因组与小麦属B/G基因组RAPD标记和特异DNA片段克隆及研究 被引量:5
7
作者 刘旭 汪瑞琪 +1 位作者 贾继增 董玉琛 《植物遗传资源科学》 CSCD 2000年第1期15-24,共10页
本研究利用132个随机引物,对山羊草属和小麦属11个种的DNA进行扩增。对其中特异RAPD扩增产物进行克隆,然后用其做探针与小麦族23个种属DNA的RAPD扩增产物进行Southern杂交。共得到24个特异克隆:其中小麦族共有特异克隆1个,山羊草属... 本研究利用132个随机引物,对山羊草属和小麦属11个种的DNA进行扩增。对其中特异RAPD扩增产物进行克隆,然后用其做探针与小麦族23个种属DNA的RAPD扩增产物进行Southern杂交。共得到24个特异克隆:其中小麦族共有特异克隆1个,山羊草属和小麦属共有特异克隆2个,S基因组特异克隆2类7个,B/G基因组特异克隆2类6个,S基因组与B/G基因组共有的特异克隆8个。24个特异克隆中有22个测定了序列,其中15个为Fasta数据库里显示未见报导的序列。用这24个特异DNA克隆制成的探针与相应的23个材料经HindⅢ酶切消化的总DNA进行Southern杂交,发现其中7个可做为基因组特异探针。通过对24个特异DNA克隆分析研究表明:①S基因组是由两个基本不同的类型构成的,即拟斯卑尔脱山羊草为一个类型,其余4个S组山羊草为另一类型;因此建议前者基因型符号仍保留为“S”,而其余4个种之间无明显不同,故应把基因组符号统一为“S^1”②S基因组是小麦B/G基因组的供体,而拟斯卑尔脱山羊草可能是最主要的供体,但并不排除其余S基因组的种参与了B/G基因组形成的可能;研究还表明B基因组与S基因组还是有很大区别的,并已找到了B基因组的特异标记。 展开更多
关键词 S基因组 B基因组 RAPD 克隆 特异dna片段 山羊草属 小麦属
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螺旋藻基因组DNA制备方法的摸索与比较 被引量:5
8
作者 邰丽华 于涛 +3 位作者 张晓嵘 安伟 栗淑媛 乔辰 《科学技术与工程》 2007年第22期5755-5758,共4页
为了得到高质量的螺旋藻基因组DNA,采用超声波法和溶菌酶法两种方法提取基因组DNA,并对实验方法进行了摸索与比较。结果表明:影响螺旋藻基因组DNA制备质量和得率的重要因素之一是螺旋藻细胞壁的破壁程度。本实验中采用两种破壁方法均可... 为了得到高质量的螺旋藻基因组DNA,采用超声波法和溶菌酶法两种方法提取基因组DNA,并对实验方法进行了摸索与比较。结果表明:影响螺旋藻基因组DNA制备质量和得率的重要因素之一是螺旋藻细胞壁的破壁程度。本实验中采用两种破壁方法均可得到高质量高得率的螺旋藻基因组DNA,但超声波法破壁不易掌控,而适当浓度的溶菌酶法可获得较理想的结果。 展开更多
关键词 螺旋藻基因组dna 制备 超声波法 溶菌酶法
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采用DNA片段编辑技术反转CTCF结合位点改变基因组拓扑结构和增强子与启动子功能 被引量:5
9
作者 郭亚 吴强 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1073-1074,共2页
人类的祖先很早就观察到生物性状的遗传现象,但是直到19世纪60年代孟德尔发现遗传因子的分〈br〉 离定律和自由组合定律,遗传学才真正建立并快速发展起来。尽管人类很快有了基因的概念,并认识了核酸和蛋白质,但直到1953年沃森和克... 人类的祖先很早就观察到生物性状的遗传现象,但是直到19世纪60年代孟德尔发现遗传因子的分〈br〉 离定律和自由组合定律,遗传学才真正建立并快速发展起来。尽管人类很快有了基因的概念,并认识了核酸和蛋白质,但直到1953年沃森和克里克阐明了DNA的双螺旋结构之后,人类对基因才有了本质的认识,从而开启了分子遗传学时代。随着人类基因组计划测序工作的完成以及最近大规模测序技术的突破,越来越多的研究发现很多遗传疾病相关位点不仅位于启动子和基因编码区,而且也大量地存在于调控组织发育基因表达的增强子中。更多的遗传疾病相关位点则位于功能未知的基因组区域。近年研究发现这些遗传疾病相关位点可能与三维基因组(3D genome)息息相关并通过染色体高级拓扑架构(Higher-order topological chromosome architec-ture)起作用。 展开更多
关键词 人类基因组计划 启动子功能 dna片段 拓扑结构 增强子 结合位点 CTCF 编辑技术
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高质量螺旋藻基因组DNA制备方法研究 被引量:6
10
作者 李晋楠 汪志平 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期533-536,共4页
对高质量螺旋藻基因组 DNA的制备方法及其影响因素进行了研究 .结果表明 :以含水量约为10 %的冷冻藻泥为材料 ,采用 CTAB缓冲液及二次沉淀提取法 ,可获得高质量和高得率的螺旋藻基因组 DNA.
关键词 制备方法 螺旋藻 基因组dna 影响因素 CTAB缓冲液 二次沉淀提取法
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梅花类黄酮3′-羟化酶基因片段基于基因组DNA的简并PCR法克隆(英文) 被引量:2
11
作者 赵昶灵 杨清 陈俊愉 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期608-616,共9页
用本研究设计的“预先去杂—SDS法”从梅花嫩叶提取到高质量的基因组DNA。根据11条已公开发表的并提交到GenBank的类黄酮3′-羟化酶基因cDNA的假定氨基酸序列的保守区设计2个正向简并引物和3个反向简并引物组成6对引物,仅有1对引物能以... 用本研究设计的“预先去杂—SDS法”从梅花嫩叶提取到高质量的基因组DNA。根据11条已公开发表的并提交到GenBank的类黄酮3′-羟化酶基因cDNA的假定氨基酸序列的保守区设计2个正向简并引物和3个反向简并引物组成6对引物,仅有1对引物能以PCR法同时从梅花‘南京红须’、‘南京红’和‘粉皮宫粉’的基因组DNA扩增到一个469 bp的核苷酸片段,这3个片段在总体上有99 .72 %的一致性,与11条类黄酮3′-羟化酶基因cDNA的相应区域有65 .57 %的一致性。同时,“GGEK”并非类黄酮3′-羟化酶的特征性模体。这是首次从木本植物的基因组DNA克隆到类黄酮3′-羟化酶基因片段。本研究结果可为梅花类黄酮3′-羟化酶基因全长的克隆奠定基础。 展开更多
关键词 梅花 基因组dna提取 类黄酮3'-羟化酶基因片段 简并PCR
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用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备研究进展 被引量:1
12
作者 崔菲 王子岚 +2 位作者 高品红 王浩 杜克久 《河北林果研究》 2011年第3期286-288,共3页
自然界中真菌种类很多,一些对人类有益,然而有很多会对人及动植物致病。对真菌的检测鉴定在医学、植物检疫以及真菌分类学研究方面具有重要的意义。PCR检测是目前真菌鉴定的常规检测手段,用于PCR检测的真菌基因组DNA制备是相关领域研究... 自然界中真菌种类很多,一些对人类有益,然而有很多会对人及动植物致病。对真菌的检测鉴定在医学、植物检疫以及真菌分类学研究方面具有重要的意义。PCR检测是目前真菌鉴定的常规检测手段,用于PCR检测的真菌基因组DNA制备是相关领域研究热点,对用于PCR快速检测的真菌基因组DNA制备方法进行综述。 展开更多
关键词 真菌基因组dna 快速制备 PCR检测
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绵羊基因组DNA的提取及TLR基因片段的PCR扩增 被引量:1
13
作者 李昱辉 史琳 《现代畜牧科技》 2022年第11期88-90,共3页
Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为天然免疫系统中的重要分子,最突出的生物学功能是引发炎症反应,促进抗原递呈细胞的成熟,以此诱导机体获得性免疫反应。为研究TLR在疾病抗感染过程中起重要作用,提取绵羊基因组DNA,对TLR2和TLR... Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)作为天然免疫系统中的重要分子,最突出的生物学功能是引发炎症反应,促进抗原递呈细胞的成熟,以此诱导机体获得性免疫反应。为研究TLR在疾病抗感染过程中起重要作用,提取绵羊基因组DNA,对TLR2和TLR4基因相关片段进行PCR扩增,得到品质较好的DNA和目的片段,并对试验过程中的影响因素进行讨论和总结,为进一步探索绵羊TLR2和TLR4基因片段等位基因的多态性及其与绵羊乳房炎之间的相关性奠定物质基础。 展开更多
关键词 绵羊 基因组dna提取 TLR基因片段 PCR扩增
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基因组DNA片段编辑技术取得新进展
14
《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2015年第4期I0002-I0002,共1页
上海交通大学系统生物医学研究院吴强教授团队在Journal of Molecular Cell Biology杂志上(IF8.432)发表了题为“Efficient Inversions and Duplications of Mammalian Regulatory DNA Elements and Gene Clusters by CRISPR/Cas9”... 上海交通大学系统生物医学研究院吴强教授团队在Journal of Molecular Cell Biology杂志上(IF8.432)发表了题为“Efficient Inversions and Duplications of Mammalian Regulatory DNA Elements and Gene Clusters by CRISPR/Cas9”的研究成果。 展开更多
关键词 dna片段 编辑技术 基因组 ELEMENTS 上海交通大学 生物医学 CELL 研究成果
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一种适合枣和酸枣基因组DNA的提取方法 被引量:48
15
作者 彭建营 束怀瑞 彭士琪 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期46-48,52,共4页
研究比较了CTAB法和SDS法在枣和酸枣基因组DNA提取中的效果 ,并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提DNA质和量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明 :用改良后的CTAB法优于SDS法 ,可有效地去除多糖 ,所提DNA... 研究比较了CTAB法和SDS法在枣和酸枣基因组DNA提取中的效果 ,并分析了取样时间、部位、样品状况、抗氧化剂和不同纯化处理等对所提DNA质和量及其RAPD扩增效果的影响。结果表明 :用改良后的CTAB法优于SDS法 ,可有效地去除多糖 ,所提DNA的质和量均能满足PCR扩增要求。取样时间与部位对所提基因组DNA的质量无影响 ,但与产量有关 ,以旺盛生长期的幼叶或嫩梢尖为佳。样品采后液氮处理 - 70℃低温保存 ,与新鲜材料所提DNA差异不大。抗氧化剂可有效地阻止多酚类物质氧化变褐 ,1%的 β 巯基乙醇即可满足要求。 展开更多
关键词 酸枣 基因组 dna制备
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一种木本果树基因组DNA提取方法研究 被引量:142
16
作者 陈大明 张上隆 金勇丰 《浙江农业大学学报》 CSCD 北大核心 1997年第6期621-624,共4页
研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组DNA提取方法.其改良策略是:在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质,防止多酚类物质被氧化,从而排除多酚类等杂质的干扰.利用这一方法提取的柑... 研究了一种可有效排除细胞内多酚类等杂质污染的简便、快捷、经济的果树基因组DNA提取方法.其改良策略是:在细胞核被裂解前去除细胞质中的多酚类等杂质,防止多酚类物质被氧化,从而排除多酚类等杂质的干扰.利用这一方法提取的柑桔、枇杷、梨、苹果、湖北海棠、桃、樱桃等7种果树基因组DNA均能被限制性内切酶完全消化,获得理想的Southern杂交结果,也可作为PCR模板应用,成功地进行特异性基因扩增和RAPD. 展开更多
关键词 木本果树 果树 基因组 dna制备 提取 多酚类杂质
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不同保存条件下中华哲水蚤基因组DNA提取的比较 被引量:10
17
作者 方旅平 林元烧 曹文清 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期1-4,共4页
以采自厦门港的中华哲水蚤 (Calanussinicus)为对象 ,研究多种保存条件对中华哲水蚤基因组DNA提取的影响。结果表明 ,除5%福尔马林保存的样品没有提取到DNA之外 ,其余样品均能成功提取出基因组DNA ;以该DNA为模板通过相应引物成功扩增... 以采自厦门港的中华哲水蚤 (Calanussinicus)为对象 ,研究多种保存条件对中华哲水蚤基因组DNA提取的影响。结果表明 ,除5%福尔马林保存的样品没有提取到DNA之外 ,其余样品均能成功提取出基因组DNA ;以该DNA为模板通过相应引物成功扩增出线粒体DNACOI基因片段。其中无水乙醇保存样品提取可靠的基因组DNA方法的建立 ,为野外样品保存工作提供了一个简便 ,经济的途径。 展开更多
关键词 中华哲水蚤 基因组dna提取 线粒体dna 基因片段 引物 扩增 厦门港 取出 无水乙醇 保存条件
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簇毛麦基因组特异DNA序列标记的建立和应用 被引量:3
18
作者 迟世华 杨足君 +3 位作者 冯娟 周建平 刘成 任正隆 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期1-5,共5页
为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明... 为建立簇毛麦基因组特异DNA序列的分子标记,以普通小麦中国春、绵阳11、川农17和R111以及多年生簇毛麦、硬粒小麦-多年生簇毛麦双二倍体TDB-3为材料,用120条随机引物进行RAPD分析,筛选出一个多年生簇毛麦的特异性RAPD片段,克隆测序表明该片段全长为937 bp(记为OPM2937)。以OPM2937的DNA序列为基础设计了一对特异引物,并用该特异引物对多年生簇毛麦、二倍体簇毛麦以及中国春-二倍体簇毛麦附加系CSDA1V^CSDA7V与小麦-多年生簇毛麦衍生后代进行了扩增,结果表明,凡具有簇毛麦染色体的材料均可扩增出目标DNA片段,而不具簇毛麦染色体的材料均未能得到扩增。将OPM2937在NCBI中进行序列比对,发现它是一个新的序列,说明OPM2937为簇毛麦基因组的一个特异序列,该DNA序列标记可用于快速跟踪检测小麦背景中的簇毛麦染色体。 展开更多
关键词 簇毛麦属 RAPD 基因组特异性dna片段
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利用简化的SDS法提取杨树基因组DNA 被引量:12
19
作者 郝会海 李燕玲 +1 位作者 杜志军 杜克久 《河北林果研究》 2006年第4期363-366,共4页
以杨树组培苗幼嫩叶片为材料,在室温下采用简化的SDS法快速制备其基因组DNA,并对制备DNA过程中的影响因子进行了初步研究。结果表明,采用此方法制备的基因组DNA在数量和纯度上可以满足聚合酶链式反应(PCR)的要求。另外,DNA提取缓冲液中... 以杨树组培苗幼嫩叶片为材料,在室温下采用简化的SDS法快速制备其基因组DNA,并对制备DNA过程中的影响因子进行了初步研究。结果表明,采用此方法制备的基因组DNA在数量和纯度上可以满足聚合酶链式反应(PCR)的要求。另外,DNA提取缓冲液中添加一定浓度的PVP、β-巯基乙醇,有利于DNA提取。 展开更多
关键词 基因组dna dna制备 dna纯度
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甲醛溶液保存的中华哲水蚤基因组DNA提取和PCR扩增 被引量:3
20
作者 周美玉 林元烧 +3 位作者 方旅平 郑连明 刘迟迟 曹文清 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期403-406,共4页
提取了保存于5%甲醛溶液中的单只中华哲水蚤基因组DNA.经凝胶电泳后虽无清晰条带,但PCR扩增后可得线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基基因(mtCOI)片段.测序分析,该片段长度为710bp,与GenBank中的序列(索引号AF332769)比对后确定为中华哲水蚤m... 提取了保存于5%甲醛溶液中的单只中华哲水蚤基因组DNA.经凝胶电泳后虽无清晰条带,但PCR扩增后可得线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基基因(mtCOI)片段.测序分析,该片段长度为710bp,与GenBank中的序列(索引号AF332769)比对后确定为中华哲水蚤mtCOI序列的一部分.利用本实验方法所提取的基因组DNA可适用于系统发生、种群遗传结构等领域的分子水平研究,为保存在甲醛溶液中的小型海洋浮游动物的基因信息利用提供实用技术. 展开更多
关键词 中华哲水蚤 PCR扩增 基因组dna提取 甲醛溶液 保存 细胞色素氧化酶 GENBANK 线粒体dna 海洋浮游动物 种群遗传结构 测序分析 凝胶电泳 片段长度 系统发生 实验方法 实用技术 信息利用 分子水平 序列
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