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IGF-1基因克隆及其产物的测序鉴定
1
作者
曹尚美
邹真真
+5 位作者
陈泊霖
杨少哲
张清伟
王单单
王浩然
付秀虹
《科技创新与应用》
2024年第16期7-11,共5页
基因过表达在基础实验和基因治疗应用中都是常用的手段,而质粒的扩增在基因过表达过程中是不可或缺的技术,如何规范、高效地对质粒进行扩增和提取是基因治疗应用的前提,也是困扰很多基础研究人员的难题。利用现有的实验技术,在降低实验...
基因过表达在基础实验和基因治疗应用中都是常用的手段,而质粒的扩增在基因过表达过程中是不可或缺的技术,如何规范、高效地对质粒进行扩增和提取是基因治疗应用的前提,也是困扰很多基础研究人员的难题。利用现有的实验技术,在降低实验成本基础上,建立过表达质粒扩增、提取的最优方案。首先采用传统方法制作LB培养基和感受态细胞,对转化后的质粒进行大量扩增培养,之后使用商业试剂盒对质粒进行提取,反复试验后对商业试剂盒质粒提取过程进行优化,提高效率,最终获得高纯度和浓度的质粒溶液。经超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测和sanger测序等多种方式检测验证后与NCBI数据库中目标基因序列一致,提示扩增、提取成功。经优化后的质粒扩增、提取方案标准、高效,成本低廉,是质粒基因克隆的最佳选择。
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关键词
IGF-1
基因
质粒克隆
基因
过表达
质粒的扩增
基因治疗应用
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职称材料
题名
IGF-1基因克隆及其产物的测序鉴定
1
作者
曹尚美
邹真真
陈泊霖
杨少哲
张清伟
王单单
王浩然
付秀虹
机构
漯河市中心医院科创中心/漯河医学高等专科学校第一附属医院/河南省生育力保护与优生重点实验室
出处
《科技创新与应用》
2024年第16期7-11,共5页
基金
河南省自然科学基金(2223000420247)
2023年河南省博士后科研资助项目(312145)
+3 种基金
中央引导地方项目(Z20221343023)
河南省重点研发与推广专项(212102310813、222102310361)
河南省医学科技攻关项目(LHGJ20221031)
漯河医学高等专科学校科技创新项目(2023ZD18)。
文摘
基因过表达在基础实验和基因治疗应用中都是常用的手段,而质粒的扩增在基因过表达过程中是不可或缺的技术,如何规范、高效地对质粒进行扩增和提取是基因治疗应用的前提,也是困扰很多基础研究人员的难题。利用现有的实验技术,在降低实验成本基础上,建立过表达质粒扩增、提取的最优方案。首先采用传统方法制作LB培养基和感受态细胞,对转化后的质粒进行大量扩增培养,之后使用商业试剂盒对质粒进行提取,反复试验后对商业试剂盒质粒提取过程进行优化,提高效率,最终获得高纯度和浓度的质粒溶液。经超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测和sanger测序等多种方式检测验证后与NCBI数据库中目标基因序列一致,提示扩增、提取成功。经优化后的质粒扩增、提取方案标准、高效,成本低廉,是质粒基因克隆的最佳选择。
关键词
IGF-1
基因
质粒克隆
基因
过表达
质粒的扩增
基因治疗应用
Keywords
IGF-1 gene
plasmid cloning
gene overexpression
plasmid amplification
gene therapy application
分类号
Q811.4 [生物学—生物工程]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
IGF-1基因克隆及其产物的测序鉴定
曹尚美
邹真真
陈泊霖
杨少哲
张清伟
王单单
王浩然
付秀虹
《科技创新与应用》
2024
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