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MsrB1基因对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用
被引量：
1
1
作者
贾义
陈晋
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期323-327,共5页
背景 氧化应激被认为是年龄相关性白内障发生的主要因素之一,研究表明蛋氨酸亚砜还原酶B1（MsrB1）对于保护晶状体细胞抵抗氧化应激具有重要作用,然而,MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）的凋亡影响的机制尚不十分清楚...
背景 氧化应激被认为是年龄相关性白内障发生的主要因素之一,研究表明蛋氨酸亚砜还原酶B1（MsrB1）对于保护晶状体细胞抵抗氧化应激具有重要作用,然而,MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）的凋亡影响的机制尚不十分清楚.目的 探讨MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人LECs凋亡及其细胞周期分布的影响.方法人LECs细胞系SRA01/04在DMEM中进行培养,不同浓度的H2O2（200、400、600、800和1 000μmol/L）加入培养基分别处理细胞12、24和36 h以选择最适浓度和作用时间.细胞分为正常对照组、MsrB1 siRNA转染组（将MsrB1 siRNA Lipofectamine 2000质粒转染入LECs）、H2O2诱导组（200μmol/L作用LECs 24 h）和MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组（转染MsrB1 siRNA脂质质粒后用H2O2处理细胞）.采用MTT法检测不同浓度H2O2诱导后人LECs 12、24和36 h细胞的存活率,并筛选H2O2处理作用最适的浓度和时间,用于进一步的细胞凋亡诱导实验;Real-time PCR法检测MsrB1 siRNA转染后24 h各组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达水平;采用Hoechst33528染色法观察各组细胞的细胞核形态变化;采用碘化丙啶（PI）染色法,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和不同细胞周期的细胞比例.结果 正常对照组、H2O2诱导组、MsrB1 siRNA转染组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达值为1.063±0.058、1.013±0.049和0.235±0.024,MsrB1 siRNA转染组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达值明显低于正常对照组和H2O2诱导组,差异均有统计学意义（t=31.744、35.807,均P＜0.001）.不同浓度H2O2处理后24 h细胞活力最低,以200 μmol/LH2O2处理后24 h为诱导人LECs凋亡的浓度和时间点.Hoechst 33528染色显示,H2O2诱导组可见部分细胞核收缩,MsrB1 siRNA转染组可见少数收缩变小的细胞核,MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组收缩变小的细胞核多于H2O2诱导组.流式细胞术检测结果显示,正常对照组的凋亡细胞占（1.36±0.35）％,而MsrB1siRNA转染组占（3.26±0.31）％,H2O2诱导组和MsrBl siRNA转染联合H2O2诱导组细胞的凋亡率明显上升,分别为（5.13±0.59）％和（8.73±0.48）％.细胞周期检测结果表明,H2O2诱导组细胞周期阻滞在G2/M期.MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组人LECs G1期所占比例为（52.78±1.68）％,明显高于H2O2诱导组的（44.99±1.37）％,而G2/M期细胞比例为（34.97±2.31）％,明显低于H2O2诱导组的（42.39±1.41）％,差异均有统计学意义（t=6.224、-6.213,均P＜0.01）.结论 MsrB1基因通过调节细胞周期的细胞分布减少H2O2诱导的人LECs的凋亡.
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关键词
蛋氨酸亚砜还原酶
基因沉默/药物作用
人
晶状体
上皮细胞
/药物
作用
细胞凋亡
细胞周期
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职称材料
题名
MsrB1基因对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用
被引量：
1
1
作者
贾义
陈晋
机构
贵阳医学院生物与工程学院
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期323-327,共5页
基金
贵州省科学技术基金项目（黔科合J字[2014]2028号）
文摘
背景 氧化应激被认为是年龄相关性白内障发生的主要因素之一,研究表明蛋氨酸亚砜还原酶B1（MsrB1）对于保护晶状体细胞抵抗氧化应激具有重要作用,然而,MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞（LECs）的凋亡影响的机制尚不十分清楚.目的 探讨MsrB1基因沉默对H2O2诱导的人LECs凋亡及其细胞周期分布的影响.方法人LECs细胞系SRA01/04在DMEM中进行培养,不同浓度的H2O2（200、400、600、800和1 000μmol/L）加入培养基分别处理细胞12、24和36 h以选择最适浓度和作用时间.细胞分为正常对照组、MsrB1 siRNA转染组（将MsrB1 siRNA Lipofectamine 2000质粒转染入LECs）、H2O2诱导组（200μmol/L作用LECs 24 h）和MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组（转染MsrB1 siRNA脂质质粒后用H2O2处理细胞）.采用MTT法检测不同浓度H2O2诱导后人LECs 12、24和36 h细胞的存活率,并筛选H2O2处理作用最适的浓度和时间,用于进一步的细胞凋亡诱导实验;Real-time PCR法检测MsrB1 siRNA转染后24 h各组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达水平;采用Hoechst33528染色法观察各组细胞的细胞核形态变化;采用碘化丙啶（PI）染色法,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和不同细胞周期的细胞比例.结果 正常对照组、H2O2诱导组、MsrB1 siRNA转染组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达值为1.063±0.058、1.013±0.049和0.235±0.024,MsrB1 siRNA转染组细胞中MsrB1 mRNA的相对表达值明显低于正常对照组和H2O2诱导组,差异均有统计学意义（t=31.744、35.807,均P＜0.001）.不同浓度H2O2处理后24 h细胞活力最低,以200 μmol/LH2O2处理后24 h为诱导人LECs凋亡的浓度和时间点.Hoechst 33528染色显示,H2O2诱导组可见部分细胞核收缩,MsrB1 siRNA转染组可见少数收缩变小的细胞核,MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组收缩变小的细胞核多于H2O2诱导组.流式细胞术检测结果显示,正常对照组的凋亡细胞占（1.36±0.35）％,而MsrB1siRNA转染组占（3.26±0.31）％,H2O2诱导组和MsrBl siRNA转染联合H2O2诱导组细胞的凋亡率明显上升,分别为（5.13±0.59）％和（8.73±0.48）％.细胞周期检测结果表明,H2O2诱导组细胞周期阻滞在G2/M期.MsrB1 siRNA转染联合H2O2诱导组人LECs G1期所占比例为（52.78±1.68）％,明显高于H2O2诱导组的（44.99±1.37）％,而G2/M期细胞比例为（34.97±2.31）％,明显低于H2O2诱导组的（42.39±1.41）％,差异均有统计学意义（t=6.224、-6.213,均P＜0.01）.结论 MsrB1基因通过调节细胞周期的细胞分布减少H2O2诱导的人LECs的凋亡.
关键词
蛋氨酸亚砜还原酶
基因沉默/药物作用
人
晶状体
上皮细胞
/药物
作用
细胞凋亡
细胞周期
Keywords
Methionine sulfoxide reductases
Gene silencing/drug effects
Humans
Lens
Epithelial cells/drug effets
Cell apoptosis
Cell cycle
分类号
R776.1 [医药卫生—眼科]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MsrB1基因对H2O2诱导的人晶状体上皮细胞凋亡的保护作用
贾义
陈晋
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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