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病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术及其在大豆基因功能研究和育种中的应用潜力 被引量：4
1
作者 王爽 郭兵福 +4 位作者 郭勇 张丽娟 金龙国 杨慧 邱丽娟 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期536-540,共5页
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观... 病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)是植物体抵抗病毒侵染的一种自然防御机制,近年来已发展成为一种基因功能研究的有效手段。与突变体筛选、转基因、基因敲除等技术相比,VIGS技术因具有周期短、成本低、可迅速观察表型等优点而被广泛应用于基因的功能鉴定。文章对VIGS技术的分子机理、病毒载体系统、稳定遗传VIGS植株的获得策略及其在大豆中的应用等内容进行了综述并对今后的发展趋势进行了讨论。 展开更多
关键词 病毒诱导的基因沉默 vigs 病毒载体 功能基因 育种
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番茄SlERF-H6基因VIGS沉默载体构建
2
作者 李立霞 胡康棣 +1 位作者 姚改芳 张华 《合肥工业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2024年第9期1232-1235,1242,共5页
番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信... 番茄(Solanum lycopersicum)具有较高的营养价值,深受消费者的喜爱,目前番茄已经成为广泛种植的经济作物之一。乙烯响应因子(ethylene response factor,ERF)是一类植物特有的转录因子。ERF在植物形态发生、逆境响应、成熟衰老、激素信号转导和代谢物调节等多种生理过程中起重要的调节作用。文章以番茄的SlERF-H6(LOC101259323)基因为研究对象,通过对SlERF-H6的基因序列进行分析,获得该基因的特异性区域沉默序列。利用同源重组技术成功构建了番茄SlERF-H6病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)载体。为进一步探究番茄SlERF-H6基因在果实成熟中的作用提供参考。 展开更多
关键词 番茄 病毒诱导的基因沉默(vigs) SlERF-H6基因 同源重组 载体构建
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基于病毒诱导的基因沉默(VIGS)方法的LsRGL1基因在生菜中的功能分析
3
作者 陈丽 范双喜 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期21-26,60,共7页
为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡... 为了确定LsRGL1基因对生菜抽薹的影响,以S39生菜品种为试验材料,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从S39生菜品种中克隆得到LsRGL1基因;采用病毒诱导基因沉默(VIGS)方法,利用烟草脆裂病毒(TRV)载体对目的基因进行沉默;采用表型观察、石蜡切片、实时荧光定量PCR(qPCR)方法、酶联免疫吸附法(ELISA)分别研究空白对照组(无TRV载体)、阴性对照组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2空载体)和试验组(按质量比1∶1同时注射TRV1空载体和TRV2-LsRGL1重组载体)中植株表型、花芽分化、LsRGL1基因的相对表达量和内源激素质量分数的变化。结果表明:病毒侵染后,试验组植株的茎长相对于空白对照组和阴性对照组的茎长明显增大,且试验组各项表型数据均大于2个对照组的表型数据,而空白对照组与阴性对照组各项表型数据之间并未出现明显差异;石蜡切片结果表明试验组植株已经开始花芽分化,相较于对照组提前进入生殖生长时期;qPCR分析结果显示,试验组中LsRGL1基因的相对表达量相较于空白组和阴性对照组的显著下调,且下调幅度均超过50%。试验组中内源激素赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)、生长素(IAA)的含量显著高于对照组的含量,而茉莉酸(JA)含量显著下降。综上可知,沉默LsRGL1基因加快了生菜的抽薹。 展开更多
关键词 生菜 表达分析 内源激素 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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利用VIGS技术在本氏烟中沉默枸杞PDS同源基因的研究 被引量：3
4
作者 曲玲 李彦龙 +6 位作者 焦恩宁 赵建华 秦垦 尹跃 周旋 安巍 曹有龙 《宁夏农林科技》 2021年第2期25-30,F0002,共7页
【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的V... 【目的】本项研究旨在通过建立一个异源VIGS体系,为枸杞重要性状相关基因的功能鉴定提供前期信息。【方法】从枸杞叶片中克隆获得409 bp长的八氢番茄红素脱饱和酶基因(phytoene desaturase,PDS)的编码区片段,构建入基于烟草脆裂病毒的VIGS空载体中,通过农杆菌介导的侵润接种,将重组的病毒沉默载体pTRV2-PDS转入本氏烟中。【结果】本氏烟幼苗被侵染接种后,沉默处理植株的叶片呈现整叶白化的表型,而阴性对照植株叶片一直未出现变白的症状,qRT-PCR检测表明,接种17 d后,与阴性对照植株相比,沉默处理植株PDS基因的表达显著地被抑制(P<0.05),说明枸杞PDS基因的同源基因在本氏烟中得到了有效沉默。【结论】该VIGS体系的构建,可用于对枸杞部分基因功能的快速初步鉴定和筛选,旨在提高枸杞基因功能研究的效率。 展开更多
关键词 枸杞 八氢番茄红素脱饱和酶基因(PDS) 病毒诱导基因沉默(vigs) 本氏烟
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芦笋病毒诱导基因沉默体系的初步构建
5
作者 吴贺 李云宾 +3 位作者 董陈文华 林春 刘正杰 毛自朝 《云南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期31-41,共11页
【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄... 【目的】在多年生雌雄异株植物芦笋(Asparagus officinalis L.)中建立病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)体系,以快速探究芦笋中关键基因的功能。【方法】以绿芦笋品种‘Guelph Millennium’为试验材料,选用八氢番茄红素脱氢酶编码基因(AoPDS)和镁螯合酶Ⅰ亚基编码基因(AoCH42)为报告基因,基于苹果潜伏球形病毒(apple latent spherical virus,ALSV)沉默载体,采用真空渗透法通过农杆菌对芦笋露白种子进行侵染,经表型和qRT-PCR检测,构建芦笋的VIGS体系,并进一步验证编码芦笋NADH-脱氢酶铁硫蛋白亚基S8基因(AoNDUFS8)的功能。【结果】侵染21 d后,AoPDS和AoCH42沉默植株分别出现白化和黄化表型;AoNDUFS8沉默植株长势瘦弱,发育迟缓。qRT-PCR结果显示:与对照组相比,植株侵染后,目的基因表达均下降,预示成功构建芦笋VIGS体系。【结论】基于ALSV的VIGS体系能有效沉默芦笋中的目的基因,为后续芦笋功能基因组分析提供了实践基础。 展开更多
关键词 芦笋 病毒诱导基因沉默(vigs)体系 PDS CH42 基因功能
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苏麦3号小麦穗部病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系的建立及验证 被引量：3
6
作者 吴磊 姜朋 +2 位作者 张瑜 马鸿翔 张旭 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共5页
为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗... 为了探讨利用病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系在小麦穗部进行基因沉默的可行性,用大麦条纹花叶病毒诱导苏麦3号小麦穗部PDS基因的转录后沉默,再接种禾谷镰刀菌进行抗性鉴定。结果表明,与接种空载BSMV∶00的对照相比,接种BSMV∶PDS的小麦穗中PDS基因表达量下调了77%(P<0.05)。接种BSMV∶00的小麦穗受到赤霉病菌侵染后,穗部平均病小穗数和DON毒素含量分别为2.75个和4.55μg/g,与接种无菌水对照无显著差异(P>0.05)。说明在苏麦3号穗部VIGS系统中,通过接种病毒能使靶标基因沉默;接种赤霉病菌后,苏麦3号病小穗数和DON毒素含量不受接种病毒的影响,对赤霉病菌的抗性保持不变,建立的VIGS体系可以应用于小麦赤霉病抗性候选基因的功能分析。 展开更多
关键词 小麦 赤霉病抗性 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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基于VIGS的不同表达载体混合接种对烤烟烟碱代谢的影响
7
作者 卜亚艇 李伟 +9 位作者 许燕彪 谢可 徐秉聪 吴剑平 叶性荣 周建军 祖琼瑶 杨再军 郑聪 徐世晓 《江苏农业科学》 北大核心 2025年第3期16-23,共8页
烟碱的代谢具有复杂的基因调控网络,其中众多基因间存在相互影响,为探究不同基因共同沉默后对烟碱代谢通路以及叶片烟碱含量的影响。使用前期构建的烟碱代谢途径中3个功能基因(NtA622、NtPMT、NtBBL)和1个调控基因(NtMYB305a)病毒载体,... 烟碱的代谢具有复杂的基因调控网络,其中众多基因间存在相互影响,为探究不同基因共同沉默后对烟碱代谢通路以及叶片烟碱含量的影响。使用前期构建的烟碱代谢途径中3个功能基因(NtA622、NtPMT、NtBBL)和1个调控基因(NtMYB305a)病毒载体,利用病毒诱导基因沉默(virus induced gene silencing,VIGS)技术依据基因在烟碱代谢中的作用性质和作用阶段,设置不同载体组合浸染液接种处理,测定各处理的基因相对表达量、酶活性、烟碱含量,系统分析目的基因沉默效率以及沉默后对其他基因表达的影响,并探究各处理的基因平均沉默效率对烟碱降低率的贡献度。结果表明,各处理沉默相应目的基因,会在一定程度上影响本研究中其他目的基因的表达,其中NtA622基因受影响较小,而NtPMT、NtBBL基因受影响较大;各处理烟碱含量均得到降低,其中D6处理4个基因共同沉默后烟碱含量降低幅度最大,PMT、BBL活性与烟碱含量趋势基本一致,A622活性与烟碱含量趋势不完全一致;基因平均沉默效率低于烟碱含量降低率越多,说明对烟碱降低的贡献度越大,基因平均沉默效率高于烟碱含量降低率越多,说明对烟碱降低的贡献度越小。由此可知,利用VIGS技术可有效沉默目的基因的表达,进而降低叶片中烟碱含量,其中4个基因共同沉默后,烟碱含量降低最多;在烟碱代谢途径上,NtA622基因相对较稳定,而NtPMT与NtBBL基因相对不稳定;PMT、BBL活性与烟碱含量趋势基本一致。本研究为烤烟烟碱的分子调控提供了理论和技术支撑。 展开更多
关键词 vigs 混合载体 烟碱 基因表达量 酶活性 基因平均沉默效率
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基于VIGS技术的烤烟烟碱调控及对烟碱含量的影响 被引量：1
8
作者 杨再军 张丽 +5 位作者 张福强 张权 昝建朋 田举要 白茂军 徐世晓 《江苏农业科学》 北大核心 2024年第6期61-67,共7页
在对烤烟原料要求烟碱含量低的中烟工业企业中,烟碱含量过高的烟叶难以在原料配方中适配,导致工业可用性较低。为了降低烟叶中烟碱的含量,通过病毒诱导基因沉默技术(virus induced gene silencing,VIGS)构建烟碱合成过程中4个关键基因(N... 在对烤烟原料要求烟碱含量低的中烟工业企业中,烟碱含量过高的烟叶难以在原料配方中适配,导致工业可用性较低。为了降低烟叶中烟碱的含量,通过病毒诱导基因沉默技术(virus induced gene silencing,VIGS)构建烟碱合成过程中4个关键基因(NtA622、NtPMT、NtBBL、NtMYB305a)的靶向沉默体系,探究瞬时沉默对基因相对表达量及烟碱含量的影响,并对不同载体的沉默效率与烟碱降低率进行贡献度分析。结果表明,通过目标序列靶片段成功构建了基于VIGS技术的沉默载体;T2处理沉默NtPMT基因后,最大沉默效率为55.23%,T3处理沉默NtBBL基因后,沉默效率为50.78%,两者差异不显著;各处理沉默相应基因后,不仅表现出对应基因表达量的下调,同时对本研究中其他基因的表达量也有影响;烟碱降低最多的是T3处理,降低率达到39.34%,同时T3处理沉默NtBBL基因的沉默效率对烟碱降低的贡献度最大,为0.775。本研究建立的VIGS技术体系有效沉默目的基因的表达,沉默NtBBL基因的T3处理沉默效率较高,烟碱含量较低,为调控烟碱含量提供了一种新思路与方法。 展开更多
关键词 vigs 烟碱 载体构建 相对基因表达量 病毒诱导的基因沉默
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病毒诱导的基因沉默技术(VIGS)在园林植物中的研究与应用
9
作者 张丽英 《河南林业科技》 2022年第2期32-34,共3页
基因沉默在基因功能验证中应用愈加广泛,而病毒诱导的基因沉默技术作为其主要的方法之一,对于基因验证具有重要作用。从VIGS的发展、原理、分类、效率及应用等方面梳理病毒诱导的基因沉默技术在园林植物中的研究与应用,以期为园林植物... 基因沉默在基因功能验证中应用愈加广泛,而病毒诱导的基因沉默技术作为其主要的方法之一,对于基因验证具有重要作用。从VIGS的发展、原理、分类、效率及应用等方面梳理病毒诱导的基因沉默技术在园林植物中的研究与应用,以期为园林植物的基因组研究夯实基础。 展开更多
关键词 基因沉默 vigs 园林植物 病毒诱导
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菜心VIGS沉默植株构建的教学实验 被引量：1
10
作者 钟珉 覃鸿毅 +2 位作者 柴喜荣 杨暹 康云艳 《安徽农学通报》 2024年第10期102-106,共5页
普通分子生物学实验具有实践性和操作性强等特点,病毒诱导基因沉默技术(VIGS)是操作简单、实践性和操作性强的前沿生物学技术。本研究在菜心VIGS沉默植株构建的教学实验中,以种子真空侵染方法为基础,通过优化侵染浓度、侵染时间和共培... 普通分子生物学实验具有实践性和操作性强等特点,病毒诱导基因沉默技术(VIGS)是操作简单、实践性和操作性强的前沿生物学技术。本研究在菜心VIGS沉默植株构建的教学实验中,以种子真空侵染方法为基础,通过优化侵染浓度、侵染时间和共培养时间,得到了操作简单,侵染效率和植株成活率高,白化表型明显的侵染体系。通过实验教学可知,菌液OD600为0.80,侵染时间5 min,培养15 h的侵染效率最高,BcPDS基因的表达受到抑制,侵染优化后的菜心VIGS体系稳定且高效。该教学实验的构建使学生的学习兴趣得到了明显提高,培养了学生创新思维能力和独立工作能力,锻炼了学生的动手能力,并具备一定的创新和科研能力。 展开更多
关键词 菜心 病毒诱导的基因沉默 技术改良 实验教学 创新能力
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利用VIGS技术分析TcLr19中TaSTKC8基因的抗叶锈性功能 被引量：3
11
作者 李建嫄 张立荣 +2 位作者 张娜 杨文香 刘大群 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期11-16,共6页
为明确抗叶锈病相关基因在抗叶锈性中的作用,本研究以小麦叶锈菌诱导的TcLr19为研究对象,利用病毒介导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)技术对前期克隆得的TaSTKC8基因进行了初步的功能分析,结果显示TaSTKC8部分基因沉默... 为明确抗叶锈病相关基因在抗叶锈性中的作用,本研究以小麦叶锈菌诱导的TcLr19为研究对象,利用病毒介导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)技术对前期克隆得的TaSTKC8基因进行了初步的功能分析,结果显示TaSTKC8部分基因沉默后,反应型由"0"变为"X";组织学观察显示接种叶锈菌120h,寄主组织中虽然出现了坏死反应,但有大量菌丝的生长,说明TaSTKC8基因参与了TcLr19对小麦叶锈菌THTS的抗病反应。 展开更多
关键词 小麦 叶锈病 TaSTKC8基因 病毒介导的基因沉默(vigs)
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基于VIGS技术的小麦干旱响应基因TaEF-1α的功能研究 被引量：4
12
作者 王新博 任永哲 +6 位作者 岳慧芳 李乐 吕伟增 史校艳 辛泽毓 王志强 林同保 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期72-78,共7页
为了进一步研究Ta EF-1α基因在小麦响应干旱胁迫中的作用,首先在正常灌水和干旱胁迫2个处理下对Ta EF-1α基因在转录水平上的表达量进行了验证,并利用VIGS(Virus induced gene silencing)技术将Ta EF-1α基因进行沉默,对其功能进行研... 为了进一步研究Ta EF-1α基因在小麦响应干旱胁迫中的作用,首先在正常灌水和干旱胁迫2个处理下对Ta EF-1α基因在转录水平上的表达量进行了验证,并利用VIGS(Virus induced gene silencing)技术将Ta EF-1α基因进行沉默,对其功能进行研究。结果表明,Ta EF-1α基因在m RNA水平上的表达量与其蛋白水平上的变化趋势一致,均受干旱诱导上调表达。与正常灌水且未进行VIGS沉默处理的植株相比,干旱处理且未进行VIGS沉默处理的植株中Ta EF-1α基因表达量极显著升高,其叶片相对含水量也极显著降低、相对电导率和丙二醛(MDA)含量则极显著升高;干旱条件下,与未进行VIGS沉默的对照植株相比,VIGS沉默后的植株中Ta EF-1α基因表达量极显著下降,其叶片相对含水量也极显著降低、相对电导率和丙二醛(MDA)含量则极显著升高,植株表现出叶片下垂、对干旱胁迫敏感的表型。综合干旱处理和VIGS沉默Ta EF-1α基因后小麦植株的表型和生理指标变化,说明干旱胁迫诱导小麦植株中Ta EF-1α基因上调表达,敲低Ta EF-1α基因表达后小麦抗旱性显著下降,因此,Ta EF-1α基因在小麦响应干旱胁迫中可能发挥了重要作用。 展开更多
关键词 小麦 干旱胁迫 TaEF-1α基因 vigs技术
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广藿香PcGA2ox1基因克隆、VIGS载体构建和表达分析
13
作者 严雅玲 曾晴 +2 位作者 严寒静 何梦玲 张宏意 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期19-26,共8页
赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学... 赤霉素2-氧化酶(gibberellin 2-oxidases,GA2ox)是赤霉素(GAs)代谢途径关键酶,调节活性GAs降解,在植物株型调控中发挥重要作用。为探寻GA2ox基因在广藿香中的功能,本研究对广藿香PcGA2ox1基因进行克隆,得到561 bp的CDS序列。生物信息学分析结果表明,PcGA2ox1蛋白编码186个氨基酸,为亲水性蛋白,分子量为20.98 kDa,等电点为5.81,不含信号肽,无跨膜结构域,具有GA2ox超基因家族的保守结构域,主要定位在细胞核。系统发育分析结果显示,PcGA2ox1基因与丹参GA2ox7的亲缘关系最为密切。qRT-PCR结果显示,PcGA2ox1基因在广藿香中的表达具有组织特异性,叶中表达量最高,根中表达量最低。用病毒诱导基因沉默(VIGS)技术侵染广藿香的结果显示,侵染两周后,PcGA2ox1基因表达量比阴性对照下降83%,比空白对照下降71%,沉默效果明显。本研究结果可为深入了解PcGA2ox1结构、功能和作用机理奠定基础,并为广藿香优良品种选育提供参考。 展开更多
关键词 广藿香 赤霉素2-氧化酶(GA2ox) 基因克隆 病毒诱导基因沉默(vigs) 表达分析
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基于叶绿素合成关键基因构建马蹄莲佛焰苞离体VIGS技术体系
14
作者 刘红艳 杨拓 +5 位作者 王壹 孙轩 王贤 刘振林 张国君 卫尊征 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1289-1298,共10页
返青是天南星科观赏植物在发育过程中发生的一种典型的功能叶绿体重新分化形成的生理现象,其中马蹄莲佛焰苞常出现这一现象,但其潜在的调控机制并不明确。为了探究马蹄莲返青的调控机制,提高彩色马蹄莲的观赏品质,本研究以黄色品种Flore... 返青是天南星科观赏植物在发育过程中发生的一种典型的功能叶绿体重新分化形成的生理现象,其中马蹄莲佛焰苞常出现这一现象,但其潜在的调控机制并不明确。为了探究马蹄莲返青的调控机制,提高彩色马蹄莲的观赏品质,本研究以黄色品种Florex Gold为材料,以返青过程中两个叶绿素合成关键基因ZhGluTR和ZhChlH为研究对象,建立病毒诱导的基因沉默(VIGS)体系,对马蹄莲进行基因功能验证。通过离体佛焰苞孔片试验并对取样部位和侵染时长进行综合分析,结果显示,中部真空抽吸5 min的试验组返青现象出现最迟,VIGS沉默效果最好。在上述沉默背景下,与对照组相比,ZhGluTR和ZhChlH沉默孔片的返青现象均出现得更迟,色调角值上升更缓慢,并且叶绿素含量更低,类胡萝卜素含量更高。综合上述结果表明,本研究建立的VIGS体系可分别有效沉默佛焰苞中的叶绿素合成关键基因ZhGluTR和ZhChlH。研究结果有助于进一步探究马蹄莲佛焰苞返青现象的分子调控机制。 展开更多
关键词 马蹄莲 佛焰苞孔片 病毒诱导的基因沉默(vigs) 基因功能
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高通量农业基因工程技术VIGS的应用研究
15
作者 焦健 张红培 《农业工程技术》 2020年第24期25-26,30,共3页
农作物新品种的培育过程中,常常涉及到生物基因工程技术的使用,比如转基因作物新品种、分子设计育种、基因编辑育种等。VIGS技术是农业生产应用中一种反向遗传学的基因工程技术,它一般根据具体育种目标,构建精准的基因沉默病毒载体,最... 农作物新品种的培育过程中,常常涉及到生物基因工程技术的使用,比如转基因作物新品种、分子设计育种、基因编辑育种等。VIGS技术是农业生产应用中一种反向遗传学的基因工程技术,它一般根据具体育种目标,构建精准的基因沉默病毒载体,最终结合育种实践培育出符合预期的农作物新品种。该文研究了一种高通量的农业基因工程技术VIGS在农作物育种中的基因筛选应用。 展开更多
关键词 vigs(基因沉默) 高通量 农业基因工程 技术应用
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基于VIGS的小分子RNA麦类作物沉默技术体系
16
作者 焦健 张理茜 《农业工程技术》 2022年第5期14-15,共2页
小分子RNA在农作物的生长、发育、抗病、抗旱、抗寒等生命过程中发挥着重要作用,也是抵抗生物胁迫和非生物胁迫的关键种质资源,长久以来农业科技领域一直致力于开发高效、省时、高通量的小分子RNA检查、表达和沉默技术。该文基于大麦条... 小分子RNA在农作物的生长、发育、抗病、抗旱、抗寒等生命过程中发挥着重要作用,也是抵抗生物胁迫和非生物胁迫的关键种质资源,长久以来农业科技领域一直致力于开发高效、省时、高通量的小分子RNA检查、表达和沉默技术。该文基于大麦条纹花叶病毒载体,建立了一种在麦类作物体内瞬时高效沉默小分子RNA的技术体系,以期为研究麦类作物小分子RNA的生物学功能提供可选择的技术方法。 展开更多
关键词 小分子RNA MIRNA vigs 基因沉默
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桑树PDS基因VIGS转化体系的构建与鉴定 被引量：7
17
作者 李瑞雪 王钰婷 +3 位作者 胡飞 夏家凤 汪泰初 赵卫国 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1432-1438,共7页
【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(T... 【目的】建立桑树的病毒诱导基因沉默(VIGS)转化体系,为桑树功能基因的分析研究提供技术支持。【方法】以丰驰桑为试验材料,克隆含Bam H I和Xba I酶切位点的八氢番茄红素脱氢酶(PDS)基因片段,经Xba I和Bam H I双酶切后与烟草脆裂病毒(TRV)连接构建重组病毒载体p TRV2-PDS,转化农杆菌GV3101后通过压迫注射方式侵染桑树幼苗叶片。【结果】克隆获得的桑树PDS基因干扰片段346 bp,与改造后的TRV质粒连接可成功构建携带桑树PDS基因的重组病毒载体p TRV2-PDS。桑树叶片被侵染15 d后,接种重组病毒载体p TRV2-PDS桑树的第二轮真叶开始出现叶片白化现象,侵染20 d后,白化现象沿叶脉向四周逐渐扩散,叶片呈现明显的白化表型。实时荧光定量PCR检测结果显示,重组病毒载体p TRV2-PDS侵染的桑叶PDS基因相对表达量仅为阴性对照(p TRV2)的58%,二者差异极显著(P<0.01),表明桑树PDS基因表达被有效抑制。【结论】利用TRV构建的桑树VIGS体系能有效沉默PDS基因,使桑树叶片呈现明显的白化症状,即可用于后续的桑树功能基因鉴定。 展开更多
关键词 桑树 八氢番茄红素脱氢酶(PDS) 病毒诱导的基因沉默(vigs) 烟草脆裂病毒(TRV) 白化表型
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黑籽南瓜NBS类基因CfRFN2的克隆及VIGS验证 被引量：2
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作者 丁玉梅 侯思名 +4 位作者 姚春馨 杨加珍 谢俊俊 曾亚文 杨正安 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期727-737,共11页
黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN 2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为40... 黑籽南瓜(Cucurbita ficifolia)是云南特有的具有高抗枯萎病遗传性状的瓜类种质资源。为鉴定黑籽南瓜中NBS-LRR类基因的抗病功能,该研究从其叶片中克隆了NBS类基因CfRFN 2(GenBank ID:MK618462),测序全长为4303 bp,完整的编码框长度为4092 bp,编码1363个氨基酸残基,该基因注释为拟南芥抗病蛋白At4g27190类转录体X1的同源基因,含有1个NB-ARC和2个LRR结构域,属于具有信号肽的可溶性蛋白。核苷酸相似性分析显示,CfRFN 2与其他瓜类NBS类基因相似性在87%~98%之间;系统进化树分析表明,CfRFN2蛋白和瓜类的其他NBS类抗病蛋白聚为一个分支,其中CfRFN2蛋白与中国南瓜和美洲南瓜的RPS2、印度南瓜的RPS2-like亲缘关系最近,其次是黄瓜的At4g27190和苦瓜的At4g27220,与甜瓜的Atg27190亲缘关系相对较远;组织表达特性分析表明,CfRFN 2基因在黑籽南瓜叶片中表达量最高,其次是茎,而在果皮和根中表达量较低。该研究采用烟草脆裂病毒载体系统,构建了黑籽南瓜VIGS沉默载体pTRV2-CfRFN 2,含沉默载体的农杆菌侵染黑籽南瓜幼苗后接种枯萎病菌,qRT-PCR检测表明,接种后2 d和4 d的转pTRV2-CfRFN 2沉默组植株的CfRFN 2基因表达量比接种后同时期的野生型植株显著降低(分别下降34.75%和98.27%),病情指数增加为野生型的1.32倍,初步证明黑籽南瓜CfRFN 2基因具有抗枯萎病的功能,推测该基因可能在黑籽南瓜抗枯萎病防御过程中发挥着重要作用。该研究中NBS类基因CfRFN2的克隆和VIGS验证为黑籽南瓜更多优异基因的克隆和功能验证奠定了前期基础,也为发掘黑籽南瓜优异抗病基因和开展瓜类分子育种提供新信息。 展开更多
关键词 黑籽南瓜 NBS类基因 枯萎病 基因克隆 病毒诱导的基因沉默(vigs)
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RNA沉默转基因技术在植物抗病虫害研究中的作用 被引量：5
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作者 杨美玲 李琦 +1 位作者 陈佳琦 张晓明 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1-6,共6页
RNA沉默技术由于其简便、高效及高特异性在各种模式和非模式生物系统中得到了广泛的应用。植物转基因技术是将植物、动物或微生物中分离到的目的基因,通过各种手段整合到植物基因组上,使其稳定遗传并赋予植物新的优良性状的生物技术。RN... RNA沉默技术由于其简便、高效及高特异性在各种模式和非模式生物系统中得到了广泛的应用。植物转基因技术是将植物、动物或微生物中分离到的目的基因,通过各种手段整合到植物基因组上,使其稳定遗传并赋予植物新的优良性状的生物技术。RNA沉默在植物转基因工程领域的研究十分广泛,目前已经成功研究培育出许多抗病毒、抗虫转基因植物,为农业病虫害的防控提供了新的思路和方法。本文重点综述了近年来植物转基因介导RNA沉默在抗虫与抗病毒研究方面的进展,加深人们对转基因植物抗虫与抗病毒研究的认识。 展开更多
关键词 RNA沉默 转基因技术 植物抗虫 植物抗病毒
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辣椒果实SGR基因的克隆与功能分析
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作者 秦于玲 刘维侠 +4 位作者 曹振木 刘琳 朱丹 殷晓敏 刘子记 《热带作物学报》 北大核心 2025年第7期1562-1570,共9页
滞绿基因(STAY-GREEN,SGR)是一个调控植物叶绿素降解的关键基因,在调控植物衰老方面发挥着重要作用。为研究SGR基因在辣椒果实着色过程中的调控作用,采用同源基因克隆法,利用PCR技术从辣椒果实cDNA中扩增出CaSGR基因,对其蛋白序列进行... 滞绿基因(STAY-GREEN,SGR)是一个调控植物叶绿素降解的关键基因,在调控植物衰老方面发挥着重要作用。为研究SGR基因在辣椒果实着色过程中的调控作用,采用同源基因克隆法,利用PCR技术从辣椒果实cDNA中扩增出CaSGR基因,对其蛋白序列进行生物信息学分析,并构建病毒诱导基因沉默(VIGS)载体,初步验证基因功能。结果表明:CaSGR基因的ORF为792 bp,编码263个氨基酸;生物信息学分析发现,茄科作物SGR基因相对保守,克隆的CaSGR蛋白与番茄、马铃薯的SGR蛋白进化关系较近;构建CaSGRVIGS载体并注射辣椒叶片,成功获得沉默植株,沉默植株叶片白化,果实颜色改变,CaSGR基因的表达量显著降低,果实中叶绿素与β-胡萝卜素含量明显增高。本研究为深入解析CaSGR基因在辣椒果实着色中的分子调控机制提供基础,并为培育高类胡萝卜素含量的辣椒新品种提供理论依据。 展开更多
关键词 辣椒 CaSGR基因 vigs技术 叶绿素 Β-胡萝卜素
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