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题名在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段
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作者
李海娟
徐玲玲
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机构
西安文理学院生物与环境工程学院
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出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第3期577-583,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31700059)
陕西省自然科学基础研究计划项目(2018JQ3037)
陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20180210)~~
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文摘
噬热栖热菌(Thermus thermophilus)是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子。利用此原理,在T.thermophilus中开发了一种新的基因无痕敲除手段,基本方案是:将目的基因的上下游DNA序列克隆到pUC18载体后转化T.thermophilus,将转化混合物涂布在无筛选的平板上;混合池法提取96个单菌落的基因组DNA,PCR鉴定出含有突变型等位基因的菌株;将该杂合型突变菌株在无筛选条件下培养后(使杂合子纯合化)涂板,通过PCR法从单菌落中鉴定出纯合的基因无痕敲除突变株。利用该系统成功敲除了T.thermophilus的TTC0340_0341基因,获得突变体的概率达到了10-2。该方法最显著优点是无需任何筛选标记、能在野生型遗传背景下使用。
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关键词
噬热栖热菌
多倍体
基因无痕敲除手段
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Keywords
Thermus thermophilus
polyploid
gene clean deletion method
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分类号
Q812
[生物学—生物工程]
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