检索结果-维普期刊中文期刊服务平台

双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体被引量：2: 1; 作者李海娟《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期143-148,共6页; 为在噬热栖热菌(Thermusthermophilus)中开収无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体幵转化T.thermophilusHB27细胞,将转化混合... 展开更多; 关键词噬热栖热菌双交换性同源重组基因无痕敲除; 在线阅读下载PDF 职称材料

无痕基因敲除技术构建鼠伤寒沙门菌luxS基因突变株: 2; 作者陈伟《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期23-26,30,共5页; 为验证一种基于定点突变的无痕基因敲除技术(Scarless deletion)在鼠伤寒沙门菌中的有效性,本研究以鼠伤寒沙门菌中的lux S基因为靶基因,利用-Red重组酶和重叠延伸PCR(SOE-PCR)引入定点突变,以AAA代替lux S基因的起始密码ATG,改变lux S... 展开更多; 关键词无痕基因敲除鼠伤寒沙门菌 LUXS基因; 在线阅读下载PDF 职称材料

筛选地中海拟无枝酸菌无痕基因敲除菌株的简便方法: 3; 作者张巧巧金哲男金红星《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期25-33,共9页; 将抗生素抗性基因作为标记筛选无痕基因敲除菌株比较费时,因而建立筛选无痕基因敲除菌株的简便方法。通过敲除茄红素生物合成途径中第一个反应的酶编码基因dxs(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶基因),获得白色地中海拟无枝酸菌突变菌株,以此... 展开更多; 关键词地中海拟无枝酸菌利福霉素茄红素无痕基因敲除 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶; 在线阅读下载PDF 职称材料

在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段: 4; 作者李海娟徐玲玲《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期577-583,共7页; 噬热栖热菌(Thermus thermophilus)是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子。利用此原理,在T.thermophilus中开发了一种新的基因无痕... 展开更多; 关键词噬热栖热菌多倍体基因无痕敲除手段; 在线阅读下载PDF 职称材料

无痕敲除法构建食品安全级枯草芽孢杆菌无芽孢菌株被引量：1: 5; 作者张明俐柳鹏福 +1 位作者史吉平曾勇《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期175-180,共6页; 利用同源重组法快速构建枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis168)spo0A基因缺陷型无芽孢菌株B.subtilis168Δspo0A。经PCR及核酸电泳验证,孢子形成率鉴定和芽孢染色镜检,确定最终获得不产芽孢的B.subtilis168Δspo0A基因缺失突变菌株。基因... 展开更多; 关键词枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis168) 无痕基因敲除无芽孢菌株; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体被引量：2: 1; 作者李海娟; 机构西安文理学院生物与环境工程学院; 出处《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期143-148,共6页; 基金国家自然科学基釐项目(31700059) 陕西省自然科学基础研究计划项目(2018JQ3037) 陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20180210); 文摘为在噬热栖热菌(Thermusthermophilus)中开収无需筛选标记的基于双交换同源重组的基因无痕敲除手段,以大质粒及染色体上的TTP0042与TTC0340_0341为靶基因,构建含有其两侧同源臂的基因敲除载体幵转化T.thermophilusHB27细胞,将转化混合物涂布于不含筛选物质的培养基上,通过PCR及Southern杂交检验转化子的基因型。结果表明,采用线状的TTP0042基因敲除载体迚行转化,获取表观Δ0042突变体的概率为10–4,而使用闭合环状载体,该概率可达10–3;基因型及表现型分析显示,这些表观Δ0042均为TTP0042无痕敲除型突变体。该敲除手段在染色体上的基因TTC0340_0341中得到验证,从300个单菌落中成功鉴定出了1个Δ0340_0341突变株。; 关键词噬热栖热菌双交换性同源重组基因无痕敲除; Keywords Thermus thermophilus double-crossover homologous recombination gene clean deletion; 分类号 Q812 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名无痕基因敲除技术构建鼠伤寒沙门菌luxS基因突变株: 2; 作者陈伟; 机构新疆兵团塔里木盆地生物资源保护利用重点实验室新疆塔里木大学生命科学学院; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期23-26,30,共5页; 基金教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET-11-1071) 新疆生产建设兵团"兵团英才"项目; 文摘为验证一种基于定点突变的无痕基因敲除技术(Scarless deletion)在鼠伤寒沙门菌中的有效性,本研究以鼠伤寒沙门菌中的lux S基因为靶基因,利用-Red重组酶和重叠延伸PCR(SOE-PCR)引入定点突变,以AAA代替lux S基因的起始密码ATG,改变lux S基因编码序列,通过测序验证并采用2型自诱导物(AI-2)试验检测是否有信号分子产生。基因测序结果显示lux S基因的起始密码ATG被引入的AAA代替;AI-2试验未检测到突变基因菌株的AI-2产物,而对照的野生菌株有AI-2产生,表明突变基因失活,方法有效。利用无痕基因敲除技术构建突变株简单快速,并且不影响被突变基因的另一条DNA单链序列,具有广泛的应用前景。; 关键词无痕基因敲除鼠伤寒沙门菌 LUXS基因; Keywords scarless deletion Salmonella typhimurium luxS gene; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名筛选地中海拟无枝酸菌无痕基因敲除菌株的简便方法: 3; 作者张巧巧金哲男金红星; 机构河北工业大学化工学院桦川县星火乡中心校; 出处《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期25-33,共9页; 文摘将抗生素抗性基因作为标记筛选无痕基因敲除菌株比较费时,因而建立筛选无痕基因敲除菌株的简便方法。通过敲除茄红素生物合成途径中第一个反应的酶编码基因dxs(1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶基因),获得白色地中海拟无枝酸菌突变菌株,以此菌株为受体菌,对S-丙二酰转移酶基因(mtf)进行无痕敲除。针对菌落本身携带颜色的地中海拟无枝酸菌(橘红色),利用茄红素合成酶基因dxs无痕敲除获得了白色菌株,在此基础上进行mtf的无痕敲除。以茄红素生物合成途径中任意一个反应的酶编码基因作为标记,很容易筛选得到无痕基因敲除的突变菌株。; 关键词地中海拟无枝酸菌利福霉素茄红素无痕基因敲除 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶; Keywords Amycolatopsis mediterranei rifamycin lycopene markerless gene knock-out 1-deoxy-D-xylulose-5- phosphate synthase gene; 分类号 Q93-33 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段: 4; 作者李海娟徐玲玲; 机构西安文理学院生物与环境工程学院; 出处《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期577-583,共7页; 基金国家自然科学基金项目(31700059) 陕西省自然科学基础研究计划项目(2018JQ3037) 陕西省高校科协青年人才托举计划项目(20180210)~~; 文摘噬热栖热菌(Thermus thermophilus)是多倍体,在基因敲除过程中,可形成同时含有突变型和野生型等位基因的杂合子,在无选择压力下,杂合子会转化成只含有其中一种等位基因的纯合子。利用此原理,在T.thermophilus中开发了一种新的基因无痕敲除手段,基本方案是:将目的基因的上下游DNA序列克隆到pUC18载体后转化T.thermophilus,将转化混合物涂布在无筛选的平板上;混合池法提取96个单菌落的基因组DNA,PCR鉴定出含有突变型等位基因的菌株;将该杂合型突变菌株在无筛选条件下培养后(使杂合子纯合化)涂板,通过PCR法从单菌落中鉴定出纯合的基因无痕敲除突变株。利用该系统成功敲除了T.thermophilus的TTC0340_0341基因,获得突变体的概率达到了10-2。该方法最显著优点是无需任何筛选标记、能在野生型遗传背景下使用。; 关键词噬热栖热菌多倍体基因无痕敲除手段; Keywords Thermus thermophilus polyploid gene clean deletion method; 分类号 Q812 [生物学—生物工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名无痕敲除法构建食品安全级枯草芽孢杆菌无芽孢菌株被引量：1: 5; 作者张明俐柳鹏福史吉平曾勇; 机构烟台大学生命科学学院中国科学院上海高等研究院; 出处《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第14期175-180,共6页; 文摘利用同源重组法快速构建枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis168)spo0A基因缺陷型无芽孢菌株B.subtilis168Δspo0A。经PCR及核酸电泳验证,孢子形成率鉴定和芽孢染色镜检,确定最终获得不产芽孢的B.subtilis168Δspo0A基因缺失突变菌株。基因敲除完成后,菌株基因组不需引入抗性基因或其它任何筛选标记,实现了对spo0A基因的无痕基因敲除。本研究对枯草杆菌的工业化生产及提高相关产品食品质量安全性具有重要意义。; 关键词枯草芽孢杆菌(Bacilus subtilis168) 无痕基因敲除无芽孢菌株; Keywords Bacilus subtilis168 clean deletion nonspore strain; 分类号 TS201.3 [轻工技术与工程—食品科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	双交换同源重组法构建Thermus thermophilus基因无痕敲除突变体	李海娟	《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2019	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	无痕基因敲除技术构建鼠伤寒沙门菌luxS基因突变株	陈伟	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2016	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	筛选地中海拟无枝酸菌无痕基因敲除菌株的简便方法	张巧巧金哲男金红星	《微生物学杂志》 CAS CSCD	2018	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	在噬热栖热菌中开发无需筛选标记的基因敲除手段	李海娟徐玲玲	《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	无痕敲除法构建食品安全级枯草芽孢杆菌无芽孢菌株	张明俐柳鹏福史吉平曾勇	《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心	2016	1	在线阅读下载PDF 职称材料