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猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白基因重组杆状病毒的构建及应用
1
作者 郭伟伟 向银辉 +4 位作者 刘大卫 刘岳 孙鹏 崔晓霞 杜元钊 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期91-96,共6页
本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细... 本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后,构建重组Bacmid-VP2,转染昆虫细胞Sf9,获得了重组杆状病毒re-BacVP2,并对其进行一系列鉴定。结果显示:其病毒含量可达到107.1 TCID50/mL。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中成功表达,并与抗FPV的多克隆抗体发生特异性反应。该蛋白能凝集1%猪红细胞,凝集价达1∶16384。电镜观察可见表达的VP2蛋白能形成病毒样颗粒(VLPs),为20~22 nm。VP2蛋白制备的疫苗能产生较高的抗体滴度。VP2基因的成功表达为FPV疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因 重组杆状病毒 鉴定
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传染性喉气管炎病毒王岗株糖蛋白gB基因在重组杆状病毒中的表达 被引量：12
2
作者 张绍杰 倪健强 +4 位作者 孟松树 王柳 仇华吉 王云峰 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期321-324,共4页
将克隆到pUC119中的传染性喉气管炎病毒 (ILTV)糖蛋白gB基因 ,通过EcoRI位点亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中 ,构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经 3轮蚀斑... 将克隆到pUC119中的传染性喉气管炎病毒 (ILTV)糖蛋白gB基因 ,通过EcoRI位点亚克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中 ,构建成重组杆状病毒转移载体rpVLgB。将rpVLgB转移载体质粒与杆状病毒DNA(Bac_N_BlueDNA)共转染Sf9昆虫细胞 ,经 3轮蚀斑纯化 ,获得重组病毒并命名为rpVL_ILTVgB。PCR方法鉴定证明gB基因正确插入到杆状病毒基因组中 ,直接免疫荧光试验和Dot_ELISA结果均表明gB基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞中获得表达 ,表达的gB蛋白将作为鸡传染性喉气管炎的亚单位疫苗和诊断抗原。 展开更多
关键词 传染性喉气管炎病毒 糖蛋白gB 重组杆状病毒 基因 鸡病毒
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禽流感病毒核蛋白基因在重组杆状病毒中的表达 被引量：19
3
作者 邓国华 马文军 于康震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 1999年第2期81-83,共3页
利用ＲＴ－ＰＣＲ方法成功地扩增了我国禽流感病毒分离株Ａ／Ｘｉｎｇｊｉａｎｇ／１／９６（Ｈ１４Ｎ５）的核蛋白（ＮＰ）基因，其限制性内切酶图谱和核苷酸序列与鸭源的标准Ｈ１４Ｎ５毒株几乎完全一致，与其它毒株则有较大差异，说... 利用ＲＴ－ＰＣＲ方法成功地扩增了我国禽流感病毒分离株Ａ／Ｘｉｎｇｊｉａｎｇ／１／９６（Ｈ１４Ｎ５）的核蛋白（ＮＰ）基因，其限制性内切酶图谱和核苷酸序列与鸭源的标准Ｈ１４Ｎ５毒株几乎完全一致，与其它毒株则有较大差异，说明该鸡源分离株与鸭源毒株有非常近的亲缘关系。将ＮＰ基因定向克隆到杆状病毒转移载体ｐＶＬ１３９３中，再与杆状病毒线性ＤＮＡ（ＢＡＣ－Ｎ－ＢｌｕｅＤＮＡ）共转染于Ｓｆ９昆虫细胞中，经过三次蚀斑筛选，获得重组病毒ｒＢ２。用其细胞表达产物裂解后作ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，结果表明ＮＰ基因在杆状病毒系统中获得了表达。同时用表达产物作琼脂扩散试验，结果表明表达产物与现行标准禽流感琼扩抗原具有相同的生物学活性。 展开更多
关键词 禽流感病毒 重组杆状病毒 核蛋白基因
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猪传染性胃肠炎病毒S基因杆状病毒/昆虫细胞表达系统重组质粒的构建 被引量：8
4
作者 任晓峰 李一经 +1 位作者 李广兴 刘宝全 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2002年第4期359-363,共5页
用限制性内切酶从克隆质粒pUC—s中回收猪传染性胃肠炎病毒中国分离株,TH-98株完整的病毒保护性抗原基因,即S基因。按照预定的阅读框架,将S基因克隆于供体质粒pFASTBACHTb的EcoRI、PstI多克隆位点上,并进行酶切鉴定,得到阳性重组质粒BAC... 用限制性内切酶从克隆质粒pUC—s中回收猪传染性胃肠炎病毒中国分离株,TH-98株完整的病毒保护性抗原基因,即S基因。按照预定的阅读框架,将S基因克隆于供体质粒pFASTBACHTb的EcoRI、PstI多克隆位点上,并进行酶切鉴定,得到阳性重组质粒BAC—S。用DH10BAC对BAC—S进行转位,获得重组质粒pBAC—S。根据S基因酶切位点分析结果及杆状病毒(Bac-ulovirus)转位区结构特点,用相应的限制性内切酶进行酶切鉴定,并用特异性和通用引物进行PCR分析,证明该重组质粒为含有TH-98株完整S基因的可直接在昆虫细胞进行表达的感染性重组质粒。 展开更多
关键词 猪 传染性胃肠炎病毒 S基因 杆状病毒 昆虫细胞 表达系统 重组质粒
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gfp基因标记的重组杆状病毒对棉铃虫幼虫的侵染历程 被引量：5
5
作者 吕颂雅 杨复华 +1 位作者 刘祖强 齐义鹏 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期743-750,共8页
用携带杆状病毒极晚期多角体蛋白基因启动子驱动gfp表达的重组病毒rHa FGP感染棉铃虫三龄幼虫 .在感染后不同时间取样 ,分离不同组织 ,制片 ,置于倒置荧光显微镜下观察基因的表达 .结果发现 ,随着感染时间的推移 ,荧光产生的部位出现更... 用携带杆状病毒极晚期多角体蛋白基因启动子驱动gfp表达的重组病毒rHa FGP感染棉铃虫三龄幼虫 .在感染后不同时间取样 ,分离不同组织 ,制片 ,置于倒置荧光显微镜下观察基因的表达 .结果发现 ,随着感染时间的推移 ,荧光产生的部位出现更替 ,随后荧光强度也发生相应的变化 .从荧光出现的先后初步推断出杆状病毒对昆虫幼虫的侵染路线 :中肠上皮→血淋巴→气管系统→脂肪体 真皮 .在幼虫感染后 12h荧光即出现于中肠细胞中 ,表明此时已有极晚期蛋白表达 .说明利用杆状病毒极晚期基因启动子驱动苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白基因 (cry)表达 。 展开更多
关键词 重组杆状病毒 绿色荧光蛋白 侵染历程 GFP基因 棉铃虫幼虫
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HIV-1 gag-gp120嵌合基因重组杆状病毒载体的构建
6
作者 张东威 金宁一 +6 位作者 王宏伟 张应玖 王莉馨 罗坤 李萍 于洪臣 殷震 《白求恩医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期114-116,共3页
目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基... 目的 :构建含有 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体。方法 :利用基因重组技术将 B亚型中国株 HIV- 1的结构基因 gag与 gp12 0嵌合后再通过大肠杆菌 /杆状病毒系统构建重组杆状病毒载体。结果 :酶切电泳显示基因重组正确 ,电镜显示重组杆状病毒大量扩增。结论 :含有B亚型 HIV- 1(中国株 ) gag- gp12 0嵌合基因的重组杆状病毒表达载体构建成功 ,为进一步研究Gag- gp12 0嵌合蛋白的表达及其生物学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 人I型免疫缺陷病毒 嵌合基因 载体 基因重组 杆状病毒
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基因工程的杆状病毒在生物杀虫剂中的应用
7
作者 季平 何家禄 《国外农学（蚕业）》 1994年第2期9-10,共2页
化学农药大量而又不加选择的使用,对人类和生态环境造成了严重危害。与此同时,产生抗药性的害虫不断增加,已达三百多种。杆状病毒的寄生特异性很强,被公认为对人类和非目标生物以及环境十分安全。所以自70年代末期,杆状病毒用于昆虫防... 化学农药大量而又不加选择的使用,对人类和生态环境造成了严重危害。与此同时,产生抗药性的害虫不断增加,已达三百多种。杆状病毒的寄生特异性很强,被公认为对人类和非目标生物以及环境十分安全。所以自70年代末期,杆状病毒用于昆虫防治的研究开始盛行。至目前为止已有13种商品化的杆状病毒杀虫剂。杆状病毒的寄主特异性强也有不利的一面,就是防治害虫种类有限, 展开更多
关键词 基因工程 杆状病毒 生物杀虫剂
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利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因研究进展 被引量：1
8
作者 曹倩倩 廖德芳 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第10期34-38,共5页
杆状病毒表达系统是一种新型、高表达的真核表达系统,广泛应用在新疫苗、诊断试剂和新型蛋白药物开发研究方面。不少研究人员报道了利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因生产结构蛋白和非结构蛋白,期望表达的蛋白质具有与真实病毒蛋白相... 杆状病毒表达系统是一种新型、高表达的真核表达系统,广泛应用在新疫苗、诊断试剂和新型蛋白药物开发研究方面。不少研究人员报道了利用重组杆状病毒表达口蹄疫病毒基因生产结构蛋白和非结构蛋白,期望表达的蛋白质具有与真实病毒蛋白相似的生物学活性,能够应用于候选疫苗或诊断检测抗原。作者对近几年利用重组杆状病毒表达口蹄疫结构蛋白基因和非结构蛋白基因的研究进展进行了综述,并提出相关问题和困难供商讨。 展开更多
关键词 重组杆状病毒 口蹄疫病毒 基因表达
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双表达H9N2禽流感病毒HA基因的假型重组杆状病毒系统的构建
9
作者 林文耀 樊惠英 +3 位作者 程晓亮 陈筱薇 叶煜 廖明 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期80-84,92,共6页
以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64... 以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-G,得到重组质粒pFastBac-G-H9-HA.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacm id-G-H9-HA.利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-Dual-H9-HA.间接免疫荧光实验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达HA蛋白.免疫电镜观察结果表明,HA蛋白可以在该重组杆状病毒表面展示. 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2亚型 双表达 HA基因 重组假型杆状病毒
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O型口蹄疫病毒P1-2A基因重组杆状病毒的构建及其表达 被引量：2
10
作者 廖德芳 信爱国 +4 位作者 高华峰 苗海生 高林 朱明旺 李华春 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第10期81-85,共5页
设计合成特异引物,扩增O型口蹄疫病毒(O/FMDV)P1-2A基因,将其克隆至T载体上,通过HindⅢ和NotⅠ双酶切P1-2A基因和真核转座载体pFastBacTMDual,构建重组转座质粒pFastBac-P12A,再将pFastBac-P12A转化入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac,... 设计合成特异引物,扩增O型口蹄疫病毒(O/FMDV)P1-2A基因,将其克隆至T载体上,通过HindⅢ和NotⅠ双酶切P1-2A基因和真核转座载体pFastBacTMDual,构建重组转座质粒pFastBac-P12A,再将pFastBac-P12A转化入含穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac,经重组筛选获得杆状病毒重组质粒Bacmid-P12A。将Bacmid-P12A质粒转染Sf9昆虫细胞,出现典型CPE。病变细胞经Dot blotting和SDS-PAGE检测和分析,结果表明,O/FMDV P1-2A蛋白在Sf9细胞中获得表达,为O型FMDV特异性蛋白。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 P1基因 重组杆状病毒 表达
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应用杆状病毒系统高效表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因 被引量：6
11
作者 周艳君 仇华吉 +5 位作者 王云峰 钱平 蔡雪晖 柴文君 翁长江 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期278-281,共4页
将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞... 将猪繁殖与呼吸综合征病毒CH_la株囊膜糖蛋白 (GP5 )基因定向亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHisB中 ,与杆状病毒线性DNA(Bac_N_BlueTMDNA)共转染昆虫细胞sf9,经过三轮蚀斑纯化后 ,获得重组杆状病毒rBac_GP5。用该重组病毒感染sf9细胞后 ,应用间接免疫荧光试验、SDS_PAGE和Westernblot检测表明 ,GP5基因在杆状病毒系统中获得了高效表达 ,表达产物因糖基化程度差异 ,表观分子量有 2 2、2 5和 30kDa三种总计约占细胞蛋白总量的 2 6 .4%。 展开更多
关键词 杆状病毒表达系统 GP5基因 PRRS 重组疫苗
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蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建 被引量：7
12
作者 徐剑文 林建银 +2 位作者 林旭 齐元麟 张晓艳 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期755-764,共10页
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)... 研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a) 基因合成 基因克隆 基因突变 重组杆状病毒载体
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禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达 被引量：5
13
作者 李贺 孟庆文 +4 位作者 冉多良 于康震 陈化兰 李永强 吴东来 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期294-297,共4页
经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA,测序正确后与线性化... 经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV/Restock/1/34(H7N1)1.7kbHA基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后,亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis,筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA,测序正确后与线性化的杆状病毒DNA(Bac-N-BlueTMDNA)共转染Sf9昆虫细胞,挑取蓝色蚀斑,经三轮蚀斑纯化,获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA,经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中,血凝实验、SDS-PAGE和Westernblot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。 展开更多
关键词 禽流感病毒 血凝素基因 重组杆状病毒 表达
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仙台病毒F基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达及抗原性分析 被引量：5
14
作者 曲连东 蒋良丰 +6 位作者 刘家森 司昌德 郭东春 姜骞 林欢 韩凌霞 刘娣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期347-350,共4页
为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受... 为真核表达仙台病毒(SeV)融合蛋白(F)基因,本研究根据GenBank登录的SeV F基因序列设计合成一对特异性引物,以pMD18-T-F阳性重组质粒为模板扩增F基因,并将其克隆至杆状病毒穿梭质粒pFastBac HTa中,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,转化感受态细胞DH10Bac,提取重组杆粒rBacmid-F,经PCR鉴定正确将rBacmid-F转染Sf9细胞,连续传代后,细胞病变明显。经SDS-PAGE分析,成功表达了相对分子量为65ku左右的F蛋白,western blot和ELISA分析表明重组F蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 仙台病毒 F基因 重组杆状病毒表达系统
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鸡传染性支气管炎病毒核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达 被引量：6
15
作者 刘胜旺 孔宪刚 +3 位作者 王玮 高磊 童光志 谷守林 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期401-403,共3页
利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由... 利用反转录_聚合酶链式反应 (ReverseTranscription_polymeraseChainReaction ,PT_PCR)技术扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)中国地方分离株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,结果表明该病毒株核蛋白基因长度为 12 3 0bp ,编码蛋白由4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。在此基础上 ,本实验构建了杆状病毒重组转移载体pBlue_N ,将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞 ,经过三轮蚀斑纯化和PCR鉴定 ,获得重组杆状病毒rBac_N。SDS_PAGE分析和Westernblot检测的结果表明核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞内获得表达 ,融合蛋白表达量占细胞蛋白总量的 19.4 展开更多
关键词 鸡传染性支气管炎病毒 核蛋白 基因序列 重组杆状病毒 表达
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基因工程杆状病毒杀虫剂的发展与潜力 被引量：1
16
作者 Bonning B.C. Hammock B. D. 钱纪放 《国外农学（蚕业）》 1993年第4期12-22,共11页
一、前言杀虫剂的国际市场是非常巨大的。在每年200亿美元的世界农药市场中,生物杀虫剂所占比重不到1％。其中杆状病毒杀虫剂占0.2％。应用生防制剂获得相对地讲并不算多的效益,已经给工业投资提供了小小的刺激。然而,害虫对合成化学农... 一、前言杀虫剂的国际市场是非常巨大的。在每年200亿美元的世界农药市场中,生物杀虫剂所占比重不到1％。其中杆状病毒杀虫剂占0.2％。应用生防制剂获得相对地讲并不算多的效益,已经给工业投资提供了小小的刺激。然而,害虫对合成化学农药抗性水平的提高,公众对食物中化学农药可能引起健康问题的忧虑。 展开更多
关键词 杀虫剂 杆状病毒 基因工程
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表达鸡传染性支气管炎病毒SD/97/01株S1蛋白的重组杆状病毒的构建 被引量：4
17
作者 戴亚斌 陈德胜 +6 位作者 丁铲 潘杰彦 刘兴友 芦银华 刘梅 陈溥言 蔡宝祥 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期487-492,共6页
采用BAC TO BAC 杆状病毒表达载体系统构建了表达鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)呼吸型毒株SD/ 97/ 0 1S1蛋白的重组杆状病毒 .含SD/ 97/ 0 1株S1基因的重组质粒pMDSD970 1S1用BamHI和SalI双酶切后 ,回收目的片段并克隆到杆状病毒转座载体p... 采用BAC TO BAC 杆状病毒表达载体系统构建了表达鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)呼吸型毒株SD/ 97/ 0 1S1蛋白的重组杆状病毒 .含SD/ 97/ 0 1株S1基因的重组质粒pMDSD970 1S1用BamHI和SalI双酶切后 ,回收目的片段并克隆到杆状病毒转座载体pFASTBAC HTa中多角体基因启动子的下游 ,筛选出重组转座质粒pFASTSD970 1S1并转化大肠杆菌DH10 BAC 后 ,获得重组穿梭质粒rBacmidSD970 1S1.用重组穿梭质粒DNA转染昆虫Sf9细胞 ,获得了含SD/ 97/ 0 1S1基因的重组杆状病毒rAcSD970 1S1.重组病毒感染Sf9细胞后 ,用SDS PAGE、Westernblot和IFA对细胞表达产物进行检测和分析 .结果表明 :构建的重组杆状病毒能够在昆虫细胞中表达SD/ 97/ 0 1的S1蛋白 ,该蛋白具有天然蛋白的抗原性 . 展开更多
关键词 鸡 传染性支气管炎病毒 SD/97/01 S1基因 S1蛋白 杆状病毒表达载体 基因表达 基因重组
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表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组假型杆状病毒对SPF鸡的免疫原性分析 被引量：3
18
作者 樊惠英 罗琼 +3 位作者 陈筱薇 叶昱 辛朝安 廖明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期256-261,共6页
本研究旨在对本实验室所构建的表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)的免疫保护效果进行探讨。以2×109 pfu剂量的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)腿部肌肉注射7日龄SPF雏鸡,21日龄加强免疫1次。血清抗体检... 本研究旨在对本实验室所构建的表达鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)的免疫保护效果进行探讨。以2×109 pfu剂量的重组假型杆状病毒(Ac-V-S1)腿部肌肉注射7日龄SPF雏鸡,21日龄加强免疫1次。血清抗体检测表明,灭活疫苗组诱导的IBV特异性ELISA抗体水平最高,极显著高于其它试验组(P<0.01),其次是Prime-boost组(先免疫Ac-V-S1后免疫poly156S1亚单位疫苗)和Ac-V-S1组;但在细胞免疫水平方面,Ac-V-S1免疫组表现出较强的优势,免疫应答反应极显著的高于其它免疫组(P<0.01),然后是Prime-boost组和杆状病毒野毒对照组。二免后2周用IBV M41强毒进行攻毒保护试验。结果表明,Ac-V-S1、Ac-V-EGFP、poly156S1亚单位疫苗组的保护率分别为55%(6/11)、27%(3/11)、37%(4/11),而采用Prime-boost免疫组的保护率为64%(7/11),略低于免疫保护率为73%的常规灭活疫苗(8/11)。结果显示:重组杆状病毒Ac-V-S1具有较好的免疫效果,而且在细胞免疫方面具有较强优势,可以弥补重组杆状病毒在体液免疫水平的不足,而Prime-boost免疫策略能更进一步提高重组杆状病毒免疫效果,为将重组杆状病毒发展为经济有效的IBV基因工程疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 重组杆状病毒 S1基因 免疫保护
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鸡传染性支气管炎病毒DB株核蛋白基因的克隆及在杆状病毒系统中的表达 被引量：3
19
作者 高磊 王玮 +3 位作者 刘胜旺 谷守林 孔宪刚 蔡红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期168-171,共4页
利用PT_PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)DB株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,DB株IBV的核蛋白基因长度为 12 30bp ,编码蛋白由 4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现DB株与澳大利亚群毒... 利用PT_PCR方法扩增鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)DB株的核蛋白基因 ,并对其序列进行了测定 ,DB株IBV的核蛋白基因长度为 12 30bp ,编码蛋白由 4 0 9个氨基酸残基组成。与已发表的参考毒株进行核苷酸同源性比较 ,发现DB株与澳大利亚群毒株的亲缘关系最为密切。同时构建了杆状病毒重组转移载体pBlue_DB_N ,将其与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞 ,经过 3轮蚀斑纯化和聚合酶链式反应 (PCR)鉴定 ,获得重组杆状病毒rBac_DB_N。SDS_PAGE分析和Westernblot检测的结果表明DB株IBV核蛋白基因在重组杆状病毒感染的Sf9昆虫细胞内获得表达 ,融合蛋白最大表达量占细胞蛋白总量的19 .4 展开更多
关键词 传染性支气管炎 核蛋白 重组杆状病毒 病毒DB株 基因克隆 鸡
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重组昆虫杆状病毒杀虫剂研究进展 被引量：4
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作者 袁哲明 游兰韶 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期494-498,共5页
从亲本病毒及其启动子的选择 ,外源毒素基因、昆虫专性激素和酶基因、增效基因、标记基因、宿主反义RNA基因的引入 ,病毒自身基因的修饰以及重组病毒的安全性等方面综述了该领域的最新研究进展 .
关键词 昆虫杆状病毒 重组病毒 基因工程 病毒杀虫剂
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