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小鼠耳蜗神经营养因子-3基因的克隆及其基因工程细胞模型的建立
被引量：
1
1
作者
高下
王锦玲
+3 位作者
杨安钢
许彦鸣
王枫
高辉
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
2002年第1期27-30,共4页
目的 克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子－３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－３，ＮＴ３）基因，并转染该基因至体外培养的Ｔ淋巴细胞系的Ｊｕｒｋａｔ细胞，建立能够表达和分泌ＮＴ３的基因工程细胞模型，为后续体内应用作准备。方法 用反转...
目的 克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子－３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－３，ＮＴ３）基因，并转染该基因至体外培养的Ｔ淋巴细胞系的Ｊｕｒｋａｔ细胞，建立能够表达和分泌ＮＴ３的基因工程细胞模型，为后续体内应用作准备。方法 用反转录ＰＣＲ方法扩增ＮＴ３基因，定向克隆入测序载体ｐＵＣ１９。酶切和测序鉴定正确后，再以ｐＵＣ１９－ＮＴ３质粒为模板，通过 ＰＣＲ方法得到上下游能够与 ｐＣＤＮＡ３载体中酶切位点匹配的ＮＴ３片段，进一步克隆获得 ｐＣＤＮＡ３－ＮＴ３质粒。酶切鉴定正确的质粒经阳离子脂质体包埋转染入Ｊｕｒｋａｔ细胞，通过Ｇ４１８反复筛选后，有克隆形成再扩大培养；收集部分细胞提取其中的总ＲＮＡ，反转录ＰＣＲ检测有无ＮＴ３基因片段存在；并利用这些细胞的培养上清鉴定有无生物学活性。结果 正确克隆的小鼠耳蜗组织ＮＴ３基因转染Ｊｕｒｋａｔ细胞后，能够表达和分泌ＮＴ３蛋白并具有生物学活性，促进离体毛细胞和听觉神经元的存活。结论 在体外建立表达ＮＴ３基因并分泌ＮＴ３蛋白的基因工程细胞模型是可行的，为进一步应用到体内治疗感音神经性聋奠定了实验基础。
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关键词
神经营养因子-3
耳蜗
克隆
基因
治疗
基因工程细胞模型
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职称材料
题名
小鼠耳蜗神经营养因子-3基因的克隆及其基因工程细胞模型的建立
被引量：
1
1
作者
高下
王锦玲
杨安钢
许彦鸣
王枫
高辉
机构
第四军医大学西京医院耳鼻咽喉科
第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室
出处
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
2002年第1期27-30,共4页
文摘
目的 克隆小鼠耳蜗组织神经营养因子－３（ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｎ－３，ＮＴ３）基因，并转染该基因至体外培养的Ｔ淋巴细胞系的Ｊｕｒｋａｔ细胞，建立能够表达和分泌ＮＴ３的基因工程细胞模型，为后续体内应用作准备。方法 用反转录ＰＣＲ方法扩增ＮＴ３基因，定向克隆入测序载体ｐＵＣ１９。酶切和测序鉴定正确后，再以ｐＵＣ１９－ＮＴ３质粒为模板，通过 ＰＣＲ方法得到上下游能够与 ｐＣＤＮＡ３载体中酶切位点匹配的ＮＴ３片段，进一步克隆获得 ｐＣＤＮＡ３－ＮＴ３质粒。酶切鉴定正确的质粒经阳离子脂质体包埋转染入Ｊｕｒｋａｔ细胞，通过Ｇ４１８反复筛选后，有克隆形成再扩大培养；收集部分细胞提取其中的总ＲＮＡ，反转录ＰＣＲ检测有无ＮＴ３基因片段存在；并利用这些细胞的培养上清鉴定有无生物学活性。结果 正确克隆的小鼠耳蜗组织ＮＴ３基因转染Ｊｕｒｋａｔ细胞后，能够表达和分泌ＮＴ３蛋白并具有生物学活性，促进离体毛细胞和听觉神经元的存活。结论 在体外建立表达ＮＴ３基因并分泌ＮＴ３蛋白的基因工程细胞模型是可行的，为进一步应用到体内治疗感音神经性聋奠定了实验基础。
关键词
神经营养因子-3
耳蜗
克隆
基因
治疗
基因工程细胞模型
Keywords
Neurotrophin-3 Cochlea Clone Gene therapy
分类号
R764 [医药卫生—耳鼻咽喉科]
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作者
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1
小鼠耳蜗神经营养因子-3基因的克隆及其基因工程细胞模型的建立
高下
王锦玲
杨安钢
许彦鸣
王枫
高辉
《听力学及言语疾病杂志》
CAS
CSCD
2002
1
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