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密码子优化α-L-鼠李糖苷酶基因在酿酒酵母细胞的表面展示表达及产物的酶学性质 被引量:6
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作者 王方芹 张凡 +3 位作者 何姝 李文静 罗姮 王俊 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期638-647,共10页
桑树富含黄酮苷类化合物,利用糖苷酶生物转化可有效提高其生物利用度,对挖掘桑树资源的药食用价值具有重要意义。天然来源的糖苷酶催化选择性强,但异源表达量低。以源自黑曲霉(Aspergillus niger)的α-L-鼠李糖苷酶基因rha为目的基因,... 桑树富含黄酮苷类化合物,利用糖苷酶生物转化可有效提高其生物利用度,对挖掘桑树资源的药食用价值具有重要意义。天然来源的糖苷酶催化选择性强,但异源表达量低。以源自黑曲霉(Aspergillus niger)的α-L-鼠李糖苷酶基因rha为目的基因,改善该基因的密码子偏爱性和适应性,将密码子优化后的corha基因展示表达到酿酒酵母细胞表面,以达到高效催化的实用目的。与转入原始rha基因的重组酿酒酵母菌株相比,转入密码子优化corha基因的重组酿酒酵母菌株表面展示coRHA蛋白的表达量提高了2.9倍,培养60 h后coRHA的酶活力提高了2.7倍。以对硝基苯-α-L-鼠李糖苷(p NPR)为底物检测含corha基因重组菌株生产coRHA的酶活力,其最适p H及温度分别为5.0和45℃;以芦丁为底物,在p H 5.0、60℃条件下,coRHA水解芦丁合成异槲皮苷的得率为79.81%±3.1%。采用系统密码子优化策略,为利用工程菌工业化生产coRHA,用于催化桑树黄酮苷类化合物定向水解提供了可行的方法。 展开更多
关键词 α-L-鼠李糖苷酶 基因密码子 酿酒酵母 表面展示 酶学性质 黄酮苷类化合物
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中国健康人PrP基因129位点密码子多态性研究 被引量:4
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作者 南善姬 赵节绪 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期140-142,共3页
目的 探索中国健康人PrP基因 12 9位点密码子的多态性。方法 取 6 0名健康人基因组后 ,用PCR法扩增PrP基因的外显子 ,最后用NspⅠ酶切 ,进而对PrP基因 12 9位点多态性进行分析。 结果  6 0例健康人中 ,5 2例为甲硫氨酸(Met) /甲硫氨... 目的 探索中国健康人PrP基因 12 9位点密码子的多态性。方法 取 6 0名健康人基因组后 ,用PCR法扩增PrP基因的外显子 ,最后用NspⅠ酶切 ,进而对PrP基因 12 9位点多态性进行分析。 结果  6 0例健康人中 ,5 2例为甲硫氨酸(Met) /甲硫氨酸 (Met) ,8例为甲硫氨酸 (Met) /缬氨酸 (Val)。结论 东西方人PrP基因 12 9位点密码子Met/Met型、Met/Val型与Val/Val比例不同 ,而且根据现有报道东方人中缺乏Val/Val型。 展开更多
关键词 PrP基因129位点密码子 多态性 克-雅氏病 朊蛋白病 疯牛病
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基因编码非天然氨基酸技术及其在生物医学领域的应用 被引量:1
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作者 朱银雪 王德祥 +3 位作者 孔影 陆文捷 叶慧 郝海平 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期383-391,共9页
人体内蛋白质通常由20种天然氨基酸组成。氨基酸的不同排列组合及立体构象是构建丰富多样性的蛋白质的基础。近年来开发的突破性基因密码子拓展技术通过向目标蛋白质中定向引入非天然氨基酸,能够赋予原有的靶蛋白以共价结合邻近蛋白质... 人体内蛋白质通常由20种天然氨基酸组成。氨基酸的不同排列组合及立体构象是构建丰富多样性的蛋白质的基础。近年来开发的突破性基因密码子拓展技术通过向目标蛋白质中定向引入非天然氨基酸,能够赋予原有的靶蛋白以共价结合邻近蛋白质、携带荧光基团、模拟蛋白质的翻译后修饰等新的生物学特性。本文从非天然氨基酸的结构和功能出发,介绍了不同类型的非天然氨基酸分别在调节蛋白质稳定性、研究蛋白质构象、表达水平、定位以及识别和增强蛋白质间亲和作用等方面的用途。此外,基因编码非天然氨基酸技术在生物医学领域的应用前景,将为生物药物的设计及优化提供全新的思路和方法。 展开更多
关键词 非天然氨基酸 基因密码子拓展技术 蛋白质 反应性 荧光基团 翻译后修饰 生物药物
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钙调素基因(HcCaM7)及其蛋白乙酰化修饰参与红麻响应非生物胁迫的作用
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作者 黄震 吴启境 +10 位作者 陈灿妮 吴霞 曹珊 张辉 岳娇 胡亚丽 罗登杰 李赟 廖长君 李茹 陈鹏 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期402-413,共12页
钙调素是一类钙依赖性调节蛋白,参与植物的生长发育、抗逆胁迫等多种生物学过程。本课题组前期通过蛋白质乙酰化修饰组学研究发现,红麻钙调素蛋白7的乙酰化修饰参与了红麻花粉的发育调控。为研究其参与抗逆性的机制,本研究以红麻保持系... 钙调素是一类钙依赖性调节蛋白,参与植物的生长发育、抗逆胁迫等多种生物学过程。本课题组前期通过蛋白质乙酰化修饰组学研究发现,红麻钙调素蛋白7的乙酰化修饰参与了红麻花粉的发育调控。为研究其参与抗逆性的机制,本研究以红麻保持系P3B双核期的花药为材料,使用PCR法克隆了钙调素基因HcCaM7,最大开放阅读框(open reading frame,ORF)为450 bp,其由149个氨基酸组成,编码相对分子质量16.85 kD的蛋白;亚细胞定位结果显示,HcCaM7蛋白的表达主要定位在细胞质和细胞膜中;利用病毒诱导的基因沉默技术沉默HcCaM7基因,导致红麻沉默植株的生长受到抑制;进一步在体外采用基因密码子扩展技术对发生乙酰化修饰氨基酸位点进行突变,成功获得具有体外乙酰化修饰位点的蛋白HcCaM7mut,并成功诱导表达了无乙酰化修饰的蛋白HcCaM7,结果表明HcCaM7蛋白发生乙酰化修饰后可以显著促进NADK(NAD激酶)活性;用点板法检测含有HcCaM7蛋白和HcCaM7mut蛋白的重组菌在盐(400 mmol L^(-1)和500 mmol L^(-1)NaCl)、干旱(400 mmol L^(-1)和600 mmol L^(-1)甘露醇)、重金属(30 mmol L^(-1)和50μmol L^(-1)CdCl2)及低温胁迫后(利用液氮反复冻融模拟)在LB固体培养基上的存活率发现,含有HcCaM7蛋白的重组菌存活率显著高于空载对照菌,而含有乙酰化修饰的HcCaM7mut蛋白的重组菌存活率进一步提升,表明HcCaM7蛋白能够提高大肠杆菌对非生物胁迫的耐受性,并且乙酰化修饰后效果更佳。因此,HcCaM7基因可以调控红麻生长发育和响应非生物胁迫,乙酰化修饰可以促进HcCaM7蛋白发挥作用。 展开更多
关键词 红麻 钙调素蛋白7 蛋白乙酰化修饰 病毒诱导的基因沉默 基因密码子扩展技术 非生物胁迫
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非天然氨基酸pBpa在IL1β抗原表位的嵌入及其表征
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作者 李闰婷 马韩轲 +4 位作者 张丽萌 聂晓宁 代冰雪 王林青 陈龙欣 《天津师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第6期23-28,共6页
为了探究表位中嵌入光敏型非天然氨基酸的蛋白质与其特异性抗体的光交联反应及其产物,基于基因密码子扩展技术,原核表达嵌入携带功能基团的非天然氨基酸蛋白质IL1β-L67pBpa,通过Western blot方法验证该突变体蛋白及其抗体的光交联功能... 为了探究表位中嵌入光敏型非天然氨基酸的蛋白质与其特异性抗体的光交联反应及其产物,基于基因密码子扩展技术,原核表达嵌入携带功能基团的非天然氨基酸蛋白质IL1β-L67pBpa,通过Western blot方法验证该突变体蛋白及其抗体的光交联功能.结果表明,本研究成功构建了pET28a-IL1β-L67TAG突变体质粒用于原核表达,在蛋白质的指定位点嵌入非天然氨基酸pBpa,并得到了高效表达的IL1β-L67pBpa.365 nm紫外光照射后,该突变体中的非天然氨基酸pBpa光敏基团与抗体中的氨基酸在空间距离靠近时,pBpa嵌合体能与其表位抗体(康纳单克隆抗体)通过共价键的光交联形成新的复合物.本研究证实了将非天然氨基酸(活性基团)插入到蛋白质特定位点的可行性. 展开更多
关键词 非天然氨基酸 基因密码子扩展技术 抗体 蛋白质相互作用 光交联
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