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鸡白介素18基因原核表达质粒构建被引量：5: 1; 作者温纳相黄青云 +2 位作者陈荣光曹素芳陈金顶《动物医学进展》 CSCD 2003年第5期78-80,共3页; 根据已发表的江西土鸡白介素 -1 8(Ch IL-1 8) c DNA编码基因序列设计引物 ,用PCR技术从 p MDCh IL-1 8质粒扩增出编码鸡IL-1 8成熟蛋白基因 ,重组于 p BV2 2 0表达载体上 ,将重组质粒转化大肠杆菌 JM1 0 9(DE3 ) ,转化子经温度诱导的... 展开更多; 关键词鸡白介素18 基因原核表达质粒江西氨基酸生物学特性; 在线阅读下载PDF 职称材料

结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达被引量：1: 2; 作者陈全骆旭东 +2 位作者蒋英江山朱道银《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期4-7,共4页; 目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经... 展开更多; 关键词结核分枝杆菌基因原核表达载体克隆重组ESAT6蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

恙虫病东方体Gilliam株56kDa蛋白部分基因的原核表达及初步鉴定被引量：4: 3; 作者操敏郭恒彬 +5 位作者郁兴明张云朱进王长军吴光华唐家琪《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期82-85,共4页; 目的　对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa蛋白部分基因进行原核表达 ,以获得高效表达、有生物活性目的蛋白 ,为恙虫病诊断试剂的研制打下基础。方法　根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码5 6kDa抗原... 展开更多; 关键词恙虫病东方体 Gilliam 56kDa蛋白基因原核表达鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究被引量：16: 4; 作者布日额李宝臣 +2 位作者马波王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页; 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 展开更多; 关键词鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物间接-ELISA Dot—ELISA; 在线阅读下载PDF 职称材料

草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化被引量：2: 5; 作者薄慧杰卢长明 +4 位作者吴刚武玉花肖玲白延红陈耀锋《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第2期83-87,共5页; 通过PCR扩增,从pCAMBIA1300-bar质粒中获得bar基因编码区全长,经酶切鉴定和测序后证实,bar基因分离成功。用BamH和Hind酶切,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组质粒pET28bar。将重组质粒pET28 bar转化大肠杆菌菌株BL21(D... 展开更多; 关键词抗除草剂基因bar原核表达蛋白纯化转基因产品检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

水貂细小病毒VP2基因的可溶性表达优化及包涵体蛋白复性研究被引量：6: 6; 作者朱翔宇蔡熙姮 +8 位作者史宁王洋由海波鲁荣光闫喜军侯金利李滋睿胡博徐超《动物医学进展》北大核心 2020年第6期1-6,共6页; 为探究水貂细小病毒(MEV)VP2蛋白的结构和功能,对MEV VP2蛋白进行原核表达并纯化,用ELISA初步评价重组蛋白在血清学诊断中的价值。通过大肠埃希菌表达外源基因的方法构建MEV VP2原核表达体系,经诱导表达得到以包涵体形式存在的目的蛋白... 展开更多; 关键词水貂细小病毒 VP2基因原核表达可溶性蛋白包涵体复性血清学评价; 在线阅读下载PDF 职称材料

伪狂犬病毒截短VP5蛋白原核表达与鉴定: 7; 作者门鹏《山东畜牧兽医》 2015年第1期1-3,共3页; 以全长PRV基因组DNA为模板,PCR法扩增截短的伪狂犬病毒VP5基因,将其克隆至p ET-28a载体中,构建重组原核表达质粒p ET-28a-VP5,转化至大肠杆菌BL21中,并诱导表达;表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果表明,重组表达蛋... 展开更多; 关键词伪狂犬病毒 VP5 原核基因表达抗体鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸡白介素18基因原核表达质粒构建被引量：5: 1; 作者温纳相黄青云陈荣光曹素芳陈金顶; 机构华南农业大学兽医学院; 出处《动物医学进展》 CSCD 2003年第5期78-80,共3页; 基金华南农业大学校长基金 (5 5 0 0 - K0 2 14 0 ); 文摘根据已发表的江西土鸡白介素 -1 8(Ch IL-1 8) c DNA编码基因序列设计引物 ,用PCR技术从 p MDCh IL-1 8质粒扩增出编码鸡IL-1 8成熟蛋白基因 ,重组于 p BV2 2 0表达载体上 ,将重组质粒转化大肠杆菌 JM1 0 9(DE3 ) ,转化子经温度诱导的表达产物 ,SDS-PAGE电泳鉴定约 2万 ,N端开头 1 5个氨基酸序列测定分析 ,证明获得了鸡 IL-1 8成熟蛋白 ,为今后深入研究鸡 IL -1; 关键词鸡白介素18 基因原核表达质粒江西氨基酸生物学特性; Keywords chicken interleukin 18 PCR prokaryotic expression; 分类号 S858.31 [农业科学—临床兽医学] Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达被引量：1: 2; 作者陈全骆旭东蒋英江山朱道银; 机构重庆医科大学基础医学院微生物学教研室; 出处《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期4-7,共4页; 基金重庆市卫生局科学基金(00-1006); 文摘目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经IPTG诱导,pQE30-ESAT6未表达目的蛋白,而pET32a(+)-ESAT6表达出19kDa左右重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h重组蛋白表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的42％,用Western blotting证实其有良好的抗原性。经过Ni-NTA柱纯化,获得了纯度为92％的重组蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET32a(+)-ESAT6,并获得重组ESAT6蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定基础。; 关键词结核分枝杆菌基因原核表达载体克隆重组ESAT6蛋白; Keywords Mycobacterium tuberculosis(MTb) ESAT6 gene Recombinant ESAT6; 分类号 R378.911 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名恙虫病东方体Gilliam株56kDa蛋白部分基因的原核表达及初步鉴定被引量：4: 3; 作者操敏郭恒彬郁兴明张云朱进王长军吴光华唐家琪; 机构南京军区联勤部军事医学研究所; 出处《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第3期82-85,共4页; 基金军区"十五"指令性课题资助项目; 文摘目的　对恙虫病东方体Gilliam株 5 6kDa蛋白部分基因进行原核表达 ,以获得高效表达、有生物活性目的蛋白 ,为恙虫病诊断试剂的研制打下基础。方法　根据Gilliam株东方体 5 6kDa蛋白基因序列设计特定引物 ,用PCR法扩增出编码5 6kDa抗原富含亲水区及同源性高的C端一段长约 70 0bp的DNA ,插入原核载体PGEX - 4T - 2 ,转化大肠杆菌TGI ,抽提质粒 ,酶切鉴定 ,含插入片段的重组质粒进行序列分析 ,再转化表达宿主菌大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,用SDS -PAGE及Western -blot进行分析鉴定。结果　SDS -PAGE检测表明该截短片段以融合蛋白的方式得到成功表达 ,在相对分子量 5 8kDa处有表达条带 ,经薄层扫描分析 ,目的蛋白条带占全菌蛋白的 30 5 %。Western -blot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清识别。结论　表达产物初步鉴定具有生物活性。; 关键词恙虫病东方体 Gilliam 56kDa蛋白基因原核表达鉴定; Keywords Orientia tsutsugamushi truncated 56kDa protein gene expression Diagnosis; 分类号 R376.2 [医药卫生—病原生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究被引量：16: 4; 作者布日额李宝臣马波王君伟 Ulrich Neumann; 机构东北农业大学动物医学院农业部青岛动植物检疫局汉诺威兽医学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页; 基金黑龙江省教育厅科学技术研究项目(重大项目10541z004); 文摘利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。; 关键词鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物间接-ELISA Dot—ELISA; Keywords goose parvovirus recombinant VP3 gene prokaryotic expression product indirect ELISA Dot-ELISA; 分类号 S854.43 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化被引量：2: 5; 作者薄慧杰卢长明吴刚武玉花肖玲白延红陈耀锋; 机构西北农林科技大学农学院中国农业科学院油料作物研究所杨凌职业技术学院生物工程系; 出处《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第2期83-87,共5页; 基金农业部948项目"农业转基因生物及其产品安全检测技术关键设备及相关材料的引进"(200522) 国家社会公益事业专项"转基因油菜转化特异性检测方法研究"(2005); 文摘通过PCR扩增,从pCAMBIA1300-bar质粒中获得bar基因编码区全长,经酶切鉴定和测序后证实,bar基因分离成功。用BamH和Hind酶切,将bar基因与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组质粒pET28bar。将重组质粒pET28 bar转化大肠杆菌菌株BL21(DE3)后,获得高效表达。SDS-PAGE电泳分析显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在,蛋白质分子量约为27 ku。将包涵体离心、洗涤和纯化后,得到高纯度的目的蛋白。该蛋白可以替代植物外源蛋白进行转bar基因产品的食用安全性检测,也可用于转bar基因产品ELISA检测的抗体制备。; 关键词抗除草剂基因bar原核表达蛋白纯化转基因产品检测; Keywords herbicide resistant bar gene prokaryotic expression protein purification GMO detection; 分类号 Q786 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名水貂细小病毒VP2基因的可溶性表达优化及包涵体蛋白复性研究被引量：6: 6; 作者朱翔宇蔡熙姮史宁王洋由海波鲁荣光闫喜军侯金利李滋睿胡博徐超; 机构中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林农业大学动物科学技术学院辛庄畜牧兽医中心站; 出处《动物医学进展》北大核心 2020年第6期1-6,共6页; 基金国家重点研发计划项目(2017YFD0501600)。; 文摘为探究水貂细小病毒(MEV)VP2蛋白的结构和功能,对MEV VP2蛋白进行原核表达并纯化,用ELISA初步评价重组蛋白在血清学诊断中的价值。通过大肠埃希菌表达外源基因的方法构建MEV VP2原核表达体系,经诱导表达得到以包涵体形式存在的目的蛋白,对蛋白进行纯化、透析复性并鉴定;加入分子伴侣pTf16质粒构建共表达系统,优化表达条件以提升可溶性目的蛋白的表达量,对表达产物进行纯化及鉴定。将纯化后的可溶性蛋白、复性后的包涵体蛋白及纯化后的全病毒蛋白作为抗原包被酶标板,用间接ELISA方法对MEV标准阴、阳性血清进行检测,初步对比评价3种抗原的血清学诊断价值。结果表明,经过双酶切和测序鉴定,成功构建重组蛋白原核表达载体;重组VP2蛋白的分子质量约为67 ku;优化诱导温度和诱导试剂浓度未能解决包涵体表达问题;构建了共表达系统,优化表达条件后可溶性目的蛋白的表达量得到明显提高;SDS-PAGE和Western blot鉴定结果表明,两种重组蛋白皆具有良好的反应原性;间接ELISA结果表明可溶性表达蛋白更适合作为MEV的候选诊断抗原。通过分子伴侣共表达和包涵体蛋白复性的方法获得了大量有活性的目的蛋白,为建立水貂细小病毒血清学诊断方法和制备MEV病毒样颗粒(VLPs)及VP2蛋白多克隆抗体奠定了基础。; 关键词水貂细小病毒 VP2基因原核表达可溶性蛋白包涵体复性血清学评价; Keywords Mink enteritis virus prokaryotic expression of VP2 gene soluble protein inclusion body renaturation serologic evaluation; 分类号 S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名伪狂犬病毒截短VP5蛋白原核表达与鉴定: 7; 作者门鹏; 机构山东畜牧兽医职业学院; 出处《山东畜牧兽医》 2015年第1期1-3,共3页; 文摘以全长PRV基因组DNA为模板,PCR法扩增截短的伪狂犬病毒VP5基因,将其克隆至p ET-28a载体中,构建重组原核表达质粒p ET-28a-VP5,转化至大肠杆菌BL21中,并诱导表达;表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,进行纯化。结果表明,重组表达蛋白可以与PRV阳性血清及标签HIS单克隆抗体发生特异性反应。通过成功构建了PRV截短VP5基因重组原核表达质粒p ET-28a-VP5,原核表达并纯化了重组蛋白,为伪狂犬病毒特异性诊断抗原的开发、疫苗的研制及细胞生物学研究奠定了基础。; 关键词伪狂犬病毒 VP5 原核基因表达抗体鉴定; 分类号 S852.655 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	鸡白介素18基因原核表达质粒构建	温纳相黄青云陈荣光曹素芳陈金顶	《动物医学进展》 CSCD	2003	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达	陈全骆旭东蒋英江山朱道银	《重庆医科大学学报》 CAS CSCD	2003	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	恙虫病东方体Gilliam株56kDa蛋白部分基因的原核表达及初步鉴定	操敏郭恒彬郁兴明张云朱进王长军吴光华唐家琪	《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心	2003	4	在线阅读下载PDF 职称材料
4	应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究	布日额李宝臣马波王君伟 Ulrich Neumann	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2006	16	在线阅读下载PDF 职称材料
5	草胺膦抗性基因bar的原核表达与蛋白质纯化	薄慧杰卢长明吴刚武玉花肖玲白延红陈耀锋	《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2007	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	水貂细小病毒VP2基因的可溶性表达优化及包涵体蛋白复性研究	朱翔宇蔡熙姮史宁王洋由海波鲁荣光闫喜军侯金利李滋睿胡博徐超	《动物医学进展》北大核心	2020	6	在线阅读下载PDF 职称材料
7	伪狂犬病毒截短VP5蛋白原核表达与鉴定	门鹏	《山东畜牧兽医》	2015	0	在线阅读下载PDF 职称材料