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耐热β-甘露聚糖酶基因的克隆与表达及酶学性质 被引量:9
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作者 赵梅 魏喜换 +3 位作者 王春娟 董运海 李剑芳 邬敏辰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期590-596,共7页
基于生物信息学和基因组学分析的结果,采用RT-PCR技术从宇佐美曲霉(AspergiLLus usamii)E001中克隆出一种糖苷水解酶(GH) 26家族β-甘露聚糖酶(AuMan26A)成熟肽编码基因(A uman26A),成功实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS... 基于生物信息学和基因组学分析的结果,采用RT-PCR技术从宇佐美曲霉(AspergiLLus usamii)E001中克隆出一种糖苷水解酶(GH) 26家族β-甘露聚糖酶(AuMan26A)成熟肽编码基因(A uman26A),成功实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中的异源表达.重组β-甘露聚糖酶(reAuMan26A)的发酵上清液对角豆胶的酶活性为281.9 U/mL,纯化后比酶活为2281.7 U/mg.其最造反应温度Topt为40℃;在80℃处理60 min后残留酶活性为60%;90℃时的半衰期T1/290为10 min,处理60 min后残留酶活性仍为33%;其最适pH为5.5,在pH 5.0~7.0的范围内较稳定;Fe^2+和Fe^3+对其有明显的抑制作用,其它所测金属离子和EDTA对其没有明显的影响;所测酶的最适底物为角豆胶,其次是魔芋粉和瓜尔豆胶,其对角豆胶的Km和Vmax值分别为15.25 mg/mL和7 841.9 U/mg.reAuMan26A良好的热稳定性使其在食品、饲料和纺织等工业具有广阔的应用前景. 展开更多
关键词 Β-甘露聚糖酶 耐热性 基因克隆和表达 酶学性质
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半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)gnrh2基因克隆、组织分布及卵巢成熟过程中表达分析 被引量:2
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作者 王滨 柳学周 +3 位作者 刘权 赵明 徐永江 史宝 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第1期63-72,共10页
为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qP... 为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长c DNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untranslated region,UTR)为154 bp,3'UTR为126 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为258 bp,编码85个氨基酸的前体多肽,其分子量及等电点分别为9.69 k Da和8.55。GnRH2前体多肽由信号肽、GnRH2十肽、酶切位点(GKR)以及GnRH相关肽共4部分组成。序列比对分析发现,GnRH2在鱼类中同源性极高,尤其是十肽(QHWSHGWYPG)在所有硬骨鱼类中完全相同。半滑舌鳎GnRH2与鲈形目同源性最高(89.41%–90.59%),其次为鲽形目、鲑形目和鲀形目(78.82%–85.88%),与鲤形目同源性最低(61.18%–71.76%)。gnrh2 mRNA主要在脑中表达,在垂体及其他外周组织中表达量极低。此外,组织学分析显示,半滑舌鳎卵巢发育共分为5个时期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期)。在卵巢成熟过程中,脑gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成期(Ⅲ期)显著性增加,达到峰值;随后表达量急剧下降,在成熟期(Ⅴ期)达到最小值;在排卵后期(Ⅵ期)又显著性增加。然而,在卵巢成熟过程中,垂体gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成后期(Ⅳ期)显著性降低,随后在成熟期(Ⅴ期)有所增加,但在排卵后期(Ⅵ期)又急剧下降。上述研究结果表明,脑GnRH2可能参与了半滑舌鳎卵巢发育过程。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 促性腺激素释放激素2 基因克隆和表达 卵巢成熟
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甘蓝型油菜半胱氨酸蛋白酶基因BnCP51及其启动子的克隆与表达 被引量:5
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作者 阳永学 李振波 +4 位作者 童超波 黄军艳 于景印 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期406-414,共9页
为通过转基因技术建立新型授粉控制体系,克隆与雄性不育相关的基因及启动子,根据甘蓝型油菜全基因组信息设计特异引物,获得半胱氨酸蛋白酶家族基因Bn CP51的完整开放阅读框和上游启动子序列。Bn CP51基因全长1 032bp,在Gen Bank登录号KC... 为通过转基因技术建立新型授粉控制体系,克隆与雄性不育相关的基因及启动子,根据甘蓝型油菜全基因组信息设计特异引物,获得半胱氨酸蛋白酶家族基因Bn CP51的完整开放阅读框和上游启动子序列。Bn CP51基因全长1 032bp,在Gen Bank登录号KC898325,启动子长1 951bp。生物信息学分析表明,Bn CP51具有木瓜蛋白酶基因家族典型的保守结构域ERFNIN和GCNGG功能域。实时荧光定量PCR结果表明Bn CP51在花蕾中高量表达。在线启动子序列元件预测分析发现Bn CP51启动子序列中有多个花药特异表达元件。构建重组载体p Bn CP51::GUS,转化拟南芥,GUS染色结果表明在Bn CP51启动子的驱动下,报告基因GUS仅在中期花蕾和花药中特异表达,在其他组织中不表达。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 半胱氨酸蛋白酶 木瓜蛋白酶基因家族 BN CP51基因 基因克隆和表达
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XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1的克隆、表达及序列分析 被引量:2
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作者 冯蕾 杨新平 +1 位作者 古丽努尔 陈竞 《皮革科学与工程》 CAS 2005年第4期26-30,共5页
试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基... 试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基酸序列分析对比。GP1基因全序列共1129bp,包括整个阅读框,共编码376个氨基酸。将扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体pET-28a中,构建成重组分泌型表达载体pGp1。并在大肠杆菌宿主BL21中得到表达。SDS-PAGE分析显示产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。同时,对地衣芽孢杆菌XJT9503中性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析,发现与地衣芽孢杆菌6816丝氨酸蛋白酶和地衣芽孢杆菌1411T角蛋白水解酶基因的同源性为97%。 展开更多
关键词 地衣芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 基因克隆和表达 序列分析 大肠杆菌
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猫传染性腹膜炎病毒核衣壳蛋白的表达及间接ELISA法的建立 被引量:10
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作者 熊炜 林颖峥 +5 位作者 王艳 魏晓锋 王巧全 黄忠荣 胡建华 李健 《中国动物检疫》 CAS 2014年第2期67-70,共4页
本研究对猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)N蛋白的编码基因进行克隆和原核表达,并在纯化重组N蛋白的基础上,建立了FIPV抗体间接ELISA检测方法。研究结果显示,该重组纯化的N蛋白具有良好的抗原反应性,可用于FIPV阳性血清的筛查,为我国出入境检... 本研究对猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)N蛋白的编码基因进行克隆和原核表达,并在纯化重组N蛋白的基础上,建立了FIPV抗体间接ELISA检测方法。研究结果显示,该重组纯化的N蛋白具有良好的抗原反应性,可用于FIPV阳性血清的筛查,为我国出入境检疫部门监控FIPV疫情提供技术支撑。 展开更多
关键词 猫传染性腹膜炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆和表达
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