中国林蛙Onconase样核糖核酸酶的基因克隆和表达 被引量：1

1

作者 徐宏博 王天航 +2 位作者 董安康 陶凤云 赵伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期130-134,共5页

Onconase是从美洲豹蛙卵中提取的一种核糖核酸酶,由于其抗肿瘤活性而具有潜在的临床应用价值。以中国林蛙基因组为模板,克隆了一个新的RNase基因,并由此推导出了成熟林蛙RNase的氨基酸顺序。该酶是由103个氨基酸残基组成的,它保留了RNas... Onconase是从美洲豹蛙卵中提取的一种核糖核酸酶,由于其抗肿瘤活性而具有潜在的临床应用价值。以中国林蛙基因组为模板,克隆了一个新的RNase基因,并由此推导出了成熟林蛙RNase的氨基酸顺序。该酶是由103个氨基酸残基组成的,它保留了RNase A家族成员酶催化活性必须的组氨酸和赖氨酸残基,以及CKXXNTF的序列特征,与Onconase具有73%的氨基酸顺序的相似性。林蛙酶比Onconase少一个氨基酸,成为迄今为止发现的RNaseA家族中的最小成员;并且,林蛙酶拥有的精氨酸和酪氨酸残基比Onconase多3个。此外,在利用原核表达系统对林蛙RNase基因进行表达的过程中,表达产物对宿主显示出一定的细胞毒性。 展开更多

关键词 中国林蛙 核糖核酸酶 基因克隆和表达

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耐热β-甘露聚糖酶基因的克隆与表达及酶学性质 被引量：9

2

作者 赵梅 魏喜换 +3 位作者 王春娟 董运海 李剑芳 邬敏辰 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期590-596,共7页

基于生物信息学和基因组学分析的结果,采用RT-PCR技术从宇佐美曲霉（AspergiLLus usamii）E001中克隆出一种糖苷水解酶（GH） 26家族β-甘露聚糖酶（AuMan26A）成熟肽编码基因（A uman26A）,成功实现其在毕赤酵母（Pichia pastoris）GS... 基于生物信息学和基因组学分析的结果,采用RT-PCR技术从宇佐美曲霉（AspergiLLus usamii）E001中克隆出一种糖苷水解酶（GH） 26家族β-甘露聚糖酶（AuMan26A）成熟肽编码基因（A uman26A）,成功实现其在毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中的异源表达.重组β-甘露聚糖酶（reAuMan26A）的发酵上清液对角豆胶的酶活性为281.9 U/mL,纯化后比酶活为2281.7 U/mg.其最造反应温度Topt为40℃;在80℃处理60 min后残留酶活性为60％;90℃时的半衰期T1/290为10 min,处理60 min后残留酶活性仍为33％;其最适pH为5.5,在pH 5.0～7.0的范围内较稳定;Fe^2＋和Fe^3＋对其有明显的抑制作用,其它所测金属离子和EDTA对其没有明显的影响;所测酶的最适底物为角豆胶,其次是魔芋粉和瓜尔豆胶,其对角豆胶的Km和Vmax值分别为15.25 mg/mL和7 841.9 U/mg.reAuMan26A良好的热稳定性使其在食品、饲料和纺织等工业具有广阔的应用前景. 展开更多

关键词 Β-甘露聚糖酶 耐热性 基因克隆和表达 酶学性质

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半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)gnrh2基因克隆、组织分布及卵巢成熟过程中表达分析 被引量：2

3

作者 王滨 柳学周 +3 位作者 刘权 赵明 徐永江 史宝 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2017年第1期63-72,共10页

为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qP... 为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2,GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用,本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列;通过实时荧光定量PCR(qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示,半滑舌鳎GnRH2全长c DNA序列为538 bp(不包括polyA尾),其中,5'非编码区(Untranslated region,UTR)为154 bp,3'UTR为126 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为258 bp,编码85个氨基酸的前体多肽,其分子量及等电点分别为9.69 k Da和8.55。GnRH2前体多肽由信号肽、GnRH2十肽、酶切位点(GKR)以及GnRH相关肽共4部分组成。序列比对分析发现,GnRH2在鱼类中同源性极高,尤其是十肽(QHWSHGWYPG)在所有硬骨鱼类中完全相同。半滑舌鳎GnRH2与鲈形目同源性最高(89.41%–90.59%),其次为鲽形目、鲑形目和鲀形目(78.82%–85.88%),与鲤形目同源性最低(61.18%–71.76%)。gnrh2 mRNA主要在脑中表达,在垂体及其他外周组织中表达量极低。此外,组织学分析显示,半滑舌鳎卵巢发育共分为5个时期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期)。在卵巢成熟过程中,脑gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成期(Ⅲ期)显著性增加,达到峰值;随后表达量急剧下降,在成熟期(Ⅴ期)达到最小值;在排卵后期(Ⅵ期)又显著性增加。然而,在卵巢成熟过程中,垂体gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成后期(Ⅳ期)显著性降低,随后在成熟期(Ⅴ期)有所增加,但在排卵后期(Ⅵ期)又急剧下降。上述研究结果表明,脑GnRH2可能参与了半滑舌鳎卵巢发育过程。 展开更多

关键词 半滑舌鳎 促性腺激素释放激素2 基因克隆和表达 卵巢成熟

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松鼠胰腺型核糖核酸酶A基因的克隆与表达

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作者 董安康 徐宏博 +2 位作者 陶凤云 王旭颖 赵伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期134-138,共5页

核糖核酸酶A(ribonucleases A,RNases A)构成一个大家族,其成员表现出不同程度的水解RNA的酶活性。一些成员还表现出特殊的生物学活性。旨在克隆松鼠核糖核酸酶A的基因,利用原核细胞系统表达重组蛋白,并进行初步的酶学性质的研究。结果... 核糖核酸酶A(ribonucleases A,RNases A)构成一个大家族,其成员表现出不同程度的水解RNA的酶活性。一些成员还表现出特殊的生物学活性。旨在克隆松鼠核糖核酸酶A的基因,利用原核细胞系统表达重组蛋白,并进行初步的酶学性质的研究。结果表明,所克隆的基因属于核糖核酸酶A家族,保留了核糖核酸酶A家族酶活性必要的保守序列。进化分析表明,该基因属于松鼠胰腺型核糖核酸酶基因,与其它啮齿类动物胰腺型酶一样,重组的核糖核酸酶具有酶活性,为进一步进行啮齿类动物核糖核酸酶的宿主防卫功能研究打下了基础。 展开更多

关键词 松鼠 胰腺型核糖核酸酶 基因克隆和表达

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甘蓝型油菜半胱氨酸蛋白酶基因BnCP51及其启动子的克隆与表达 被引量：5

5

作者 阳永学 李振波 +4 位作者 童超波 黄军艳 于景印 董彩华 刘胜毅 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期406-414,共9页

为通过转基因技术建立新型授粉控制体系,克隆与雄性不育相关的基因及启动子,根据甘蓝型油菜全基因组信息设计特异引物,获得半胱氨酸蛋白酶家族基因Bn CP51的完整开放阅读框和上游启动子序列。Bn CP51基因全长1 032bp,在Gen Bank登录号KC... 为通过转基因技术建立新型授粉控制体系,克隆与雄性不育相关的基因及启动子,根据甘蓝型油菜全基因组信息设计特异引物,获得半胱氨酸蛋白酶家族基因Bn CP51的完整开放阅读框和上游启动子序列。Bn CP51基因全长1 032bp,在Gen Bank登录号KC898325,启动子长1 951bp。生物信息学分析表明,Bn CP51具有木瓜蛋白酶基因家族典型的保守结构域ERFNIN和GCNGG功能域。实时荧光定量PCR结果表明Bn CP51在花蕾中高量表达。在线启动子序列元件预测分析发现Bn CP51启动子序列中有多个花药特异表达元件。构建重组载体p Bn CP51::GUS,转化拟南芥,GUS染色结果表明在Bn CP51启动子的驱动下,报告基因GUS仅在中期花蕾和花药中特异表达,在其他组织中不表达。 展开更多

关键词 甘蓝型油菜 半胱氨酸蛋白酶 木瓜蛋白酶基因家族 BN CP51基因 基因克隆和表达

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XJT-9503高温中性蛋白酶基因Gp1的克隆、表达及序列分析 被引量：2

6

作者 冯蕾 杨新平 +1 位作者 古丽努尔 陈竞 《皮革科学与工程》 CAS 2005年第4期26-30,共5页

试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基... 试验根据地衣芽孢杆菌XJT9503的高温中性蛋白酶酶蛋白所测定的N-端及部分肽段氨基酸序列及质谱分析结果设计了PCR引物,用PCR方法从地衣芽孢杆菌XJT9503中扩增了高温中性蛋白酶基因Gp1,对所获得的基因进行序列分析测定,并与蛋白酶的氨基酸序列分析对比。GP1基因全序列共1129bp,包括整个阅读框,共编码376个氨基酸。将扩增的DNA片段插入到大肠杆菌载体pET-28a中,构建成重组分泌型表达载体pGp1。并在大肠杆菌宿主BL21中得到表达。SDS-PAGE分析显示产物的分子量为27.0×103,同核酸序列测定所推导的值相符。同时,对地衣芽孢杆菌XJT9503中性蛋白酶基因序列进行了测定和比较分析,发现与地衣芽孢杆菌6816丝氨酸蛋白酶和地衣芽孢杆菌1411T角蛋白水解酶基因的同源性为97%。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 高温中性蛋白酶 基因的克隆和表达 序列分析 大肠杆菌

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橡胶树COP9家族基因的克隆及表达分析 被引量：2

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作者 吴绍华 张世鑫 +2 位作者 邓小敏 陈月异 田维敏 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期281-288,共8页

COP9信号小体(CSN)是进化上保守的蛋白复合体,在茉莉酸信号途径中起着重要的作用。橡胶树的乳管是一种特化的细胞器,是天然橡胶合成和储存的场所。现有的证据表明橡胶的生物合成可能受到茉莉酸信号途径的调控,但是对于茉莉酸信号途径调... COP9信号小体(CSN)是进化上保守的蛋白复合体,在茉莉酸信号途径中起着重要的作用。橡胶树的乳管是一种特化的细胞器,是天然橡胶合成和储存的场所。现有的证据表明橡胶的生物合成可能受到茉莉酸信号途径的调控,但是对于茉莉酸信号途径调控天然橡胶的生物合成还了解的不够。本研究采用RACE技术结合RT-PCR从胶乳中克隆了8个CSN基因的全长cDNA序列,根据与拟南芥的相似性,分别命名为HbCSN1～HbCSN8。荧光定量PCR结果显示,8个CSN基因均能在树皮、不同发育时期的叶片、胶乳、雄花和雌花中表达,其中HbCSN5在胶乳中的表达量最高,其他成员在叶片中的表达量最高。而且,部分HbCSNs基因在胶乳中的表达受到割胶和茉莉酸甲酯处理的上调表达。因此,推测这些上调表达的成员可能参与胶乳的茉莉酸信号途径。 展开更多

关键词 巴西橡胶树 COP9信号复合体 基因克隆和表达分析 进化树分析

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我国细粒棘球绦虫新疆分离株AgB8/3亚基克隆表达及其检测囊型包虫病价值分析 被引量：2

8

作者 高春花 崔刚 +3 位作者 汪俊云 杨玥涛 石锋 朱慧慧 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期966-969,共4页

目的评价重组细粒棘球蚴AgB8/3亚基检测囊型包虫病价值。方法从新疆源细粒棘球蚴原头节中提取总RNA,通过RT-PCR扩增目的基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,用ELISA... 目的评价重组细粒棘球蚴AgB8/3亚基检测囊型包虫病价值。方法从新疆源细粒棘球蚴原头节中提取总RNA,通过RT-PCR扩增目的基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,IPTG诱导表达,用亲和层析法纯化重组蛋白,用ELISA方法评价其诊断价值并与本课题组制备的重组AgB8/1和AgB8/2进行比较。结果酶切鉴定及测序分析表明,成功构建细粒棘球蚴pGEX-3X-AgB8/3重组质粒,并在原核细胞用IPTG成功诱导目的蛋白表达。rAgB8/3检测囊型包虫病患者血清的敏感度为55.9%(66/118);检测泡型包虫病患者血清阳性率为44.12%(15/34);59份其它寄生虫病患者血清中除3份囊尾蚴病人血清阳性外,其他均为阴性;50份健康者血清全部为阴性,总特异度为87.4%(125/143)。rAgB8/3检测的敏感度与rAgB8/1相当(P>0.05)而低于rAgB8/2(P<0.05);rAgB8/3检测的特异度与rAgB8/1和rAgB8/2均无统计学差异(P>0.05)。结论成功构建新疆源细粒棘球蚴pGEX-3X-AgB8/3重组质粒并在原核细胞表达,rAgB8/3检测囊型包虫病结果与rAgB8/1无统计学差异。 展开更多

关键词 细粒棘球蚴 AgB8/3亚基 基因克隆和表达 ELISA

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人纤溶酶原K1-3基因的表达及抗肿瘤作用研究

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作者 陆幸妍 张添元 罗进贤 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期835-837,841,共4页

目的:研究人纤溶酶原K1-3基因的原核表达及其产物K1-3蛋白的抗肿瘤活性。方法:构建含K1-3基因的表达载体pBV-K13;转化E.coliDH5α;热诱导表达菌株E.coliDH5α(pBV-K13)的K1-3基因表达;表达产物经溶解、复性和纯化后进行鸡胚绒毛尿囊膜(C... 目的:研究人纤溶酶原K1-3基因的原核表达及其产物K1-3蛋白的抗肿瘤活性。方法:构建含K1-3基因的表达载体pBV-K13;转化E.coliDH5α;热诱导表达菌株E.coliDH5α(pBV-K13)的K1-3基因表达;表达产物经溶解、复性和纯化后进行鸡胚绒毛尿囊膜(Chorioallantoic membrane,CAM)活性分析和小鼠B16黑色素瘤抑制实验。结果:SDS-PAGE和Western blot分析结果证实K1-3基因在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物对人纤溶酶原抗血清具有特异免疫活性,并抑制CAM毛细血管生成及小鼠B16黑色素瘤生长。结论:原核表达的K1-3蛋白具有抑制血管生成和抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 人纤溶酶原K1-3基因 基因克隆和表达 血管生成抑制 抗肿瘤

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猫传染性腹膜炎病毒核衣壳蛋白的表达及间接ELISA法的建立 被引量：10

10

作者 熊炜 林颖峥 +5 位作者 王艳 魏晓锋 王巧全 黄忠荣 胡建华 李健 《中国动物检疫》 CAS 2014年第2期67-70,共4页

本研究对猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)N蛋白的编码基因进行克隆和原核表达,并在纯化重组N蛋白的基础上,建立了FIPV抗体间接ELISA检测方法。研究结果显示,该重组纯化的N蛋白具有良好的抗原反应性,可用于FIPV阳性血清的筛查,为我国出入境检... 本研究对猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)N蛋白的编码基因进行克隆和原核表达,并在纯化重组N蛋白的基础上,建立了FIPV抗体间接ELISA检测方法。研究结果显示,该重组纯化的N蛋白具有良好的抗原反应性,可用于FIPV阳性血清的筛查,为我国出入境检疫部门监控FIPV疫情提供技术支撑。 展开更多

关键词 猫传染性腹膜炎病毒 核衣壳蛋白 基因克隆和表达

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Survivin与基因治疗 被引量：1

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作者 曾柯 杜虎 吴小候 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期331-333,共3页

Survivin是1997年发现的凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins, IAPs）家族的一个新成员，由于其独特的生物学结构，特殊的组织分布及明显的抗凋亡作用，目前越来越受到重视。基因治疗是指以DNA重组，基因转移，基因克隆和表... Survivin是1997年发现的凋亡抑制蛋白（Inhibitor of apoptosis proteins, IAPs）家族的一个新成员，由于其独特的生物学结构，特殊的组织分布及明显的抗凋亡作用，目前越来越受到重视。基因治疗是指以DNA重组，基因转移，基因克隆和表达等技术，将遗传物质转入机体细胞，以达到治疗的目的，其关键是目的基因（靶基因）的选择。本文所涉及的survivin是肿瘤基因治疗的新靶点，现将survivin的功能及与肿瘤的关系及其在肿瘤基因治疗中的作用作一综述。 展开更多

关键词 SURVIVIN 肿瘤基因治疗 SURVIVIN APOPTOSIS 基因克隆和表达 凋亡抑制蛋白 生物学结构 抗凋亡作用

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蛇足石杉内生真菌Shiraia sp.Slf14中Ⅲ型聚酮合酶的表达、纯化及生物信息学分析 被引量：4

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作者 彭思露 杨慧林 +2 位作者 李尔汉 王筱兰 朱笃 《江西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第4期430-434,共5页

竹红菌素是我国特有的一类苝醌类光敏色素,在开发新型抗肿瘤抗病毒药物、光敏活性农药及新型光电转换材料等方面应用前景广阔.聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)是合成竹红菌素的一种关键酶,通过全基因组测序及分析发现在Shiraia sp.Sl... 竹红菌素是我国特有的一类苝醌类光敏色素,在开发新型抗肿瘤抗病毒药物、光敏活性农药及新型光电转换材料等方面应用前景广阔.聚酮合酶(Polyketide synthase,PKS)是合成竹红菌素的一种关键酶,通过全基因组测序及分析发现在Shiraia sp.Slf14中存在一个III型聚酮合酶基因.利用RT-PCR技术,以其总RNA为模板,扩增得到目的片段,并成功构建表达载体p ET-22b(+)-PKSIII,采用Ni-NTA亲和层析法纯化目的蛋白,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了目的蛋白,SDS-PAGE结果显示表达重组产物分子质量约为43 k Da,与理论值一致,为III型聚酮合酶的催化活性研究提供理论依据. 展开更多

关键词 内生真菌 聚酮合酶 竹红菌素 基因克隆和表达

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酶工程的研究进展 被引量：6

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作者 黎海彬 郭宝江 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2006年第z1期40-43,共4页

酶工程是现代生物技术的重要组成部分,它作为一项高新技术将为工业的发展起重要推动作用。介绍了自然酶的开发、酶的化学和遗传修饰、酶的固定化、人工合成酶、酶基因的克隆和表达、酶的遗传设计等方面的理论和技术研究的最新进展。

关键词 酶工程 人工合成酶 酶基因的克隆和表达 固定化 遗传修饰

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