海洋微生物纤维素酶及半纤维素酶基因克隆与表达研究进展 被引量：5

1

作者 刘杰凤 马超 +1 位作者 王春 董宏坡 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期36-42,共7页

海洋极端酶因在极端环境中具有更高的酶活性及更好的稳定性而具有重要的理论价值和工业应用前景。由于海洋极端微生物培养条件苛刻,难以作为工业生产菌使用。采用基因工程技术,用常用的宿主表达极端酶基因,是开发海洋微生物酶的主要研... 海洋极端酶因在极端环境中具有更高的酶活性及更好的稳定性而具有重要的理论价值和工业应用前景。由于海洋极端微生物培养条件苛刻,难以作为工业生产菌使用。采用基因工程技术,用常用的宿主表达极端酶基因,是开发海洋微生物酶的主要研究内容。随着海洋微生物极端酶的研究开发,对海洋微生物纤维素酶、半纤维素酶的研究也逐渐受到学者们的关注,相关研究取得了较大进展。综述海洋微生物纤维素酶、半纤维素酶的基因克隆与表达的国内外研究现状。 展开更多

关键词 海洋微生物 纤维素酶 半纤维素酶 极端酶 基因克隆与表达

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泥蚶(Tegillarca granosa)精氨酸激酶的基因克隆与表达 被引量：2

2

作者 李松伟 李晔 +2 位作者 李成华 李太武 苏秀榕 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期119-123,共5页

利用PCR扩增技术,从泥蚶的cDNA文库中克隆出了精氨酸激酶(arginine kinase)基因,并进行了原核表达。精氨酸激酶是调节能量代谢的重要酶类,在无脊椎动物体内能量平衡过程中起重要作用。结果表明,泥蚶的精氨酸激酶全长1601bp,包括5′非翻... 利用PCR扩增技术,从泥蚶的cDNA文库中克隆出了精氨酸激酶(arginine kinase)基因,并进行了原核表达。精氨酸激酶是调节能量代谢的重要酶类,在无脊椎动物体内能量平衡过程中起重要作用。结果表明,泥蚶的精氨酸激酶全长1601bp,包括5′非翻译区(5′-UTR)序列332bp,3′非翻译区(3′-UTR)序列246bp、1023bp的开放阅读框序列(ORF),编码340个氨基酸,具有精氨酸激酶典型的酶活性部位氨基酸序列(CPTNLGT)。构建了原核表达质粒AK-pET-28a(+)转化表达菌株,经IPTG诱导表达后,获得了与预期的分子量大小一致的表达产物。利用该目的蛋白制备了泥蚶精氨酸激酶的特异性多克隆抗体,经Western blot证明该蛋白为精氨酸激酶。 展开更多

关键词 泥蚶 精氨酸激酶 基因克隆与表达 多克隆抗体

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毕赤酵母在基因克隆与表达中的应用 被引量：1

3

作者 占今舜 宋虎威 +2 位作者 陈宇光 李丽立 张彬 《猪业科学》 2012年第11期74-75,共2页

随着分子生物学及基因工程的发展，利用自身基因在外源细胞中的克隆与表达也受世人关注。生物表达系统的出现满足了科学发展的要求，并渐渐成为处理工农生产以及医疗：卫生等领域问题的重要手段之一。

关键词 基因克隆与表达 毕赤酵母 分子生物学 应用 基因工程 科学发展 表达系统 细胞

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毕赤酵母在基因克隆与表达中的应用

4

作者 占今舜 宋虎威 +2 位作者 陈宇光 李丽立 张彬 《猪业科学》 2012年第12期74-75,共2页

（上接第11期75页） 1）外源蛋白在酵母中表达受mRNA5＇端和3’端的UTR序列的核苷酸序列及长度的干扰比较大。为保证外源蛋白的成功表达，目的基因5’端UTR应该与AOX1基因的mRNA5’端UTR尽量相似或保持一致。

关键词 基因克隆与表达 毕赤酵母 核苷酸序列 应用 外源蛋白 目的基因

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山葡萄VaCBF1转录因子基因的克隆与表达分析 被引量：9

5

作者 王法微 刘洋 +2 位作者 吴学彦 李晓薇 李海燕 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2013年第12期86-92,共7页

【目的】克隆山葡萄(Vitis amurensis)CBF1转录因子基因(VaCBF1),为其功能的深入研究及其在植物抗寒基因工程中的应用奠定基础。【方法】根据植物CBF基因AP2/EREBP保守区设计1对简并引物,利用PCR法从山葡萄cDNA中扩增VaCBF1基因的中间... 【目的】克隆山葡萄(Vitis amurensis)CBF1转录因子基因(VaCBF1),为其功能的深入研究及其在植物抗寒基因工程中的应用奠定基础。【方法】根据植物CBF基因AP2/EREBP保守区设计1对简并引物,利用PCR法从山葡萄cDNA中扩增VaCBF1基因的中间片段。再根据中间片段区域设计2对特异引物,采用反向PCR法扩增VaCBF1基因的5′端和3′端序列。将中间片段与5′端和3′端序列拼接后得到山葡萄VaCBF1基因的cDNA全长序列,据此设计1对特异引物,PCR扩增VaCBF1基因编码区的全长序列,并对其进行生物信息学分析。同时,利用荧光定量PCR分析山葡萄VaCBF1基因在不同逆境胁迫(干旱、低温、盐胁迫)下的表达情况。【结果】成功地从山葡萄中克隆得到VaCBF1基因cDNA全长序列,其长度为762bp,编码253个氨基酸,在GenBank注册号为DQ517296。同源性分析证实,VaCBF1属于CBF转录因子家族。荧光定量PCR分析发现,低温胁迫可以诱导山葡萄VaCBF1基因高表达,而该基因的表达不受盐及干旱处理诱导。【结论】首次从山葡萄中克隆了VaCBF1基因,并证实该基因参与了植物对低温胁迫的应答。 展开更多

关键词 山葡萄 CBF转录因子 基因克隆与表达

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圆斑星鲽MHCⅠα基因的克隆与组织表达分析 被引量：4

6

作者 王娟 王宏伟 +4 位作者 刘星 李宏俊 苏浩 高祥刚 赫崇波 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第8期457-462,共6页

采用表达序列标签法和cDNA末端快速扩增（RACE）技术,成功获得了圆斑星鲽主要组织相容性复合体MHCⅠα的全长cDNA序列。该cDNA全长2171 bp,5′UTR为20 bp,3′UTR为1053bp,开放阅读框（ORF）长度为1098 bp,可编码365个氨基酸,包含信号肽... 采用表达序列标签法和cDNA末端快速扩增（RACE）技术,成功获得了圆斑星鲽主要组织相容性复合体MHCⅠα的全长cDNA序列。该cDNA全长2171 bp,5′UTR为20 bp,3′UTR为1053bp,开放阅读框（ORF）长度为1098 bp,可编码365个氨基酸,包含信号肽、抗原结合域（α1、α2）,IGC类似区（α3）,连接肽（跨膜区）和胞质区5个结构域。同源分析表明,圆斑星鲽MHCⅠα氨基酸序列与其他硬骨鱼具有31%~74%的同源性,与人的相似性较低。利用荧光定量PCR分析组织表达发现MHCⅠα基因在健康圆斑星鲽9种组织中均有表达,但表达量存在差异,肾的表达量最高,肌肉和皮的表达量最低。 展开更多

关键词 圆斑星鲽 MHCⅠα 基因克隆与表达

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黄鳝脂肪酸去饱和酶及延长酶基因cDNA的克隆与表达 被引量：2

7

作者 周秋白 朱长生 +2 位作者 郑宇 江波 罗晓燕 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期134-140,共7页

为了解黄鳝合成长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的能力,利用Trizol提取黄鳝肝脏总RNA,经RT获得cDNA,基于脂肪酸去饱和酶(FAD)及延长酶(FAE)基因同源系列设计简并引物进行黄鳝cDNA的PCR扩增、测序,获得黄鳝FAD及FAE基因部分片段序列。然后... 为了解黄鳝合成长链多不饱和脂肪酸(LC-PUFA)的能力,利用Trizol提取黄鳝肝脏总RNA,经RT获得cDNA,基于脂肪酸去饱和酶(FAD)及延长酶(FAE)基因同源系列设计简并引物进行黄鳝cDNA的PCR扩增、测序,获得黄鳝FAD及FAE基因部分片段序列。然后分析黄鳝FAD及FAE的同源性和系统进化情况及黄鳝胚胎和胚后发育期仔鱼该两个基因的表达水平。结果表明:黄鳝FAD与军曹鱼的△6去饱和酶同源性高达85%,其次是大菱鲆(83%),FAE与军曹鱼、线鳢、澳大利亚金枪鱼等的同源性高达89%;但FAD和FAE在系统发育树中均自呈一支。FAD和FAE基因在黄鳝胚胎和胚后发育阶段均有表达,以出膜后2～4 d表达量最高。提示黄鳝具有合成LC-PUFA的能力,但不同发育阶段合成能力不同。 展开更多

关键词 黄鳝 去饱和酶 延长酶 基因克隆与表达 LC—PUFAs

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锰超氧化物歧化酶基因的克隆和在保加利亚乳杆菌中的表达 被引量：12

8

作者 黄勇 张德纯 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期92-95,共4页

目的:克隆大肠杆菌锰超氧化物歧化酶基因(sodA)并在保加利亚乳杆菌(L6032)中表达,以提高该菌对氧的耐受性,同时为SOD发酵奶的研制奠定实验室基础。方法:PCR扩增大肠杆菌sodA,将其克隆入乳酸菌表达载体pMG36e中,并将该重组质粒pMG36e-so... 目的:克隆大肠杆菌锰超氧化物歧化酶基因(sodA)并在保加利亚乳杆菌(L6032)中表达,以提高该菌对氧的耐受性,同时为SOD发酵奶的研制奠定实验室基础。方法:PCR扩增大肠杆菌sodA,将其克隆入乳酸菌表达载体pMG36e中,并将该重组质粒pMG36e-sod电转入L6032中表达。用SOD测试盒测定SOD的表达活性,同时对L6032及其重组子在MRS平板上的生长情况及其在有氧条件下的存活情况进行比较,初步探讨SOD在L6032中的活性表达对其氧耐受性的影响。结果:构建了重组质粒pMG36e-sod,经酶切和PCR鉴定与预期完全吻合。核酸测序显示插入的sodA片段能正确编码SOD氨基酸序列。利用电转化成功地将重组质粒导入L6032中,SOD的表达活性约590.5NU/mgprot。SOD的活性表达,能增强保加利亚乳杆菌对氧的耐受性,在有氧条件下重组子的生长和存活率都优于原菌。结论:SodA在保加利亚乳杆菌中获得了成功表达,增强了该菌对氧的耐受性,有利于该菌的开发应用。同时也为下一步SOD发酵奶的研制奠定了实验室基础。 展开更多

关键词 保加利亚乳杆菌 超氧化物歧化酶 基因克隆与表达

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人白细胞介素32基因的克隆表达及其生物学活性的研究 被引量：2

9

作者 田兆菊 江新泉 +4 位作者 陈强 徐希柱 马玉红 焦凤萍 叶文静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1284-1287,共4页

目的:克隆人白细胞介素32(hIL-32)基因,构建高效稳定的hIL-32大肠杆菌表达菌株,并对纯化的目的蛋白进行生物学活性的初步测定。方法:将人外周血单个核细胞(PBMC)经刀豆素A(Con A)刺激60 h后提取细胞的总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT... 目的:克隆人白细胞介素32(hIL-32)基因,构建高效稳定的hIL-32大肠杆菌表达菌株,并对纯化的目的蛋白进行生物学活性的初步测定。方法:将人外周血单个核细胞(PBMC)经刀豆素A(Con A)刺激60 h后提取细胞的总RNA,通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从刺激的PBMC中扩增出hIL-32的基因,通过基因克隆技术,构建hIL-32在pET-30 a(+)中的重组质粒pET30a-hIL32,用IPTG进行诱导,得到hIL-32的原核表达蛋白;采用Ni2+-NTA亲和层析方法纯化目的蛋白;应用ELISA方法检测纯化蛋白诱导人PBMC产生IL-6的情况。结果:序列测定表明,hIL-32基因核苷酸长度为567 bp,编码189个氨基酸。重组质粒pET30-hIL32转化至大肠杆菌BL21(DE3),重组菌菌体裂解物SDS-PAGE可检测到相对分子质量(Mr)为28 000的重组蛋白,表达的重组蛋白IL-32可促进人PBMC产生IL-6,浓度达到(127±4.8)ng/L,而对照组IL-6的浓度仅为(25±2.3)ng/L。结论:成功克隆了hIL-32基因并构建了高效且稳定表达hIL-32基因的大肠杆菌菌株,且表达的目的蛋白能诱导IL-6细胞因子的产生。 展开更多

关键词 白细胞介素-32 基因克隆与表达 大肠杆菌 生物学活性

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β-1,3-1,4葡聚糖酶基因克隆表达及其抗菌活性与机理研究进展 被引量：2

10

作者 文凤云 林健荣 +2 位作者 廖富 董淑丽 钟杨生 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第2期58-60,共3页

β-1,3-1,4-葡聚糖酶是一类能水解β-1,3-糖苷键和β-1,4-糖苷键的酶,因其主要分解大麦中的β-1,3-1,4-葡聚糖和细菌地衣多糖,所以又称地衣多糖酶。综述了β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆表达及其抗菌活性与机理最新研究进展。

关键词 Β-1 3-1 4-葡聚糖酶 基因克隆与表达 抗菌活挫与机理

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Streptomyces sp. 4353中3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因的克隆及其在大肠埃希菌中的表达 被引量：1

11

作者 武临专 刘爱明 +4 位作者 马春燕 韩锋 张会图 高群杰 王以光 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期24-29,共6页

目的克隆Streptomyces sp.4353中的3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因,并将其在大肠埃希菌中表达。方法参与AHBA生物合成的5个基因,即氨基奎尼酸脱水酶基因、氨基奎尼酸/莽草酸脱氢酶基因、AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因... 目的克隆Streptomyces sp.4353中的3-氨基-5-羟基-苯甲酸(AHBA)合酶基因,并将其在大肠埃希菌中表达。方法参与AHBA生物合成的5个基因,即氨基奎尼酸脱水酶基因、氨基奎尼酸/莽草酸脱氢酶基因、AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因通常连锁,形成一个AHBA生物合成基因簇。本文通过分析、比较已知AHBA生物合成基因簇的基因组织结构特点和序列保守性,设计引物,以Streptomyces sp.4353的总DNA为模板,在已知737bp AHBA合酶基因部分序列的基础上,通过PCR扩增其上、下游DNA序列,克隆至pMDl8-T载体上,测序、拼接并进行生物信息学分析。以pET24a(+)为表达载体,对克隆得到的AHBA合酶基因在大肠埃希菌BL21-Codon Plus(DE3)-RIL中进行表达和SDS-PAGE检测。结果从Streptomyces sp.4353中得到了一段2872bp大小的DNA片段(NCBI GenBank接受号EU734184),其中含有AHBA生物合成基因簇中的AHBA合酶基因、氧化还原酶基因和磷酸酶基因(部分);AHBA合酶基因在大肠埃希菌中得到了成功表达,在SDS-PAGE上可见到清晰的、与预计大小(42.7ku)一致的蛋白表达特异条带。结论Streptomyces sp.4353中的AHBA合酶基因的克隆以及在大肠埃希菌中的表达为进一步研究该基因的功能奠定了基础。本研究克隆得到的2872bp DNA片段还有可能用于AHBA的杂合/异源生物合成,以及安莎类抗生素的组合生物合成。 展开更多

关键词 AHBA合酶 基因克隆与表达 链霉菌4353

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具纤溶活性菌株ND2的筛选及其纳豆激酶基因的克隆、表达

12

作者 胡忠 吴奕瑞 +1 位作者 林键 庄东红 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第12期473-478,共6页

从市售的纳豆制品中分离并纯化出一株具有高效纤溶活性的菌株ND2,经生理生化特性及16SrRNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌。通过正交试验优化菌株ND2的发酵条件,得到ND2产纳豆激酶的最佳条件:氮源-大豆蛋白胨,碳源-淀粉,碳氮比... 从市售的纳豆制品中分离并纯化出一株具有高效纤溶活性的菌株ND2,经生理生化特性及16SrRNA序列分析鉴定为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌。通过正交试验优化菌株ND2的发酵条件,得到ND2产纳豆激酶的最佳条件:氮源-大豆蛋白胨,碳源-淀粉,碳氮比3:1,37℃,pH6.0。经PCR扩增得到825bp的纳豆激酶成熟肽基因,采用pET32a(+)表达载体和BL21(DE3)为宿主菌,在温度为37℃、1‰IPTG浓度下可诱导获得较高表达量的重组纳豆激酶。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 纳豆激酶 基因克隆与表达

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花生油质蛋白基因的克隆与表达分析 被引量：4

13

作者 徐赫 潘丽娟 +6 位作者 陈明娜 陈娜 王通 王冕 禹山林 梁成伟 迟晓元 《花生学报》 北大核心 2019年第3期9-14,共6页

油质蛋白作为贮藏蛋白的一种,特异性表达在油料种子中。本研究从花生中克隆得到3个Oleosin22基因,分别命名为AhOleosin22a,AhOleosin22b,AhOleosin22c。AhOleosin22a基因全长为630bp,编码210个氨基酸;AhOleosin22b基因全长为636bp,编码... 油质蛋白作为贮藏蛋白的一种,特异性表达在油料种子中。本研究从花生中克隆得到3个Oleosin22基因,分别命名为AhOleosin22a,AhOleosin22b,AhOleosin22c。AhOleosin22a基因全长为630bp,编码210个氨基酸;AhOleosin22b基因全长为636bp,编码212个氨基酸;AhOleosin22c基因全长为582bp,编码194个氨基酸,均属于Oleosin蛋白质家族。通过荧光定量PCR对Oleosin22基因在花生中的表达模式进行分析。结果显示,AhOleosin22基因在种子中的表达量最高。本研究为阐明Oleosin22基因在花生油脂合成的生理生化机制中的功能奠定了理论基础,丰富了花生品质改良育种的基因资源。 展开更多

关键词 油质蛋白(Oleosin22) 花生 基因克隆与表达 荧光定量PCR 非生物胁迫

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茶树CsLHTs亚家族基因的克隆与表达分析 被引量：2

14

作者 郭玲玲 张芬 +5 位作者 张亚真 成浩 韦康 阮丽 吴立赟 王丽鸳 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期280-288,共9页

氨基酸是茶叶的重要品质成分和氮素贮存形式,因此开展茶树体内氨基酸转运蛋白的研究尤为重要。本研究从茶树转录组中筛选得到5条茶树LHTs(Lysine histidine transporters,赖氨酸/组氨酸转运蛋白)家族基因序列,并从龙井43中成功克隆获得... 氨基酸是茶叶的重要品质成分和氮素贮存形式,因此开展茶树体内氨基酸转运蛋白的研究尤为重要。本研究从茶树转录组中筛选得到5条茶树LHTs(Lysine histidine transporters,赖氨酸/组氨酸转运蛋白)家族基因序列,并从龙井43中成功克隆获得4个茶树LHTs基因,分别命名为CsLHT1、CsLHT6、CsLHT8.1和CsLHT8.2。对该亚家族编码的氨基酸序列的理化性质和功能结构进行预测,结果显示CsLHTs亚家族含有9~11个跨膜区;且含有与氨基酸转运相关的结构域。为了明确在不同茶树品种和氮素水平间CsLHTs基因的表达差异,本研究选用3个茶树品种的扦插苗为试验材料,水培条件下氮饥饿两周后,分别用0.2、2、10mmol·L^-1的NH4NO3进行处理。利用qRT-PCR分析了CsLHTs在不同组织间的表达情况,结果表明4个基因在茶树营养组织中均有表达。经氮素处理后,CsLHTs基因在3个氮素水平和3个品种中呈现出不同的变化规律。CsLHT1、CsLHT6和CsLHT8.2在品种间的表达差异程度高于不同氮素水平间的基因表达差异。CsLHT8.1对氮素处理有明显的响应,尤其经0.2mmol·L^-1和10mmol·L^-1的NH4NO3处理72h后,在氮高效品种中茶302根中呈上调表达,表明CsLHT8.1可能参与氨基酸由根部向地上部的转运过程。 展开更多

关键词 茶树 LHTs 氮素 基因克隆与表达

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茶树CsAAPs亚家族基因的克隆与表达分析 被引量：2

15

作者 郭玲玲 张芬 +4 位作者 成浩 韦康 阮丽 吴立赟 王丽鸳 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期454-464,共11页

采用RT-PCR技术,从龙井43中成功克隆了5个茶树AAPs(Amino acid permeases,氨基酸通透酶)基因。氨基酸序列比对结果表明,5个CsAAPs亚家族蛋白的序列同源性较高,为70.27%。根据氨基酸序列同源性构建系统发育树,结果显示5个CsAAPs分属3组... 采用RT-PCR技术,从龙井43中成功克隆了5个茶树AAPs(Amino acid permeases,氨基酸通透酶)基因。氨基酸序列比对结果表明,5个CsAAPs亚家族蛋白的序列同源性较高,为70.27%。根据氨基酸序列同源性构建系统发育树,结果显示5个CsAAPs分属3组。生物信息学分析表明,CsAAPs均含有9~10个跨膜区域和16~18个AAP保守基序。为了研究该亚家族对氮素的响应情况,选用3个茶树品种的扦插苗为试验材料,氮饥饿两周后,分别供应不同浓度的NH4NO3,然后利用qRT-PCR对CsAAPs在不同组织、氮素水平及茶树品种中的表达情况进行分析。研究发现CsAAPs在营养组织中均有表达,但是存在一定的组织表达差异,其中CsAAP3在茎中表达量最高,CsAAP8的主要表达部位为根和茎。在给氮素饥饿处理的茶苗从新供氮之后,CsAAP3的基因表达在3个氮素利用效率不同的品种间差异较大;在氮高效品种中茶302茎中表达的CsAAP3和CsAAP8,可以快速地对低氮条件做出响应,在低氮处理3 h后,基因表达水平明显增加。此研究预示着CsAAPs亚家族在茶树体内可能通过复杂的氨基酸转运参与氮代谢调控。 展开更多

关键词 茶树 氨基酸通透酶 基因克隆与表达 氮素

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草莓KEA家族基因的克隆、鉴定及表达分析 被引量：2

16

作者 姜玉素 李珍 +2 位作者 王庆莲 赵密珍 宋志忠 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期391-399,共9页

K^+/H^+逆向转运体(KEA)介导细胞中K^+和H^+的动态平衡,在维持植物体内的离子平衡、生长发育和信号转导中起重要作用,然而,相关研究主要体现在模式作物拟南芥中,果树中KEA家族基因的功能依然未知。本研究以Yellow Wonder 5AF8草莓为材料... K^+/H^+逆向转运体(KEA)介导细胞中K^+和H^+的动态平衡,在维持植物体内的离子平衡、生长发育和信号转导中起重要作用,然而,相关研究主要体现在模式作物拟南芥中,果树中KEA家族基因的功能依然未知。本研究以Yellow Wonder 5AF8草莓为材料,筛选并克隆KEA家族基因,并对其进行生物信息学鉴定和表达特征分析,为研究果树K^+/H^+平衡及钾素动态平衡机制提供基因资源和理论依据。结果表明,在草莓基因组中检索并克隆到5个KEA家族基因,命名为FveKEA1～FveKEA5,属于典型的植物K^+/H^+逆向转运体基因;编码的蛋白质与7种已报道的不同科属植物的KEA家族蛋白在氨基酸水平上具有25.00%的一致性,并可分为2个亚族(Group I和Group II),其中,草莓FveKEA1和FveKEA2属于Group I,只含有4个Motif基序,而FveKEA3～FveKEA5属于Group II,含有7个Motif基序;系统进化树表明草莓FveKEA2和FveKEA4分别与葡萄VvKEA2和苹果MdoKEA6紧密聚在一起,草莓FveKEA1、FveKEA3和FveKEA5分别与葡萄VvKEA1、白杨PtrKEA4、桃PpeKEA4等相应成员在遗传距离上较近;草莓KEA家族蛋白主要定位于细胞质膜,均含有12～14个跨膜区,除FveKEA3外,均为稳定蛋白,且只有FveKEA5含有信号肽;转录表达谱分析结果揭示草莓KEA家族基因在多种组织或器官中均有表达,实时荧光定量PCR结果表明FveKEA1在5AF8草莓不同组织中的整体表达水平最高,在花瓣和未成熟果实中的表达量最为突出,其次是FveKEA4,而其他3个基因的整体表达水平相对较低。此外,在草莓KEA基因启动子区域鉴定到至少16种顺式作用元件,且均含有光感应、胚乳表达和脱落酸(ABA)响应的作用元件。 展开更多

关键词 草莓 K^+/H^+逆向转运体 生物信息学分析 基因克隆与表达

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来源于假单孢菌206植酸酶基因的克隆、表达及酶学性质研究 被引量：1

17

作者 李雅楠 黄火清 +3 位作者 姚斌 赵青 刘昆 马文康 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期139-144,共6页

从浙江嘉兴人工鱼塘底泥样品筛选到产植酸酶活性较高的假单孢菌(Pseudomonas fluorescens)206。通过简并PCR和TAIL-PCR技术从Pseudomonas fluorescens206菌株基因组DNA中克隆得到一个新的编码组氨酸酸性植酸酶(HAP)的基因,命名为phyP。... 从浙江嘉兴人工鱼塘底泥样品筛选到产植酸酶活性较高的假单孢菌(Pseudomonas fluorescens)206。通过简并PCR和TAIL-PCR技术从Pseudomonas fluorescens206菌株基因组DNA中克隆得到一个新的编码组氨酸酸性植酸酶(HAP)的基因,命名为phyP。该基因ORF全长1 284 bp,编码了427个氨基酸和一个终止密码子,前24个氨基酸为信号肽。将phyP在大肠杆菌中表达,重组蛋白经硫酸铵分级沉淀和阴离子交换柱纯化后达到电泳纯。对其酶学性质分析表明:重组植酸酶PhyP最适pH为5.5,在pH3.5-7.5的条件下具有较好的稳定性;重组植酸酶PhyP最适温度为45℃,在25℃时也具有较高的酶活性,因此植酸酶PhyP在饲料行业,尤其是水产行业具有潜在的应用前景。 展开更多

关键词 假单孢菌(Pseudomonas fluorescens) 植酸酶 基因克隆与表达 酶学性质

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大熊猫FOXL2基因的克隆、序列分析及表达 被引量：1

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作者 袁红英 杨东 +2 位作者 王高超 谭帅 邹方东 《四川动物》 CSCD 北大核心 2012年第5期740-745,共6页

从大熊猫基因组中克隆了FOXL2基因,并对其进行序列分析及原核表达和真核表达。将FOXL2编码区序列克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出FOXL2重组蛋白。成功构建了真核表达载体FOXL2-pcDNA3.1/V5-HisC,并... 从大熊猫基因组中克隆了FOXL2基因,并对其进行序列分析及原核表达和真核表达。将FOXL2编码区序列克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出FOXL2重组蛋白。成功构建了真核表达载体FOXL2-pcDNA3.1/V5-HisC,并通过脂质体介导转染HEK293细胞,Western blot检测FOXL2蛋白表达。SDS-PAGE分析表明,FOXL2重组蛋白在诱导4h后表达量达到峰值,其大小约为58.9kDa,Western blot分析结果显示重组蛋白能够被抗His单克隆抗体特异性识别。FOXL2基因的克隆及其表达为进一步进行FOXL2的活性检测以及应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 大熊猫 FOXL2 基因克隆与表达 序列分析

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辣椒ATP硫酸化酶基因(CaATPS1)的克隆与逆境表达 被引量：1

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作者 朱磊 杨路明 +1 位作者 孙守如 李严曼 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1040-1047,共8页

采用RT-PCR和RACE方法,克隆了叶绿体ATP硫酸化酶基因的全长序列,命名为Ca ATPS1,Gen Bank登录号为KX009745。该基因包含1个长为1 377 bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸,预测分子量51.11 k D,等电点6.74。氨基酸同源性分析表明,该基因... 采用RT-PCR和RACE方法,克隆了叶绿体ATP硫酸化酶基因的全长序列,命名为Ca ATPS1,Gen Bank登录号为KX009745。该基因包含1个长为1 377 bp的完整开放阅读框,编码458个氨基酸,预测分子量51.11 k D,等电点6.74。氨基酸同源性分析表明,该基因与Gen Bank中登录的茄科植物烟草、马铃薯及其它物种中的ATPS1氨基酸序列具有较高的同源性;进化树分析表明,辣椒Ca ATPS1与同为茄科属的烟草、马铃薯和胡麻属的芝麻处于同一进化分枝上,而与十字花科植物进化关系较远;荧光定量PCR分析显示,Ca ATPS1能被低温、干旱、高盐、机械损伤、过氧化氢、水杨酸、乙烯利以及DC3000侵染等各种胁迫和信号分子诱导。 展开更多

关键词 ATP硫酸化酶 辣椒 基因克隆与表达特性 胁迫应答

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大熊猫脑源性神经营养因子(BDNF)基因的克隆与表达 被引量：1

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作者 林峰 杨玉华 +5 位作者 张义正 陈红卫 费立松 宋云芳 何光昕 张安居 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1997年第S1期86-86,共1页

大熊猫脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因的克隆与表达林峰杨玉华张义正（四川联合大学生物工程系，成都６１００６４）陈红卫费立松宋云芳何光昕张安居（四川省成都动物园，成都６１００８１）大熊猫（Ａｌｉｕｒｏｐｏｄａｍｅｌａ... 大熊猫脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）基因的克隆与表达林峰杨玉华张义正（四川联合大学生物工程系，成都６１００６４）陈红卫费立松宋云芳何光昕张安居（四川省成都动物园，成都６１００８１）大熊猫（Ａｌｉｕｒｏｐｏｄａｍｅｌａｎｏｌｅｕｃａ）是我国特有的珍稀濒... 展开更多

关键词 神经营养因子 基因的克隆与表达 脑源性 神经系统疾病 大熊 肠杆菌 基因编码区 成熟区 信号肽 珍稀濒危动物

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