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IL-9RCDS基因人源化小鼠模型构建与验证
1
作者
刘崇
周园园
+3 位作者
薛慧
薛梓萌
陈维乐
涂佳杰
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025年第6期1015-1021,共7页
目的 构建白细胞介素9受体(IL-9R)编码序列(CDS)基因人源化小鼠模型,验证小鼠基因型和IL-9R表达。方法 采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,将小鼠胚胎干细胞的il-9r基因的exon 2-7片段替换为相应人源IL-9R。琼脂糖凝胶电泳法验证基因片段...
目的 构建白细胞介素9受体(IL-9R)编码序列(CDS)基因人源化小鼠模型,验证小鼠基因型和IL-9R表达。方法 采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,将小鼠胚胎干细胞的il-9r基因的exon 2-7片段替换为相应人源IL-9R。琼脂糖凝胶电泳法验证基因片段替换完成后,构建四倍体胚胎,并通过显微注射法送回到代孕鼠输卵管中,经母鼠代孕,获得纯合人源化小鼠。提取IL-9R CDS基因人源化纯合小鼠DNA,经过PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型,Western blot检测IL-9R基因人源化纯合小鼠脾脏及胸腺中的IL-9R表达。结果 PCR扩增后凝胶电泳结果显示,采用WT引物鉴定时仅扩增出1 805 bp条带的小鼠基因型为野生型,采用5KI、3KI引物鉴定时扩增出2 553、2 340 bp条带的小鼠,即为IL-9R CDS基因人源化纯合小鼠;Western blot结果显示,IL-9R CDS基因人源化纯合小鼠的组织表达IL-9R。结论 成功构建和鉴定IL-9R CDS基因人源化小鼠模型。
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关键词
基因人源化
白细胞介素9受体
CRISPR/Cas9
聚合酶链式反应
免疫印迹
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职称材料
OX40/FcγR多基因人源化小鼠模型的构建及在激动型OX40抗体研究中应用的验证
2
作者
刘明东
刘小波
+3 位作者
赵英杰
张燕
张慧慧
李福彬
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期728-735,共8页
目的·建立一种能够快速获得可用于激动型抗体活性评估的OX40/FcγR[肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40)/Fcγ受体(Fcγreceptor,FcγR)]多基因人源化小鼠模型的方法。方法...
目的·建立一种能够快速获得可用于激动型抗体活性评估的OX40/FcγR[肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40)/Fcγ受体(Fcγreceptor,FcγR)]多基因人源化小鼠模型的方法。方法·将表达人源OX40分子的小鼠骨髓细胞与表达人源FcγR的小鼠骨髓细胞等比例混合后,通过尾静脉注射到经过辐照的野生型小鼠体内,构建骨髓嵌合小鼠。通过流式细胞术检测骨髓嵌合小鼠中OX40/FcγR人源分子的表达情况,确认免疫系统的重建效率。对构建成功的骨髓嵌合小鼠,使用流式细胞术评估人类抗人OX40单克隆抗体对CD4+、CD8+T细胞的免疫激活活性。2组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果·流式细胞术的结果显示,骨髓嵌合小鼠脾脏、外周血和淋巴结中的B淋巴细胞、髓系细胞均可以表达高水平的人源FcγR分子(均P<0.05);骨髓嵌合小鼠T淋巴细胞在体外激活后有明显的人源OX40分子的表达(P<0.05)。使用人类激动型抗人OX40抗体对骨髓嵌合小鼠进行处理显示,人类激动型抗人OX40抗体可以明显增强小鼠体内T细胞的γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)表达量,和CD4+T细胞上OX40分子的表达(均P<0.05)。结论·以表达人源OX40分子的小鼠与表达人源FcγR的小鼠的骨髓细胞为基础构建的骨髓嵌合小鼠模型能够同时表达人源OX40和FcγR分子,可用于评估人类激动型抗人OX40抗体的体内活性。
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关键词
肿瘤坏死因子受体超家族成员4
FCΓ受体
骨髓嵌合小鼠
多
基因人源化
小鼠
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职称材料
题名
IL-9RCDS基因人源化小鼠模型构建与验证
1
作者
刘崇
周园园
薛慧
薛梓萌
陈维乐
涂佳杰
机构
安徽医科大学药学科学学院
出处
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025年第6期1015-1021,共7页
基金
安徽省高校杰出青年科研项目(编号:2022AH020052)。
文摘
目的 构建白细胞介素9受体(IL-9R)编码序列(CDS)基因人源化小鼠模型,验证小鼠基因型和IL-9R表达。方法 采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,将小鼠胚胎干细胞的il-9r基因的exon 2-7片段替换为相应人源IL-9R。琼脂糖凝胶电泳法验证基因片段替换完成后,构建四倍体胚胎,并通过显微注射法送回到代孕鼠输卵管中,经母鼠代孕,获得纯合人源化小鼠。提取IL-9R CDS基因人源化纯合小鼠DNA,经过PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳鉴定其基因型,Western blot检测IL-9R基因人源化纯合小鼠脾脏及胸腺中的IL-9R表达。结果 PCR扩增后凝胶电泳结果显示,采用WT引物鉴定时仅扩增出1 805 bp条带的小鼠基因型为野生型,采用5KI、3KI引物鉴定时扩增出2 553、2 340 bp条带的小鼠,即为IL-9R CDS基因人源化纯合小鼠;Western blot结果显示,IL-9R CDS基因人源化纯合小鼠的组织表达IL-9R。结论 成功构建和鉴定IL-9R CDS基因人源化小鼠模型。
关键词
基因人源化
白细胞介素9受体
CRISPR/Cas9
聚合酶链式反应
免疫印迹
Keywords
gene humanization
IL-9R
CRISPR/Cas9
PCR
Western blot
分类号
R593.22 [医药卫生—内科学]
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职称材料
题名
OX40/FcγR多基因人源化小鼠模型的构建及在激动型OX40抗体研究中应用的验证
2
作者
刘明东
刘小波
赵英杰
张燕
张慧慧
李福彬
机构
上海交通大学基础医学院免疫学与微生物学系
出处
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第6期728-735,共8页
基金
国家自然科学基金(31422020,31700806,31600704)
上海市科学技术委员会项目(18140902600,19431902900,15ZR1436400)
上海高水平地方高校创新团队(SSMU-2DCX20180100)。
文摘
目的·建立一种能够快速获得可用于激动型抗体活性评估的OX40/FcγR[肿瘤坏死因子受体超家族成员4(tumor necrosis factor receptor superfamily member 4,OX40)/Fcγ受体(Fcγreceptor,FcγR)]多基因人源化小鼠模型的方法。方法·将表达人源OX40分子的小鼠骨髓细胞与表达人源FcγR的小鼠骨髓细胞等比例混合后,通过尾静脉注射到经过辐照的野生型小鼠体内,构建骨髓嵌合小鼠。通过流式细胞术检测骨髓嵌合小鼠中OX40/FcγR人源分子的表达情况,确认免疫系统的重建效率。对构建成功的骨髓嵌合小鼠,使用流式细胞术评估人类抗人OX40单克隆抗体对CD4+、CD8+T细胞的免疫激活活性。2组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果·流式细胞术的结果显示,骨髓嵌合小鼠脾脏、外周血和淋巴结中的B淋巴细胞、髓系细胞均可以表达高水平的人源FcγR分子(均P<0.05);骨髓嵌合小鼠T淋巴细胞在体外激活后有明显的人源OX40分子的表达(P<0.05)。使用人类激动型抗人OX40抗体对骨髓嵌合小鼠进行处理显示,人类激动型抗人OX40抗体可以明显增强小鼠体内T细胞的γ-干扰素(interferonγ,IFN-γ)表达量,和CD4+T细胞上OX40分子的表达(均P<0.05)。结论·以表达人源OX40分子的小鼠与表达人源FcγR的小鼠的骨髓细胞为基础构建的骨髓嵌合小鼠模型能够同时表达人源OX40和FcγR分子,可用于评估人类激动型抗人OX40抗体的体内活性。
关键词
肿瘤坏死因子受体超家族成员4
FCΓ受体
骨髓嵌合小鼠
多
基因人源化
小鼠
Keywords
tumor necrosis factor receptor superfamily member 4(OX40)
Fcγreceptor(FcγR)
bone marrow chimera mice
polygenic humanized mice
分类号
R392.33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
IL-9RCDS基因人源化小鼠模型构建与验证
刘崇
周园园
薛慧
薛梓萌
陈维乐
涂佳杰
《安徽医科大学学报》
北大核心
2025
0
在线阅读
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职称材料
2
OX40/FcγR多基因人源化小鼠模型的构建及在激动型OX40抗体研究中应用的验证
刘明东
刘小波
赵英杰
张燕
张慧慧
李福彬
《上海交通大学学报（医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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