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家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立
1
作者
赵宁
恽时锋
+3 位作者
王芳
范志宇
胡波
刘涛
《中国比较医学杂志》
CAS
2011年第4期47-51,共5页
目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷...
目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-28a(+)载体中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1抗体的ELISA方法。结果成功克隆了dntN-端的基因序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白DNT1具有良好的抗原性。应用重组蛋白DNT1为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25μg/mL,最适血清稀释度为1∶100。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
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关键词
兔
支气管败血波氏杆菌
坏死
毒素
(
dnt
)
原核表达
间接ELISA
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职称材料
题名
家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立
1
作者
赵宁
恽时锋
王芳
范志宇
胡波
刘涛
机构
江苏省农业科学院兽医研究所
南京军区南京总医院比较医学科
出处
《中国比较医学杂志》
CAS
2011年第4期47-51,共5页
基金
农业部公益性行业科研专项(nyzx07-040)
现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目(nycytx-44)
江苏省科技支撑计划--农业部分(BE2008372)
文摘
目的表达支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)DNT蛋白,并以此建立检测Bb抗体的间接ELISA方法。方法参照GenBank公布的猪源支气管败血波氏杆菌dnt基因序列(AB020025)针对其N-端设计了一对特异性引物,PCR扩增出相应的核苷酸片段。将PCR扩增产物连接至原核表达载体pET-28a(+)载体中,以E.coli BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,以纯化重组蛋白DNT1作为诊断抗原,通过探索最佳抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1抗体的ELISA方法。结果成功克隆了dntN-端的基因序列,并在E.coli BL21(DE3)中获得高效表达,经SDS-PAGE、Western blot分析显示重组蛋白DNT1具有良好的抗原性。应用重组蛋白DNT1为抗原建立了检测Bb血清抗体的间接ELISA诊断方法。试验确定重组蛋白DNT1抗原的包被浓度为6.25μg/mL,最适血清稀释度为1∶100。结论建立的ELISA检测方法,不仅为Bb抗体检测提供了一种比较实用的血清学检测手段,也为进一步开发Bb检测试剂盒奠定了基础。
关键词
兔
支气管败血波氏杆菌
坏死
毒素
(
dnt
)
原核表达
间接ELISA
Keywords
Rabbits
Bordetella bronchiseptica
Dermonecrotic toxin（
dnt
）
Prokaryotic expression
Indirect ELISA
分类号
R33 [医药卫生—人体生理学]
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作者
出处
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被引量
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1
家兔支气管败血波氏杆菌重组蛋白DNT1的原核表达及其间接ELISA方法的建立
赵宁
恽时锋
王芳
范志宇
胡波
刘涛
《中国比较医学杂志》
CAS
2011
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