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用地高辛标记核酸探针检测猪细小病毒的研究
被引量：
4
1
作者
白红光
卫广森
+2 位作者
徐宏军
李尚波
王文成
《动物医学进展》
CSCD
2005年第9期80-84,共5页
根据猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计引物克隆了PPV YK株保守序列NS1基因,将NS1基因纯化,利用地高辛标记制备了NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针,两种核酸探针的标记都达到了0.1 pg/μL。特异性试验结果表明,这两种探针都能与PPV DNA发...
根据猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计引物克隆了PPV YK株保守序列NS1基因,将NS1基因纯化,利用地高辛标记制备了NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针,两种核酸探针的标记都达到了0.1 pg/μL。特异性试验结果表明,这两种探针都能与PPV DNA发生特异的阳性杂交,而与对照的PRV、PCV、PRRSV和HCV的核酸杂交呈阴性。敏感性试验结果表明,克隆NS1探针敏感度为0.5 pg/μL,NS1基因PCR产物探针敏感度为1 pg/μL。综上所述,这两种DIG标记探针特异性强,敏感性高,可用于PPV的检测。
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关键词
猪细小病毒
地高辛
标记
核酸
探针
杂交
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职称材料
青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用
被引量：
1
2
作者
崔亚婷
倪军
+4 位作者
马红玲
许海东
冯娟
申亚阳
郭志勋
《广东农业科学》
CAS
2015年第11期130-134,F0003,共6页
根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青...
根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青蟹呼肠孤病毒(MCRV)、鲍肌肉萎缩症病毒(Ab SV)、类疱疹病毒(Ab HV)、白斑综合症病毒(WSSV)、虎纹蛙病毒(TFV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)等水生动物常见病毒均无交叉反应,可以特异性的检测出MCDV-1,检出MCDV-1的灵敏度为8.58×107 copies/μL。采用原位杂交检测方法检测拟穴青蟹组织中MCDV-1的组织分布,结果表明,拟穴青蟹中MCDV-1 RNA的阳性信号主要分布于肝胰腺、神经节、肠道和食管。
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关键词
拟穴青蟹
青蟹双顺反子病毒-1
地高辛核酸探针
原位杂交
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职称材料
PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用
被引量：
3
3
作者
张富友
于晓慧
+4 位作者
蒋文明
孙淑红
赵鹏
刘华雷
李阳
《中国动物检疫》
CAS
2021年第3期92-98,共7页
鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展。为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,...
鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展。为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,经PCR扩增获得731 bp的核苷酸DNA,并用DIG标记,制备用于检测APV的特异性核酸探针;对制备的探针进行灵敏度检测,同时与普通PCR进行敏感性比较;使用制备的探针,对经分离鉴定和制备保存的其他7种禽病毒核酸进行特异性检测;用该核酸探针,对疑似感染APV的鹦鹉病料进行斑点杂交检测,并对鉴定为阳性的APV进行全基因组扩增和序列分析。结果显示:该探针可检测到2 pg量的APV特异性核酸片段;仅APV-VP1阳性核酸显色,呈现阳性反应,而阴性核酸和其他7种禽病毒核酸均不显色,呈阴性反应。结果表明:建立的核酸斑点杂交检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于临床初步诊断。本方法的建立为我国开展APV分子流行病学调查及其感染的临床诊断提供了技术支撑。
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关键词
鹦鹉幼雏病
禽多瘤病毒
地高辛
标记
核酸
探针
核酸
斑点杂交
全基因组
遗传进化
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职称材料
题名
用地高辛标记核酸探针检测猪细小病毒的研究
被引量：
4
1
作者
白红光
卫广森
徐宏军
李尚波
王文成
机构
沈阳农业大学畜牧兽医学院
中国农业科学院兰州兽医研究所
辽宁省益康生物制品厂
出处
《动物医学进展》
CSCD
2005年第9期80-84,共5页
文摘
根据猪细小病毒(PPV)基因组序列,设计引物克隆了PPV YK株保守序列NS1基因,将NS1基因纯化,利用地高辛标记制备了NS1基因PCR产物探针和克隆NS1探针,两种核酸探针的标记都达到了0.1 pg/μL。特异性试验结果表明,这两种探针都能与PPV DNA发生特异的阳性杂交,而与对照的PRV、PCV、PRRSV和HCV的核酸杂交呈阴性。敏感性试验结果表明,克隆NS1探针敏感度为0.5 pg/μL,NS1基因PCR产物探针敏感度为1 pg/μL。综上所述,这两种DIG标记探针特异性强,敏感性高,可用于PPV的检测。
关键词
猪细小病毒
地高辛
标记
核酸
探针
杂交
Keywords
Porcine parvovirus
the digoxigenin-labeled probes hybridization
分类号
S852.659.2 [农业科学—基础兽医学]
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用
被引量：
1
2
作者
崔亚婷
倪军
马红玲
许海东
冯娟
申亚阳
郭志勋
机构
中国水产科学研究院南海水产研究所/农业部水产品加工重点实验室
上海海洋大学水产与生命学院
广东省水生动物疫病预防控制中心
出处
《广东农业科学》
CAS
2015年第11期130-134,F0003,共6页
基金
广东省省级财政鱼病防治专项资金(2013)
广东省科技计划项目(2011A020102002)
中国水产科学研究院基本科研业务费专项(2012TS06)
文摘
根据青蟹双顺反子病毒-1(mud crab dicistrovirus-1,MCDV-1)基因的保守序列设计1对引物,从感染MCDV-1的青蟹鳃组织中提取RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到1 314 bp的c DNA片段。纯化后的PCR产物用地高辛(DIG)标记制备核酸探针,此探针与青蟹呼肠孤病毒(MCRV)、鲍肌肉萎缩症病毒(Ab SV)、类疱疹病毒(Ab HV)、白斑综合症病毒(WSSV)、虎纹蛙病毒(TFV)、锦鲤疱疹病毒(KHV)等水生动物常见病毒均无交叉反应,可以特异性的检测出MCDV-1,检出MCDV-1的灵敏度为8.58×107 copies/μL。采用原位杂交检测方法检测拟穴青蟹组织中MCDV-1的组织分布,结果表明,拟穴青蟹中MCDV-1 RNA的阳性信号主要分布于肝胰腺、神经节、肠道和食管。
关键词
拟穴青蟹
青蟹双顺反子病毒-1
地高辛核酸探针
原位杂交
Keywords
Scylla paramamosain
mud crab dicistrovirus-1
dig-labeled probe
in situ hybridization
分类号
S945.6 [农业科学—水产养殖]
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用
被引量：
3
3
作者
张富友
于晓慧
蒋文明
孙淑红
赵鹏
刘华雷
李阳
机构
山东农业大学
中国动物卫生与流行病学中心
出处
《中国动物检疫》
CAS
2021年第3期92-98,共7页
文摘
鹦鹉幼雏病是由禽类多瘤病毒(APV)引起的多种鹦鹉雏鸟死亡的急性病毒性传染病,严重危害鹦鹉养殖业的健康发展。为提高分子生物学方法检测APV的敏感性和特异性,对APV基因片段进行克隆和序列分析,设计合成1对特异性引物,以VP1基因为模板,经PCR扩增获得731 bp的核苷酸DNA,并用DIG标记,制备用于检测APV的特异性核酸探针;对制备的探针进行灵敏度检测,同时与普通PCR进行敏感性比较;使用制备的探针,对经分离鉴定和制备保存的其他7种禽病毒核酸进行特异性检测;用该核酸探针,对疑似感染APV的鹦鹉病料进行斑点杂交检测,并对鉴定为阳性的APV进行全基因组扩增和序列分析。结果显示:该探针可检测到2 pg量的APV特异性核酸片段;仅APV-VP1阳性核酸显色,呈现阳性反应,而阴性核酸和其他7种禽病毒核酸均不显色,呈阴性反应。结果表明:建立的核酸斑点杂交检测方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于临床初步诊断。本方法的建立为我国开展APV分子流行病学调查及其感染的临床诊断提供了技术支撑。
关键词
鹦鹉幼雏病
禽多瘤病毒
地高辛
标记
核酸
探针
核酸
斑点杂交
全基因组
遗传进化
Keywords
BFD
APV
digoxigenin labled probe
dot blot hybridization
whole genome
genetic evolution
分类号
S851.34 [农业科学—预防兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
用地高辛标记核酸探针检测猪细小病毒的研究
白红光
卫广森
徐宏军
李尚波
王文成
《动物医学进展》
CSCD
2005
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
青蟹双顺反子病毒-1原位杂交检测方法的建立与应用
崔亚婷
倪军
马红玲
许海东
冯娟
申亚阳
郭志勋
《广东农业科学》
CAS
2015
1
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职称材料
3
PCR结合斑点杂交技术检测禽多瘤病毒方法的建立及应用
张富友
于晓慧
蒋文明
孙淑红
赵鹏
刘华雷
李阳
《中国动物检疫》
CAS
2021
3
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