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基于LC-MS/MS技术同时定量分析片仔癀中特征胰酶水解肽
1
作者
李文正
刘文静
+5 位作者
曹妍
李玮
赵晨
刘丛盛
宋青青
宋月林
《中国现代中药》
CAS
2023年第4期880-887,共8页
目的:阐明片仔癀中的蛋白组,定量分析其中的特征胰酶水解肽,以提高片仔癀的质量控制水平。方法:优化总蛋白提取条件,采用二辛可宁酸(BCA)法测定总蛋白含量,利用鸟枪法蛋白组学表征片仔癀的蛋白组,并进一步选择含量较高、稳定性好、长度...
目的:阐明片仔癀中的蛋白组,定量分析其中的特征胰酶水解肽,以提高片仔癀的质量控制水平。方法:优化总蛋白提取条件,采用二辛可宁酸(BCA)法测定总蛋白含量,利用鸟枪法蛋白组学表征片仔癀的蛋白组,并进一步选择含量较高、稳定性好、长度适宜的特征多肽作为目标分析物,采用在线能量分辨质谱法(online ER-MS)优化特征肽的离子对及最佳碰撞能,建立反相液相色谱-选择反应监测(RPLC-SRM)定量分析方法,测定11批片仔癀中目标多肽的含量。结果:利用UniProt数据库从片仔癀中共鉴定了来源于200个蛋白的343个肽段,以酶和骨架蛋白为主;筛选得到ALSSALHER、TLLEGEESR和VAPLGEEFR 3个特征肽,以其作为目标分析物进行定量分析,online ER-MS优化3个特征肽的定量参数离子对分别为m/z 492.3→799.4、517.3→819.4和509.3→637.3,碰撞能分别为25.0、24.4、28.6 eV。方法学验证符合定量要求,3个多肽类成分在各批片仔癀样品中均被检出(ALSSALHER:0.06~0.44μg·g^(–1);TLLEGEESR:0.08~0.26μg·g^(–1);VAPLGEEFR:0.27~1.09μg·g^(–1)),含量差异较小,其中特征肽VAPLGEEFR的含量较高。结论:建立的方法可靠,可为富含蛋白类成分的中药制剂的质量评价提供思路与方法。
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关键词
片仔癀
酶切特征肽
定量分析
选择反应监测
在线能量分辨质谱
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职称材料
胆类中药体内代谢产物甘氨胆酸硫酸盐同分异构体的区分
2
作者
张珂
李玮
+5 位作者
王艳敏
龚兴成
曹丽波
宋月林
宋青青
屠鹏飞
《中国现代中药》
CAS
2021年第11期1883-1888,共6页
目的:通过在线能量分辨质谱法(Online ER-MS)快速区分胆类中药在体内的代谢产物甘氨胆酸硫酸盐同分异构体。方法:采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)采集3个甘氨胆酸硫酸盐异构体甘氨熊去氧胆酸-3-磺酸盐(GUDCA-3-S)、甘氨鹅去氧胆酸-3-...
目的:通过在线能量分辨质谱法(Online ER-MS)快速区分胆类中药在体内的代谢产物甘氨胆酸硫酸盐同分异构体。方法:采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)采集3个甘氨胆酸硫酸盐异构体甘氨熊去氧胆酸-3-磺酸盐(GUDCA-3-S)、甘氨鹅去氧胆酸-3-磺酸盐(GCDCA-3-S)、甘氨去氧胆酸-3-磺酸盐(GDCA-3-S)的高分辨多级质谱信息,推导质谱裂解途径并归属各碎片离子,构建候选离子对m/z 528.3→528.3、528.3→448.3、528.3→404.3、528.3→386.3、528.3→330.2、528.3→97.0和528.3→74.0,每个候选离子对进一步衍生1组拟离子对(PITs),对应1组在–5~–180 eV梯度变化(步长为1 eV)的碰撞能;通过Online ER-MS采集所有拟离子对质谱响应,采用高斯曲线拟合每一组拟离子对的响应值,构建裂解曲线组,进而在同分异构体间比较同一离子对的裂解曲线。结果:3个同分异构体的MS1和MS2基本一致,难以区分。各组拟离子对的响应值均呈现高斯分布。同一化合物的不同候选离子对呈现出不同的裂解曲线,同分异构体的相同离子对的裂解曲线也存在差异。结论:利用Online ER-MS可以实现甘氨胆酸硫酸盐同分异构体的快速、有效区分,为胆类中药体内药效物质和作用机制的阐明提供参考。
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关键词
胆类中药
在线能量分辨质谱
甘氨胆酸硫酸盐
同分异构体
裂解曲线组
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职称材料
题名
基于LC-MS/MS技术同时定量分析片仔癀中特征胰酶水解肽
1
作者
李文正
刘文静
曹妍
李玮
赵晨
刘丛盛
宋青青
宋月林
机构
北京中医药大学
漳州片仔癀药业股份有限公司
出处
《中国现代中药》
CAS
2023年第4期880-887,共8页
基金
国家自然科学基金项目(82003911,81773875,81973444)
漳州片仔癀药业股份有限公司开放课题(2020072220058)。
文摘
目的:阐明片仔癀中的蛋白组,定量分析其中的特征胰酶水解肽,以提高片仔癀的质量控制水平。方法:优化总蛋白提取条件,采用二辛可宁酸(BCA)法测定总蛋白含量,利用鸟枪法蛋白组学表征片仔癀的蛋白组,并进一步选择含量较高、稳定性好、长度适宜的特征多肽作为目标分析物,采用在线能量分辨质谱法(online ER-MS)优化特征肽的离子对及最佳碰撞能,建立反相液相色谱-选择反应监测(RPLC-SRM)定量分析方法,测定11批片仔癀中目标多肽的含量。结果:利用UniProt数据库从片仔癀中共鉴定了来源于200个蛋白的343个肽段,以酶和骨架蛋白为主;筛选得到ALSSALHER、TLLEGEESR和VAPLGEEFR 3个特征肽,以其作为目标分析物进行定量分析,online ER-MS优化3个特征肽的定量参数离子对分别为m/z 492.3→799.4、517.3→819.4和509.3→637.3,碰撞能分别为25.0、24.4、28.6 eV。方法学验证符合定量要求,3个多肽类成分在各批片仔癀样品中均被检出(ALSSALHER:0.06~0.44μg·g^(–1);TLLEGEESR:0.08~0.26μg·g^(–1);VAPLGEEFR:0.27~1.09μg·g^(–1)),含量差异较小,其中特征肽VAPLGEEFR的含量较高。结论:建立的方法可靠,可为富含蛋白类成分的中药制剂的质量评价提供思路与方法。
关键词
片仔癀
酶切特征肽
定量分析
选择反应监测
在线能量分辨质谱
Keywords
Pien Tze Huang
characteristic tryptic peptides
quantitative analysis
selective reaction monitoring
online energy-resolved mass spectrometry
分类号
R286 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
胆类中药体内代谢产物甘氨胆酸硫酸盐同分异构体的区分
2
作者
张珂
李玮
王艳敏
龚兴成
曹丽波
宋月林
宋青青
屠鹏飞
机构
北京中医药大学中药学院中药现代研究中心
出处
《中国现代中药》
CAS
2021年第11期1883-1888,共6页
基金
国家自然科学基金项目(81973444,82003911,81773875)。
文摘
目的:通过在线能量分辨质谱法(Online ER-MS)快速区分胆类中药在体内的代谢产物甘氨胆酸硫酸盐同分异构体。方法:采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)采集3个甘氨胆酸硫酸盐异构体甘氨熊去氧胆酸-3-磺酸盐(GUDCA-3-S)、甘氨鹅去氧胆酸-3-磺酸盐(GCDCA-3-S)、甘氨去氧胆酸-3-磺酸盐(GDCA-3-S)的高分辨多级质谱信息,推导质谱裂解途径并归属各碎片离子,构建候选离子对m/z 528.3→528.3、528.3→448.3、528.3→404.3、528.3→386.3、528.3→330.2、528.3→97.0和528.3→74.0,每个候选离子对进一步衍生1组拟离子对(PITs),对应1组在–5~–180 eV梯度变化(步长为1 eV)的碰撞能;通过Online ER-MS采集所有拟离子对质谱响应,采用高斯曲线拟合每一组拟离子对的响应值,构建裂解曲线组,进而在同分异构体间比较同一离子对的裂解曲线。结果:3个同分异构体的MS1和MS2基本一致,难以区分。各组拟离子对的响应值均呈现高斯分布。同一化合物的不同候选离子对呈现出不同的裂解曲线,同分异构体的相同离子对的裂解曲线也存在差异。结论:利用Online ER-MS可以实现甘氨胆酸硫酸盐同分异构体的快速、有效区分,为胆类中药体内药效物质和作用机制的阐明提供参考。
关键词
胆类中药
在线能量分辨质谱
甘氨胆酸硫酸盐
同分异构体
裂解曲线组
Keywords
animal gallbladder-derived Chinese medicine
online energy-resolved mass spectrometry
glycineconjugated bile acid sulfates
isomer
breakdown graph set
分类号
R284 [医药卫生—中药学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于LC-MS/MS技术同时定量分析片仔癀中特征胰酶水解肽
李文正
刘文静
曹妍
李玮
赵晨
刘丛盛
宋青青
宋月林
《中国现代中药》
CAS
2023
0
在线阅读
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职称材料
2
胆类中药体内代谢产物甘氨胆酸硫酸盐同分异构体的区分
张珂
李玮
王艳敏
龚兴成
曹丽波
宋月林
宋青青
屠鹏飞
《中国现代中药》
CAS
2021
0
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