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土壤假单胞菌亚磷酸盐脱氢酶的基因克隆和原核表达及其酶活分析
被引量：
6
1
作者
袁航
罗著
+5 位作者
杨玉梅
刘延娟
高艳秀
刘娴
龚明
邹竹荣
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期130-137,共8页
亚磷酸盐脱氢酶(PTDH)以NAD+为辅助因子催化亚磷酸盐氧化生成正磷酸盐和NADH,在辅酶再生和基于亚磷酸盐的磷利用等方面有着潜在重大的应用价值。以土壤宏基因组DNA为模板,采用两轮PCR扩增得到全长亚磷酸盐脱氢酶基因PsPtx。通过酶切将...
亚磷酸盐脱氢酶(PTDH)以NAD+为辅助因子催化亚磷酸盐氧化生成正磷酸盐和NADH,在辅酶再生和基于亚磷酸盐的磷利用等方面有着潜在重大的应用价值。以土壤宏基因组DNA为模板,采用两轮PCR扩增得到全长亚磷酸盐脱氢酶基因PsPtx。通过酶切将它克隆到质粒pET32a(+)中,构建了原核表达载体pET(PsPtx)。序列分析表明,PsPtx基因的完整编码区大小为1 011 bp,其推导蛋白由336个氨基酸组成,理论分子量大小为36.5 kD。保守结构域预测分析表明PsPtx编码蛋白属于亚磷酸盐脱氢酶,含有保守的NAD+结合基序和催化功能残基。系统进化树分析显示PsPtx基因来源于一无法确定种名的土壤假单胞菌。另外,PsPtx基因经IPTG诱导能在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,重组PsPtx蛋白用组氨酸标签亲合层析纯化,其以亚磷酸钠盐为底物的酶比活性为3.75 U/mg。该PsPtx功能基因的获得为其后续应用研究打下了必要的基础。
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关键词
土壤假单胞菌
亚磷酸盐脱氢酶
基因克隆
原核表达
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职称材料
题名
土壤假单胞菌亚磷酸盐脱氢酶的基因克隆和原核表达及其酶活分析
被引量：
6
1
作者
袁航
罗著
杨玉梅
刘延娟
高艳秀
刘娴
龚明
邹竹荣
机构
云南师范大学生命科学学院云南省生物质能源和环境生物技术重点实验室教育部生物质能源持续发展和应用工程研究中心
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第8期130-137,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31460067
31760077)
文摘
亚磷酸盐脱氢酶(PTDH)以NAD+为辅助因子催化亚磷酸盐氧化生成正磷酸盐和NADH,在辅酶再生和基于亚磷酸盐的磷利用等方面有着潜在重大的应用价值。以土壤宏基因组DNA为模板,采用两轮PCR扩增得到全长亚磷酸盐脱氢酶基因PsPtx。通过酶切将它克隆到质粒pET32a(+)中,构建了原核表达载体pET(PsPtx)。序列分析表明,PsPtx基因的完整编码区大小为1 011 bp,其推导蛋白由336个氨基酸组成,理论分子量大小为36.5 kD。保守结构域预测分析表明PsPtx编码蛋白属于亚磷酸盐脱氢酶,含有保守的NAD+结合基序和催化功能残基。系统进化树分析显示PsPtx基因来源于一无法确定种名的土壤假单胞菌。另外,PsPtx基因经IPTG诱导能在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,重组PsPtx蛋白用组氨酸标签亲合层析纯化,其以亚磷酸钠盐为底物的酶比活性为3.75 U/mg。该PsPtx功能基因的获得为其后续应用研究打下了必要的基础。
关键词
土壤假单胞菌
亚磷酸盐脱氢酶
基因克隆
原核表达
Keywords
soil Pseudomonas species
phosphite dehydrogenase
gene cloning
prokaryolic expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
土壤假单胞菌亚磷酸盐脱氢酶的基因克隆和原核表达及其酶活分析
袁航
罗著
杨玉梅
刘延娟
高艳秀
刘娴
龚明
邹竹荣
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
6
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